川崎病患者糖皮質(zhì)激素受體、IL-17A、IL-6檢測的臨床意義*

陜西省人民醫(yī)院兒科(西安710068)

張曉燕 吳守振△ 劉春風(fēng) 周 南▲

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川崎病患者糖皮質(zhì)激素受體、IL-17A、IL-6檢測的臨床意義*

陜西省人民醫(yī)院兒科(西安710068)

張曉燕 吳守振△劉春風(fēng) 周 南▲

目的：探討糖皮質(zhì)激素受體(GR)表達(dá)與IL-17A、IL-6水平在川崎病(KD)中的變化及相關(guān)性。方法：測定丙種球蛋白(IVIG)治療前后的KD組與對照組GR表達(dá)及IL-17、IL-6水平。結(jié)果：①與對照組相比KD組GRα、GRβ表達(dá)及IL-17A、IL-6水平顯著增加(P<0.05)；IVIG治療后,KD組GRα、GRβ表達(dá)及IL-17A、IL-6水平較IVIG治療前顯著降低(P<0.05)。②KD組IL-17A、IL-6水平分別與 GRα表達(dá)正相關(guān)(r= 0.4163,P<0.01；r= 0.3408,P<0.01),與GRβ表達(dá)無相關(guān)性(r= 0.1416,P>0.05；r= 0.1669,P>0.05)；IVIG治療后,GRα/GRβ比值明顯下降(2.45±0.91, 1.47±0.30 ,P< 0.01)。結(jié)論：KD早期應(yīng)用糖皮質(zhì)激素(GC)治療可能會(huì)提高抗炎作用。

川崎病(KD)是一種急性全身性血管炎綜合征。在KD急性期,外周血T細(xì)胞異常激活和B細(xì)胞多克隆激活，伴隨大量促炎性細(xì)胞因子釋放。Th17細(xì)胞的主要效應(yīng)因子IL-17A的高表達(dá)已證實(shí)與自身免疫性疾病有關(guān)。糖皮質(zhì)激素(GC)被廣泛地用于治療各種自身免疫性血管炎,其通過與糖皮質(zhì)激素受體(GR)結(jié)合后激活下游靶基因發(fā)揮作用。在許多自身免疫性疾病,已證實(shí)GRα基因的高表達(dá)與皮質(zhì)類固醇的敏感性有關(guān)[1]。但是KD中GR的表達(dá)很少報(bào)道。本研究中,我們探討了GR與IL-17A、IL-6水平在KD中的變化及相關(guān)性,為GC在KD中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

資料與方法

1 一般資料 2013年8月至2015年1月間的30例KD患兒為KD患者組(男22例,女8例；年齡5月至6歲)。KD患兒均接受2 g/(kg·次)靜脈用丙種球蛋白(IVIG)治療。30例健康兒童(男22例,女8例；年齡3個(gè)月至5.6歲)為對照組。兩組間性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。KD入組條件：KD診斷根據(jù)第5版KD診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]；病程≤10 d,入組前未予非甾體抗炎藥及IVIG治療。發(fā)熱第1天為川崎病急性期第1天,同時(shí)排除先天性心臟病,糖尿病及其它自身免疫性疾病。

2 檢測方法 ①分別于入院次日清晨 6～8點(diǎn)或入院當(dāng)日2 h 內(nèi)(IVIG 前)及 IVIG后第5～7天抽取靜脈血4 ml，對照組抽取靜脈血4 ml；血標(biāo)本置于EDTA抗凝管。外周血單核細(xì)胞(PBMCs)由聚蔗糖密度梯度分離后做流式分析。②用TRIzol 試劑盒(Takara,Japan)提取CD4+T 細(xì)胞的總RNA。量化后2 μg RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。目標(biāo)基因GRα、GRβ和內(nèi)參基因β-肌動(dòng)蛋白通過實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增。檢測步驟按說明書操作。③血漿IL-6、IL-17A水平用CBA試劑盒檢測,按說明書操作。

結(jié) 果

1 IVIG 治療前后GRα、GRβ與IL-17A、IL-6水平比較 見附表。KD患兒治療前GRα、GRβ及IL-17A、IL-6水平明顯高于治療后及對照組(P<0.05)。IVIG治療后GRα、GRβ的表達(dá)及IL-17A、IL-6水平與治療前比較明顯下降(P<0.05)，但仍高于對照組(P<0.05)。

附表 IVIG治療前后糖皮質(zhì)激素受體及細(xì)胞因子水平比較

注：與治療后及對照組比較，*P<0.05；與對照組比較，△P<0.05

2 IL-17A、IL-6和GRα、GRβ表達(dá)的相關(guān)性 見附圖。KD患兒的IL-17A、IL-6 水平與 GRα表達(dá)正相關(guān)(r=0.4163，P<0.01；r=0.3408，P<0.01) (附圖 A、B)，而IL-17A、IL-6水平與GRβ表達(dá)無相關(guān)性 (r=0.1416，P>0.05；r=0.1669，P>0.05) (附圖 C、D)。

附圖 IL-17A, IL-6水平與 GRα、GRβ表達(dá)的相關(guān)性

3 KD患兒治療后GRα/GRβ比值變化 IVIG治療后GRα/GRβ值明顯下降(治療前為2.45±0.91，治療后為1.47±0.30，P<0.01)。

討 論

KD是一種與免疫功能紊亂有關(guān)的系統(tǒng)性血管炎,常見于嬰幼兒。冠脈損害(CAL)是KD最嚴(yán)重的遠(yuǎn)期并發(fā)癥。KD的治療包括IVIG和阿司匹林。GC可以抑制許多促炎性細(xì)胞因子的合成,如：IL-1、IL-2、IL-6、IL-12等，因此被用于治療各種血管炎[3]。在KD患兒的急性期,這些炎癥因子都有升高。有研究表明早期GC聯(lián)合IVIG治療KD未增加CAL的發(fā)生率,且對于初次IVIG治療無反應(yīng)的KD患兒,聯(lián)合GC治療方案與單純再次給予IVIG治療方案相比較,在心臟冠脈預(yù)后方面優(yōu)于后者[4-5]。GC通過與GR相結(jié)合而發(fā)揮作用,GR包括GRα和 GRβ,GRα主要介導(dǎo)炎性反應(yīng),GRα的密度和親和力與GC的效力呈正相關(guān)。GRβ缺乏與GC結(jié)合的能力,通過形成GRα/GRβ異二聚體抑制GRα介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活[3]。我們的研究證實(shí)KD患兒的GRα和GRβmRNA的表達(dá)顯著升高,特別是GRα,IVIG治療后,GRα和GRβ表達(dá)較治療前明顯降低。GRα上調(diào)會(huì)提高GC的敏感性,進(jìn)而增加GC的效力,因此生理劑量的GC在KD早期發(fā)揮重要作用。在恢復(fù)期GRα表達(dá)水平下降,GC的效力也減少。我們的另一組研究顯示,KD患兒急性期GRα水平與對照組相近,可能與研究對象、采血時(shí)間及GR檢測方法有關(guān)[6]。但均表明受體水平的調(diào)控在KD的抗炎機(jī)制中發(fā)揮重要作用。因此,在KD早期應(yīng)用GC可能會(huì)提高抗炎作用。

IL-6是一種由T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞釋放的促炎性細(xì)胞因子,與KD急性期相關(guān)。Shimizu 等[7]報(bào)道KD急性期患兒外周血T細(xì)胞中IL-17水平和Th17細(xì)胞水平明顯升高。IL-6會(huì)減少初始CD4+T細(xì)胞分化為Th17細(xì)胞, IL-17也會(huì)減少IL-6的表達(dá)。已知IL-6 會(huì)激活下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPA),引起GC等類固醇激素釋放,可以起到自身免疫調(diào)節(jié)的作用。我們的研究顯示KD患兒的IL-17A和IL-6水平明顯高于對照組 (P<0.05), IVIG治療后較治療前明顯下降 (P<0.05),與這些研究相一致。但是GRα、GRβ的表達(dá)及IL-17A、IL-6的血清水平仍高于健康兒童，考慮與尚處于疾病恢復(fù)期有關(guān)。

KD患兒PBMCs中NF-κB激活和IL-6、IL-17水平明顯增高。在細(xì)胞培養(yǎng)模型中,GC通過增加亮氨酸拉鏈蛋白基因和抑制NF-κB的表達(dá)抑制炎癥反應(yīng)。我們的結(jié)果表明KD患兒的IL-6和IL-17A的水平與GRα表達(dá)明顯正相關(guān)，提示這兩種細(xì)胞因子的過度表達(dá)會(huì)提高GRα的表達(dá)。由IL-6引起的GC水平升高可能是適應(yīng)GR水平上調(diào)的結(jié)果，特別是GRα水平。因此，KD患兒早期給予GC會(huì)增強(qiáng)抗炎反應(yīng)。IL-17A可能通過上調(diào)GRβ的表達(dá)，降低GC在細(xì)胞凋亡和基因調(diào)節(jié)中的作用，導(dǎo)致皮質(zhì)類固醇抵抗[8]。我們的研究顯示IL-17A的表達(dá)與 GRβ表達(dá)沒有相關(guān)性,而與GRα的表達(dá)相關(guān),這可能說明GRβ的表達(dá)與 GC的效力無關(guān),在KD早期可能不存在皮質(zhì)類固醇抵抗。有研究報(bào)道GRα/GRβ 比值在系統(tǒng)性紅斑狼瘡和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疾病的活動(dòng)性方面發(fā)揮重要作用，特別是GRα低表達(dá)。當(dāng)病情惡化時(shí),GRα 表達(dá)減少,這可能會(huì)減弱GC的效力[9]。我們的研究表明KD患兒的 GRα/GRβ比值在丙球治療后明顯下降。這些結(jié)論進(jìn)一步支持KD患兒早期應(yīng)用GC是恰當(dāng)?shù)模覀冃枰M(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行研究。

本研究結(jié)果提示：KD早期應(yīng)用GC可能會(huì)提高抗炎作用,且可能不存在皮質(zhì)類固醇抵抗,為KD急性期使用GC治療提供理論依據(jù)。同時(shí),由于IVIG治療價(jià)格昂貴,GC聯(lián)合阿司匹林治療KD無疑將是一種經(jīng)濟(jì)的治療方案,但還需要更多的臨床研究提供依據(jù)。

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(收稿：2016-03-15)

*陜西省自然科學(xué)基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目(2014JM2-8184)

△西安市兒童醫(yī)院兒科疾病研究所

▲通訊作者

黏膜皮膚淋巴結(jié)綜合征 免疫球蛋白類, 靜脈內(nèi) 受體，糖皮質(zhì)激素 白細(xì)胞介素-6白細(xì)胞介素-17

R725

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2016.10.053