酶聯免疫吸附試驗、膠體金法和化學發光法檢測孕婦人巨細胞病毒感染的對比研究

西電集團醫院檢驗科(西安 710077)

李 欣 李萬順△ 王海寧

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酶聯免疫吸附試驗、膠體金法和化學發光法檢測孕婦人巨細胞病毒感染的對比研究

西電集團醫院檢驗科(西安 710077)

李 欣 李萬順△王海寧

目的：分析酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、膠體金法和化學發光法檢測孕婦人巨細胞病毒(HCMV)特異性抗體IgG、IgM的價值。方法：納入862例孕婦，分別采用ELISA法、膠體金法和化學發光法檢測IgG及IgM抗體水平，并計算3種方法診斷孕婦HCMV感染的靈敏度、特異度和陽性預測值，對3組結果進行比較。結果：ELISA法、膠體金法及化學發光法檢測得HCMV IgG抗體的陽性率分別為90.37%、46.06%、91.88%，ELISA法及化學發光法的陽性率高于膠體金法(P<0.01)；ELISA法、膠體金法及化學發光法檢測得HCMV IgM抗體的陽性率分別為69.72%、49.54%、91.07%，化學發光法及ELISA法的陽性率顯著高于膠體金法(P<0.01)，化學發光法的陽性率高于ELISA法(P<0.05)。3種方法檢測HCMV感染的靈敏度、特異度及陽性預測值差異均有統計學意義(P<0.05),其中化學發光法的靈敏度、特異度及陽性預測值均顯著高于ELISA法和膠體金法。結論：化學發光法檢測孕婦HCMV IgG、IgM抗體水平陽性檢出率高,診斷靈敏度、特異度及陽性預測值高,可以為臨床診斷及治療提供可靠的依據。

人巨細胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)屬于皰疹病毒β亞科,為雙鏈DNA病毒,在世界范圍內感染極為普遍，臨床上多數呈隱性或潛伏感染。HCMV是引起先天性感染及圍生期感染的重要病原之一，孕婦感染HCMV后,由于內分泌和代謝功能發生改變,容易激活處于潛伏期的HCMV導致活動性感染,可以通過胎盤垂直傳播導致胎兒宮內感染及經產道感染HCMV,可致流產、死胎、胎兒發育畸形、新生兒出生缺陷及死亡等嚴重后果,死亡率達50%～80%[1-2]。因此,孕婦HCMV感染檢測成為國內外圍生醫學研究的熱點之一。機體感染HCMV后可以產生IgG及IgM抗體[3]，本研究采用臨床常用的酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、膠體金法及化學發光法檢測孕婦HCMV特異性抗體IgG及IgM，分析上述3種檢測方法對HCMV活動性感染的診斷價值。

資料與方法

1 一般資料 選擇2014年3月至2015年6月在我院行孕期檢查的862例孕婦作為研究對象，均行HCMV IgG、IgM抗體檢測，年齡20～41歲，平均26.1±3.4歲，均無明確的HCMV感染病史或相關臨床表現，所有受檢者均知情同意并簽署知情同意書。

2 標本采集 抽取受檢者空腹靜脈血2 ml，置于無菌一次性非抗凝真空管中，室溫靜置1 h后以2500 轉/min離心20 min，分離血清進行抗體檢測。

3 檢測方法及結果判斷 ①ELISA法：檢測試劑盒購自北京貝爾生物工程有限公司,嚴格按照說明書要求操作。重復3次取平均值,實驗設立空白對照、陽性對照、陰性對照孔及室內質控孔,采用Rayto RT-6100酶標儀進行測定,在450 nm和630 nm波長處讀取吸光度值(OD),并計算臨界值(CO)：CO=陰性對照平均值+0.25。以樣品OD值/CO值<1.0為陰性,樣品OD值/CO值介于1.0～1.2為可疑陽性,樣品OD值/CO值>1.2為陽性。②膠體金法：檢測試劑購自杭州艾康生物技術有限公司，采用膠體金法快速檢測血清HCMV IgG和IgM抗體水平。水平放置檢測卡,取100 μl血清垂直加入加樣孔中,于20 min內觀察結果，如果試劑板出現兩條紫紅色條帶，其中一條位于測試區內，另一條位于質控區內，則判斷為陽性；如果測試區內未出現紫紅色條帶，僅質控區出現一條紫紅色條帶，則判斷為陰性。如果質控區未出現紫紅色條帶，則試劑作廢。③化學發光法：采用羅氏cobase 411電化學發光分析儀及該公司原裝試劑，嚴格按照說明書操作，IgG及IgM檢測結果以Index>0.50判斷為陽性。

4 統計學方法 采用SPSS 10.0軟件進行統計學分析,不同檢測方法計數資料比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 不同檢測方法對HCMV IgG抗體水平檢測結果 見表1。862例孕婦中HCMV IgG抗體的陽性率分別為90.37%、46.06%、91.88%,ELISA法及化學發光法的陽性率均顯著高于膠體金法(P<0.01)；而ELISA法與化學發光法的陽性率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

表1 不同檢測方法對HCMV IgG抗體水平檢測結果[n(%)]

注：與膠體金法比較，*P<0.01

2 不同檢測方法對HCMV IgM抗體水平檢測結果 見表2。862例孕婦中HCMV IgM抗體的陽性率分別為69.72%、49.54%、91.07%，化學發光法及ELISA法檢測得的陽性率顯著高于膠體金法(P<0.01)；且化學發光法的陽性率高于ELISA法(P<0.05)。

表2 不同檢測方法對HCMV IgM抗體水平檢測結果[n(%)]

注：與ELISA法比較，*P<0.05；與膠體金法比較，#P<0.05，△P<0.01

3 不同檢測方法對HCMV感染的診斷效能 見表3。以最終診斷結果作為標準,3種方法檢測HCMV感染的靈敏度、特異度及陽性預測值比較，差異均有統計學意義(χ2=7.31、9.20、11.66,P<0.05),其中化學發光法的靈敏度、特異度及陽性預測值均顯著高于ELISA法和膠體金法,膠體金法的靈敏度、特異度及陽性預測值均最低。

表3 不同檢測方法對HCMV感染的診斷效能(%)

討 論

目前實驗室檢查是診斷HCMV感染的主要方法之一，臨床上多用ELISA法、膠體金法和化學發光法進行血清學檢測。本研究結果顯示，ELISA法、膠體金法及化學發光法檢測得IgG抗體及IgM抗體的陽性率分別為90.37%、46.06%、91.88%和69.72%、49.54%、91.07%，其中ELISA法及化學發光法檢測出IgG抗體及IgM抗體的陽性率均顯著高于膠體金法(P<0.01)，化學發光法檢測得IgM抗體的陽性率顯著高于ELISA法(P<0.05),與李嬌[4]研究結果一致。分析膠體金法檢測IgG和IgM抗體陽性率較低的原因可能是標記物不純，容易導致漏診，而且膠體金法采用肉眼直接判斷結果的陰性和弱陽性，當血清標本中抗體水平較低時,容易出現檢測條帶不明顯而得出假陰性結果,受檢測者主觀判斷的影響程度較大。

本研究結果顯示，ELISA法、膠體金法、化學發光法診斷HCMV感染靈敏度分別為80.60%、57.93%、98.74%，特異度分別為78.06%、61.51%、93.12%，陽性預測值分別為78.92%、64.69%、92.45%，可見化學發光法的靈敏度、特異度及陽性預測值均顯著高于其他兩種方法。盡管ELISA法和膠體金法均為定性診斷方法,但ELISA法對IgG及IgM抗體的陽性檢出率和診斷HCMV感染的靈敏度均明顯高于膠體金法，然而ELISA法受到標本溶血、加樣時間及操作污染等多種人為因素的影響，容易出現假陽性和假陰性結果，從而降低了結果的準確性。化學發光法能夠對IgG及IgM抗體水平進行定量分析，且整個檢測過程由機器完成,避免了操作者等外界因素對檢測過程和結果判斷的影響,其對IgG及IgM抗體的陽性檢出率和診斷HCMV感染的靈敏度、特異度和陽性預測值均明顯優于ELISA法和膠體金法,可以作為目前檢測孕婦HCMV感染IgG及IgM抗體水平的理想方法,適用于臨床上對HCMV感染的大樣本初檢。

然而,本研究中3種方法在檢測HCMV感染方面均存在不同程度的假陽性結果,因此建議臨床上不管采用何種檢測方法，需采用另一種方法對檢測結果進行復檢,以保證檢測結果真實可靠。

[1] Yan XC, Wang JH, Wang B,etal. Study of human cytomegalovirus replication in body fluids, placental infection, and miscarriage during the first trimester of pregnancy [J]. J Med Virol,2015, 87(6): 1046-1053.

[2] Wang X,Li X,Hu S,etal. Rapid detection of active human cytomegalovirus infection in pregnancy using loop-mediated isothermal amplification [J]. Mol Med Rep, 2015, 12(2): 2269-2274.

[3] 肖 兵,熊 慶. 妊娠期人巨細胞病毒感染對母兒的影響及診治[J].中國實用婦科與產科雜志,2011,27(8)：569-571.

[4] 李 嬌. 實驗室兩種檢測小兒巨細胞病毒方法的比較[D]. 沈陽：中國醫科大學碩士學位論文,2013:1-2.

(收稿：2016-01-20)

△陜西省千陽縣人民醫院

巨細胞病毒感染/診斷 酶聯免疫吸附測定/方法 @膠體金法 @化學發光法

R446.1

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2016.10.052