鮮蘆根水提物對小鼠細胞免疫功能的影響

張　克，牛國順，鄧　莉，李寅超

(1.河南省中醫藥研究院附屬醫院，河南 鄭州 450004； 2.鄭州大學藥學院，河南 鄭州 450001)

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·實驗研究·

鮮蘆根水提物對小鼠細胞免疫功能的影響

張克1，牛國順1，鄧莉2，李寅超2

(1.河南省中醫藥研究院附屬醫院，河南 鄭州 450004； 2.鄭州大學藥學院，河南 鄭州 450001)

目的：研究鮮蘆根水提物對小鼠細胞免疫功能的影響。方法：將健康昆明種小鼠隨機分為溶劑對照組，鮮蘆根水提物高劑量組(22.5 g/1kg)、中劑量組(7.5 g/kg)、低劑量組(3.75 g/kg) 4組，每組12只。灌胃，1 d 1次 ，連續14 d。采用綿羊紅細胞誘導小鼠遲發型變態反應實驗法，觀察鮮蘆根水提物對小鼠細胞免疫功能狀態的影響；計算淋巴母細胞和過渡態細胞百分率，觀察鮮蘆根水提物對小鼠淋巴細胞轉化反應的影響。結果：①與溶劑對照組對比，鮮蘆根水提物高、中劑量組小鼠24 h足跖腫脹度均增高， 其中高劑量組較之差別有統計學意義(P<0.01)。②與溶劑對照組對比，鮮蘆根水提物3個劑量組淋巴母細胞百分率和過渡態細胞百分率均有不同程度的提高，其中鮮蘆根水提物高、中劑量組淋巴母細胞百分率和高劑量組過渡態細胞百分率差別有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。結論：鮮蘆根水提物對細胞免疫功能有明顯的促進作用。

鮮蘆根水提取液/作用；細胞免疫功能；24 h足跖腫脹度；淋巴母細胞百分率；過渡態細胞百分率；動物；小鼠

鮮蘆根為禾本科多年生草本植物蘆葦Phragmitescommunis(L.) Trin的新鮮根莖[1]，甘寒質輕，入肺胃經，有清熱養陰、除煩、止嘔、利尿的作用，且有清熱而不傷胃、養陰而不留邪、藥性平和的特點。鮮蘆根成分蘆根多糖有一定的免疫促進作用，其1 000 g/L水煎劑具有抑制乙型溶血性鏈球菌作用[2]，而有關鮮蘆根水提物的免疫調節作用鮮有報道。本研究以小鼠為實驗對象，從SRBC誘導小鼠遲發型變態反應(delayed type hypersensitivity，DTH)和植物血凝素(phytohaemagglutinin，PHA)刺激淋巴細胞轉化角度，研究了鮮蘆根水提物對小鼠細胞免疫的作用。

1　材　料

1.1動物

SPF級昆明種小鼠，雄性，體質量18～22 g，由河南省實驗動物中心提供，動物生產許可證號：SCXK(豫)2010-0002。

1.2藥品、試劑與儀器

鮮蘆根采自丹江口水庫庫區，經河南中醫學院劉若庸教授鑒定為蘆葦的新鮮根莖，埋于濕沙中待用。除去殘莖、膜質狀葉片、須根和雜質，洗凈泥土，切段剪碎，放入燒瓶中，加8倍水浸泡30 min，加熱至沸，煎煮30 min，傾出藥液；殘渣加5倍量水，重復提取1次。合并2次水煎液，80 ℃水浴減壓濃縮至1 mL/g(按生藥計)，臨用前用蒸餾水稀釋成所需質量分數。綿羊紅細胞(SRBC)的制備方法[3]：無菌條件下取綿羊外頸靜脈血，置于內盛玻璃珠的滅菌錐形瓶內搖動10 min除去纖維蛋白，加入相當于羊血體積2倍的Alsever溶液搖勻，置4 ℃冰箱備用。臨用時以生理鹽水洗滌3次(每次2 000 r/min、10 min)，棄上清，用生理鹽水稀釋至所需體積比和紅細胞質量分數[3]。PHA，Sigma 公司產品，批號L8902。JJ200型電子天平，常熟市雙杰測試儀器廠產品；AR1140型電子天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司產品；DM-BA300型數碼生物顯微鏡，廈門麥克奧迪有限公司產品； TGL-16H高速離心機，珠海黑馬醫學儀器有限公司產品；游標卡尺601，哈爾濱量具刃具集團有限責任公司產品。

2　方法與結果

2.1統計學方法

2.2對小鼠遲發型變態反應的影響

取健康雄性小鼠48只，按體質量隨機分為溶劑對照組和鮮蘆根水提物低、中、高劑量組4組，每組12只。根據成人口服劑量(鮮品0.75 g/kg)，設低、中、高劑量分別為3.75，7.50，22.5 g/kg (分別相當于人體推薦量的5，10，30 倍)。按 20 μL/g 體積給小鼠灌胃，對照組灌胃等體積的生理鹽水，1 d 1次，連續 14 d 后測定免疫指標。本實驗所選指標和測定方法按照參考文獻[4]。各組小鼠腹腔注射 20 mL/L (V/V，以生理鹽水配制)的SRBC 0.2 mL，致敏后4 d，測量左后足跖厚度，同一部位測量3次，取平均值。在測量部位皮下注射 200 mL/L (V/V，以生理鹽水配制)的SRBC 20 μL，注射后24 h 測量左后足跖部厚度。以攻擊前后足跖厚度的差值(足跖腫脹度)來表示DTH的程度，結果見表1。結果顯示：與溶劑對照組對比，鮮蘆根水提物高、中劑量組小鼠24 h足跖腫脹度均增高， 其中高劑量組較之差別有統計學意義(P<0.01)。提示蘆根水提取物可增強由SRBC誘導的小鼠DTH，改善細胞免疫功能狀態的作用，即可增強小鼠的細胞免疫功能，以高劑量作用明顯。

組 別劑量/(g·kg-1)動物數/只24h足跖腫脹度/mm溶劑對照組—120.32±0.15鮮蘆根水提物高劑量組22.5120.79±0.22**鮮蘆根水提物中劑量組7.5120.48±0.24鮮蘆根水提物低劑量組3.75120.30±0.27

注：與溶劑對照組對比，**P<0.01。

2.3對小鼠淋巴細胞轉化反應的影響[5]

取健康雄性小鼠48只，分組、劑量、給藥途徑和給藥周期同2.2。各組小鼠肌注PHA 8 μg/g，1 d 1次，連續 3 d；同時，鮮蘆根水提物3個劑量組灌胃等體積相應藥液，溶劑對照組灌胃等體積蒸餾水，1 d 1次，連續14 d。第14天給藥40 min后剪尾，采血推片，Giemsa染色，油鏡下計數100個淋巴細胞中淋巴母細胞和過渡態細胞數量，計算淋巴母細胞百分率和過渡態細胞百分率，結果見表2。結果顯示：與溶劑對照組對比，鮮蘆根水提物3個劑量組淋巴母細胞百分率和過渡態細胞百分率均有不同程度的提高，其中鮮蘆根水提物高、中劑量組淋巴母細胞百分率和高劑量組過渡態細胞百分率差別有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。結果表明：鮮蘆根水提物能提高淋巴細胞的轉化程度，提高T細胞的免疫應答功能，即提高細胞免疫功能，高劑量作用較強。

表2　各組淋巴母細胞百分率、過渡態細胞百分率對比　　±s

注：與溶劑對照組對比：*P<0.05，**P<0.01。

3　討　論

蘆根鮮品來源廣泛，資源豐富，藥性平和，毒副作用小，為《中國藥典》和眾多本草著作收載的常用中藥品種。國家衛生部2002年規定鮮蘆根為藥食兩用原料[2]。DTH是一種由特異性致敏效應T細胞介導的細胞免疫應答類型。T淋巴細胞受抗原刺激后分化為特異性的致敏淋巴細胞，當同種抗原再次攻擊時，局部致敏淋巴細胞釋放出多種淋巴因子，引起以單核細胞浸潤為主的炎癥反應。炎癥反應的程度反映了機體對該抗原特異性細胞免疫力的大小。PHA刺激淋巴細胞轉化實驗[6]是利用PHA被肌肉注射后，在小鼠體內誘導活化T淋巴細胞并轉化為淋巴母細胞，以淋巴母細胞轉化率為指標判斷待試藥對細胞免疫能力的影響。本研究結果顯示，蘆根水提取物可增強由SRBC誘導的小鼠DTH，改善細胞免疫功能狀態的作用，以高、中劑量作用明顯；鮮蘆根水提物能提高淋巴細胞的轉化程度，提高T細胞的免疫應答功能，高劑量作用較強。以上均證實鮮蘆根水提物具有較好的細胞免疫功能增強作用。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015：152.

[2]凌關庭.保健食品原料手冊[M].2版.北京：化學工業出版社，2006：375.

[3]羅新舟，孫江橋.復方黃芪合劑對小鼠免疫功能影響[J].遼寧中醫藥大學學報，2014，16(1)：21-22.

[4]中華人民共和國衛生部.保健食品檢驗與評價技術規范(2003版)[S].衛生部文件,衛法監發〔2003〕42號：22-34.

[5]李儀奎，王欽茂.中藥藥理試驗方法學[M].上海：上海科學技術出版社，1991：164-165.

[6]趙艷玲，肖小河，袁海龍，等.肝得寧片對小鼠免疫功能的影響[J].中草藥，2002，33(2)：147-148.

(編輯陶珠)

1001-6910(2016)10-0068-03

R285.5

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2016.10.30

2016-02-17；

2016-05-06