重慶三峽庫區肉牛結核病布魯菌病的調查

李前勇,，張德志，曹立亭，熊仲良，吳柏青，左福元

（1.西南大學榮昌校區動醫系，重慶 榮昌 402460；2.重慶市動物疫病防控中心，重慶 渝北 401120；3.西南大學榮昌校區動科系，重慶 榮昌 402460）

重慶三峽庫區肉牛結核病布魯菌病的調查

李前勇1,，張德志1，曹立亭1，熊仲良2，吳柏青1，左福元3

（1.西南大學榮昌校區動醫系，重慶 榮昌 402460；2.重慶市動物疫病防控中心，重慶 渝北 401120；3.西南大學榮昌校區動科系，重慶 榮昌 402460）

采用牛提純結核菌素皮內變態反應結合γ-干擾素試驗、虎紅平板凝集試驗、試管凝結試驗及ELISA法分別對重慶三峽庫區肉牛結核病、布魯菌病進行了抽樣檢測。結果顯示，該區域肉牛結核病陽性檢出率為1.2%，布魯菌病陽性檢出率為1.04%。其中，庫區東北部區縣肉牛結核病、布魯菌病的陽性檢出率均為最高，分別為1.83%、1.14%；3種肉牛養殖規模條件下，個體散養農戶牛群結核病、布魯菌病的陽性檢出率均為最高，分別為2.21%、2.94%；所調查的3個年齡段牛群中，19月齡以上牛群結核病、布魯菌病的陽性檢出率最高，分別為2.91%、4.85%。

重慶三峽庫區；肉牛；結核病；布魯菌病

牛結核病和布魯菌病是由牛結核分枝桿菌（Mycobacterium bovis）、布魯菌屬細菌（Genus Brucella）所引起的兩種重要人畜共患傳染病，流行較廣，在世界各地均有分布，對養牛業生產和人類健康均構成了嚴重威脅，是世界衛生組織（OIE）列為強制通報的疾病，我國列為B類動物疫病［1-3］。牛結核病、布魯菌病在我國養牛業生產中較易發生，每年都有相關報道，但多偏向于奶牛，而對于肉牛結核病、布魯菌病的報道卻很少。我國是世界第4大養牛國，牛肉年產量達679.5萬噸，近年來肉牛養殖發展勢頭較好［1］；重慶三峽庫區位于我國西南肉牛主要產區，可利用草資源豐富，2001年市政府實施了草食牲畜百萬工程項目，促進了該市肉牛養殖業的快速發展，據報道，2010年重慶市肉牛存欄量已達140余萬頭［2］，但尚未見我市肉牛結核病、布魯菌病的調查報道。為此，我們于2012-2013年對重慶三峽庫區肉牛結核、布魯菌的感染情況進行了調查，以期為該區域肉牛結核病、布魯菌病制定科學的防制對策提供依據。

1　材料與方法

1.1調查牛只以重慶三峽庫區巫山、奉節、云陽、開縣、萬州、梁平、忠縣、石柱、墊江、豐都、長壽、涪陵、渝北、巴南、江津等15區縣肉牛為調查對象，按規模化牛場（存欄牛＞500頭）、肉牛養殖專業戶及個體散養農戶3種養殖方式，豐都、云陽、石柱3個肉牛養殖優勢區縣各選擇規模場2個、養殖專業戶5個、散養農戶5個，其余區縣各選擇養殖專業戶5個、散養農戶5個，按抽樣比例5%確定調查牛只，共得1 249頭牛只作為調查試驗對象。

1.2試驗試劑牛提純結核菌素（哈藥集團生物疫苗有限公司，批號：201007）；牛結核分枝桿菌γ-干擾素檢測試劑盒（瑞士進口分裝，北京測迪科技有限公司）；牛布魯菌病陽性、陰性血清（中國獸醫藥品監察所，批號：201104）；虎紅平板凝集診斷抗原、試管凝集診斷抗原（中國獸醫藥品監察所，批號：201110）；牛布魯菌病ELISA檢測試劑盒（美國IDEXX公司產品，P04130-2）。

1.3試驗方法

1.3.1結核病的檢測按照《動物結核病診斷技術（GB/T18645-2002）》，采用提純結核菌素皮內變態反應對參試肉牛進行檢測，依據國標規定進行陽性判斷。對陽性病牛再用γ-干擾素試驗［3］進行復檢。

1.3.2布魯菌病的檢測依據《動物布魯氏菌病診斷技術（GB/T 18646-2002）》，對參試肉牛先采用虎紅平板凝集試驗進行初篩，再用試管凝結試驗對初篩陽性樣本進行復檢；對凝集試驗呈現陽性、可疑樣本運用酶聯免疫吸附試驗［4］進行最終檢測。

2　結果

2.1重慶三峽庫區肉牛結核病、布魯菌病檢出情況1 249頭參試肉牛結核病分別采用提純結核菌素皮內變態反應（PPD皮內注射試驗）、γ-干擾素試驗的檢出情況，見表1。PPD皮內注射試驗與γ-干擾素試驗檢出牛只的陽性符合率為78.95%。

表1　重慶三峽庫區肉牛結核病調查結果

參試肉牛布魯菌病分別采用血清虎紅平板試驗、試管凝集試驗及酶聯免疫吸附試驗的檢出情況，見表2。比較3種檢測方法，試管凝集試驗與虎紅平板試驗的陽性符合率為81.25%，酶聯免疫吸附試驗法與試管凝集試驗法的陽性符合率為100%。

2.2不同飼養規模下，肉牛結核病、布魯菌病陽性情況結果表明，不同飼養規模下，重慶三峽庫區肉牛結核病、布魯菌病的陽性檢出率表現為散養農戶牛群＞專業養殖戶牛群＞規模化養殖場，見表3。

表2　重慶三峽庫區肉牛布魯菌病調查結果

表3　重慶三峽庫區三種飼養規模下牛結核病、布魯菌病調查結果

2.3不同年齡肉牛群結核病、布魯菌病陽性情況結果表明，重慶三峽庫區19月齡以上牛群結核病、布魯菌病的陽性檢出率均為最高，6月齡以下犢牛群所檢兩種病的陽性率最低，其中布魯菌病陽性率為0。見表4。

表4　重慶三峽庫區不同年齡肉牛結核病、布魯菌病調查結果

2.4不同地理區域牛群結核病、布魯菌病陽性情況對重慶三峽庫區東北部（包括巫山、奉節、云陽、開縣、萬州、梁平）、庫區中部（墊江、忠縣、石柱、豐都、涪陵）及庫區西南部（有江津、渝北、巴南、長壽）肉牛結核病、布魯菌病調查結果進行比較，結果表明，庫區東北部區縣肉牛群結核病、布魯菌病的陽性率為最高，庫區西南部肉牛結核病未檢出，但該區域布魯菌病陽性卻高于庫區中部。見表5。

表5　重慶三峽庫區不同區域牛群結核病、布魯菌病調查結果

3　討論

據記載，牛結核病于1955年在我國牛群中的檢出率高達36.4%［5］，1952-1982年間，我國牛羊布魯菌病的血清陽性率高約41.27%［6］。以后，我國獸醫科技人員對上述兩種疾病均有較多報道。重慶三峽庫區是我國牛業生產的主要區域之一，進入21世紀以來，在市政府實施“草食牲畜百萬工程”項目的帶動下，庫區肉牛養殖業進入了快速發展時期，截止目前，該區域年存欄肉牛已達到180萬頭，但尚未見肉牛結核病、布魯菌病流行病學的報道。本試驗對重慶三峽庫區15區縣肉牛群進行了牛結核病、布魯菌病的隨機抽樣調查，結果表明，結核病的陽性檢測率為1.2%，布魯菌病的陽性檢出率為1.04%。本調查結果比新疆［7］、青海湟中地區［8］、陜西［9］等我國養牛業優勢省區奶牛結核病感染率的報道略高，但卻顯著低于郭開彬［5］對四川某縣奶牛場結核病的陽性檢出率（25.57%）、程振濤等［10］對貴州省某種牛場牛結核病感染率（9.32%）和布魯菌病感染率（2.48%）的報道。我國《動物布魯菌病控制技術規范》（NY/T907-2004）及《牛結核菌病防治技術規范》（2009）規定，牛魯桿菌病省級控制標準為牛群布魯菌病的陽性率應低于1.0%（試管凝結法）；牛結核病省級控制、凈化標準為牛群的陽性率應低于0.05%（PPD法），由此說明，重慶三峽庫區肉牛結核病、布魯菌病的防控未達到國家規定的控制或凈化標準。

我國動物結核菌病診斷技術（GB/T 18645-2002）規定，牛結核病的檢測應使用牛結核分支桿菌PPD皮內變態反應試驗進行。然而，采用牛結核分支桿菌PPD皮內變態反應試驗檢查牛結核病存在檢出假陽性［12］，γ-干擾素試驗法是一種新型的牛結核病診斷方法，已被OIE認定為惟一的輔助診斷試驗，該法檢測牛結核病具有特異性好、靈敏度高等優點［11］。本試驗過程中，采用了γ-干擾素試驗法對PPD法檢出陽性牛進行再次檢測，共剔除假陽性牛4頭，PPD皮內注射試驗與γ-干擾素試驗檢出牛只的陽性符合率為78.95%。這一結果與陳祥等［3］的報道基本一致。動物布魯菌病診斷技術（GB/T 18646-2002）規定，牛布魯菌病應使用虎紅平板凝集結合試管凝集試驗進行檢測；但是，目前研究認為，這種方法存在特異性、敏感性不高的缺點［12］，牛布魯菌病酶聯免疫吸附試驗檢測法是OIE2002年列為用于牛布魯菌病檢測的一種新方法，該法具有快速、方便、特異、敏感等特點［4］，并有逐漸代替傳統經典的虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗的趨勢。本研究在試驗過程中，對試管凝集試驗檢測出的陽性牛血清樣本，采用美國IDEXX公司出品的牛布魯菌病ELISA檢測試劑盒進行了再次檢測，結果該法與試管凝集試驗檢查的陽性符合率為100%，這一結果與宮曉煒等［4］的報道一致。

對重慶三峽庫區不同飼養規模、不同年齡、不同區域肉牛群牛結核病、布魯菌病的檢出情況進行分析，發現庫區肉牛結核病、布魯菌病陽性檢出率均表現為散養農戶牛群＞專業養殖戶牛群＞規模化養殖場；19月齡以上牛群結核病、布魯菌病的陽性檢出率均為最高，6月齡以下犢牛群所檢兩種病的陽性率最低；庫區東北部區縣肉牛群結核病、布魯菌病的陽性率均為最高，庫區西南部肉牛結核病卻未檢出。造成這種現象的原因可能是庫區屬于高山地區，肉牛飼養個體農戶分散，牛疫病防控知識傳遞不暢，開展結核病、布魯菌病檢測工作有實際困難；19月齡以上肉牛多為種牛和繁殖母牛，這些牛群經濟價值高，即使過去表現檢疫陽性，也因經濟上的原因實行淘汰有困難，同時該牛群飼喂時間長，易與羊、豬等結核病、布魯菌病易感動物接觸，致使感染幾率升高；庫區東北部是重慶市的偏遠山區，信息到達不暢，養牛戶牛疫病防控意識淡薄，因而造成了該區域內牛群結核病、布魯菌病的陽性檢出率最高的局面。

本結果表明，重慶三峽庫區肉牛群結核病、布魯菌病的防控均未達到國家規定的控制或凈化標準，并存在一定的疫病流行風險。建議當地應切實開展肉牛結核病、布魯菌病的檢疫，加大宣傳力度，搞好活畜的市場監管，有效控制肉牛結核病、布魯菌病的蔓延。

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Investigation of Tuberculosis and Brucellosis in Beef Cattlefrom ThreeGorges Reservoir of Chongqing

LI Qian-yong1，ZHANG De-zhi1，CAO Li-ting1，XIONG Zhong-liang2，WU Bai-qing1，ZUO Fu-yuan3
（1.The Department of Veterinary Medicine，Southwest University Rongchang Campus，Chongqing 402460，China；2.Center for Animal Disease Control and Prevent of Chongqing，Chongqing 401120，China；3.The Department of Animal Science，Southwest University Rong-chang Campus，Chongqing 402460，China）

Detection of tuberculosis and brucellosis in beef cattle from three gorges reservoir of Chongqing was performed by methods including bovine purified tuberculin intradermal allergic combine gamma-interferon test，rose bengal precipitation test，standard tube agglutination test，and ELISA.Our results showed that the positive rate of tuberculosis was 1.2%，and brucellosis was 1.04%.The positive rates of tuberculosis and brucellosis in beef cattle from northeastern counties in the reservoir area were higher than that of libraries in Central and Southwest，which were 1.83%and 1.14%，respectively.The tuberculosis and brucellosis positive rates in individual backyard farm-raised cattles were the highest，which were 2.21%and 2.94%，respectively.The positive rate in cattle older than 19 months was also the highest，which were 2.91%and 4.85%，respectively.

Three Gorges Reservoir of Chongqing；Beef Cattle；Tuberculosis；Brucellosis

S858.23

A

0529-6005（2016）04-0003-03

2015-03-02

國家科技支撐計劃（2011BAD36B01）；重慶市科技支撐示范工程項目（jcsf121-2012-01-1）

李前勇（1966-），男，副教授，博士，研究方向為肉牛疾病防控，E-mail：qianyong_l@126.com