用BTB快速鑒定黃連木雌雄株方法初探

楊鷺生，李國平

（1.武夷學院教務處，福建武夷山354300；2.武夷學院生態與資源工程學院，福建武夷山354300）

用BTB快速鑒定黃連木雌雄株方法初探

楊鷺生1，李國平2

（1.武夷學院教務處，福建武夷山354300；2.武夷學院生態與資源工程學院，福建武夷山354300）

用溴麝香草酚蘭（BTB）的方法，對黃連木雌雄株進行鑒別。結果表明，黃連木雌株提取液在加入溴麝香草酚蘭（BTB）溶液3 h后，溶液顏色由黃綠色轉變為褐色，而雄株提取液的顏色還是保持原來的黃綠色，隨著時間的增加，雌株提取液褐變加深，雄株無明顯變化。說明用BTB溶液鑒定黃連木雌雄株，實驗現象明顯，認為可用此方法對黃連木幼苗的性別進行初步鑒定。本實驗對黃連木幼苗雌雄株的鑒定提供了科學依據。

黃連木；BTB溶液；顏色變化；性別鑒定

黃連木（Pistacia chinesis）為漆樹科植物，原產中國，生態適應性極強，分布非常廣，是重要的荒山、荒灘造林樹種，是優質的用材樹種；同時黃連木葉繁茂而秀麗，樹冠開闊，秋天葉子顏色變成深紅色或橙黃色，故也是一種重要的木本觀葉植物。黃連木是雌雄異株植物，其種子富含油脂，含油量達40%左右，用種子油脂生產的生物柴油碳鏈長度集中在（C17～C19）之間，與普通柴油接近［1］，是一種極具開發前景的木本生物質能源樹種。黃連木生產上主要以果實和種子為收獲對象，雄株只能作為授粉樹，栽培的經濟效益較低，黃連木造林中更需要大量的雌株，因此對黃連木苗木的性別鑒定尤其是早期鑒定顯得尤為重要，對科學搭配雌雄株比例、提高栽培效益具有重要意義。

植物性別鑒定的研究，概括為形態學、生理生化、細胞學和分子生物學等幾個方面［2-3］。形態學比較簡單易行，但多數雌雄異株植物在幼苗期未表現出外部形態差異；細胞學是進行雌雄株性別鑒定的重要方法之一，分子生物學技術是最近幾年來發展起來的鑒定植物雌雄株性別的新技術、新方法，具有相對準確的特點，但對于實驗設備要求較高。理生化指標用于雌雄株幼苗的鑒定，相對于形態學鑒定較為復雜，但結果較為可靠，不失為一種切實可行的雌雄株性別鑒定方法。許多研究結果表明，植物外部性狀的表現是體內生理生化代謝的結果，依據個體在生理生化代謝上的某些差異可以達到早期鑒別性別的目的［4-6］。

溴麝香草酚藍（BTB）是一種酸堿指示劑。張雪明、龍程等人用溴麝香草酚藍法（簡稱BTB法）成功地對黃瓜、楊梅、銀杏和石刁柏的雌、雄性別差異進行了鑒別研究［7-10］。BTB的變色范圍為pH=6.0～7.6，酸性呈黃色，堿性呈藍色，中間經過綠色，通過顏色的不同變化，鑒定出雌雄株。本研究通過提取出黃連木幼葉、花蕾、樹皮中浸提物，加入BTB溶液后根據顏色變化不同，確定其雌雄株。現將研究結果報道如下：

1　材料與方法

1.1材料

材料為黃連木的幼葉、花蕾、樹皮。黃連木的雄株從莆田市仙游縣黃尾鎮石井村取得，黃連木雌株從莆田市秀嶼區東莊石碼村取得。材料采集后立即放進裝冰盒中，帶回實驗室置4℃冰箱中保存。

試劑為0.1%mol/L BTB，0.2 mol/L磷酸二氫鈉，0.2mol/L磷酸氫二鈉，9.5%氨水，0.1 mol/L鹽酸。

1.2主要設備及儀器

TDL5臺式離心機（上海上榮生化儀器廠），HH-4水浴鍋（北京市醫療設備廠），722型分光光度計（北京賓達英創科技有限公司），pH計，電子分析天平（梅特勒-托利多儀器（有限公司）等。

1.3實驗方法

選取生長健壯的雌雄植株的葉、花蕾、樹皮各0.2 g，用流水沖洗后吸干水分，加4 mL 0.1mol/L pH為6.2的磷酸緩沖液，在冰浴中研磨，研磨要快速，防止褐變，研磨好后快速裝進離心管中，蓋好，在室溫下浸提1 h，然后把提取液置于4 000 r/min的離心機中離心5 min，取上清液3 mL，加BTB溶液4～5滴，搖勻，置于30℃恒溫水浴鍋中保溫，每隔1 h記錄提取液的顏色變化，然后用722型分光光度計分別測定提取液在450、550、650 nm處的吸光值。

2　結果和分析

黃連木各部分提取液在加BTB后顏色變化情況見表1。黃連木的花蕾提取液滴入BTB溶液后顏色均變為黃綠色。隨著時間的推移，黃連木雄株提取液逐漸由黃綠色變成淡黃色到黃色，雌株提取液的顏色黃綠色，2 h后開始出現褐變，3 h后完全變成褐色。

表1　黃連木各種提取液的顏色變化

黃連木的幼葉跟花蕾的提取液變化相似，滴入BTB溶液后顏色均變為黃綠色。隨著時間的延長，黃連木雄株提取液逐漸由黃綠色—淡黃色—黃色的變化，雌株提取液的顏色黃綠色，2 h后開始出現褐變，3 h后完全變成褐色，實驗過程明顯看到雌雄株顏色變化的差異。

黃連木的樹皮跟幼葉有所不同，滴入BTB溶液后顏色均變為黃綠色。隨著時間的推移，黃連木雄株提取液的顏色逐漸變為黃綠色—淡黃色—淡黃褐色，黃連木雌株提取液為黃綠色，2 h后開始出現褐變，3 h后完全變成褐色。6 h后，雌株提取液的顏色變化不明顯，雄株提取液呈淡黃褐色。

由圖1可以看出，黃連木雌雄株花蕾提取液隨著時間的增加吸光值都增大。雌株提取液在450 nm的的吸光值急劇增大，而雄株提取液的吸光值緩慢增加。雌株提取液吸光值的增加幅度大，雄株提取液增加梯度小，從雌雄提取液吸光度差異也顯示了彼此之間的不同。

圖1　黃連木雌雄株花蕾提取液吸光值的變化

從圖2得知，黃連木幼葉跟花蕾相似，黃連木雌株提取液在5～6 h的時波長為550 nm的吸光值增加幅度最大。雄株提取液的吸光值變化幅度非常小，這也可以做為鑒定雌雄株的一個參考。

圖2　黃連木雌雄株幼葉提取液吸光值的變化

從圖3可知，黃連木雌雄株樹皮的提取液跟幼葉、花蕾有所區別。雌株樹皮提取液在1～4 h波長為450 nm時增加幅度大，而后緩慢增加。

圖3　黃連木雌雄株樹皮提取液吸光值變化

根據圖1～3的曲線圖可知，黃連木雌雄株提取液隨著時間的增加吸光值都增大。剛開始時，吸光值差距不大，隨的時間的推移，差距變大。而黃連木的花蕾和樹皮的吸光值差距較大。黃連木提取液在波長550、650 nm時吸光值變化幅度非常小，而在波長450 nm時，雌雄株提取液的吸光值變化大。

3　結論

黃連木雌雄株提取液加入BTB溶液后，1～2 h顏色變化相似。3 h開始出現明顯變化，黃連木雌株提取液由淡黃色變褐色，隨著時間的增加而加深，雄株提取液由淡黃色變黃色，隨的時間增加但顏色變化不明顯，依舊是黃色。根據這些實驗結果，在黃連木人工造林時，可以用BTB的方法測定幼苗各種提取液顏色變化以確定其雌雄，以便合理搭配人工黃連木林的雌雄株比例。

黃連木提取液在波長550、650 nm時吸光值變化幅度非常小，不利于雌雄株的對比，而在波長450 nm時，雌雄株提取液的吸光值變化大，且雌雄株提取液的吸光值不同，黃連木雌株提取液的吸光值都比雄株提取液大，這個實驗結果可作為黃連木幼苗雌雄株鑒別的參考。

用BTB法鑒定黃連木雌雄株，此方法較為快速、簡單且有效，在生產中容易掌握，為黃連木幼苗的性別初步鑒定提供了依據，但這種方法并不能從遺傳上揭示雌雄株的差異，所以，此方法只能作為黃連木幼苗雌雄株鑒定的一種輔助手段，其可靠性有待在生產實際中進一步觀察。

［1］段劼，陳婧，馬履一，等.木本油料樹種中國黃連木研究進展［J］.中國農業大學學報，2012，17（6）：171-177.

［2］李瑞麗，盧龍斗，高武軍，等.雌雄異株植物性別鑒定的研究進展［J］.廣西植物，2006，26（4）：387-391.

［3］尹立輝，詹亞光，李彩華，等.植物雌雄株性別鑒定研究方法的評價［J］.植物研究，2003，23（1）：123-128.

［4］張淑蘭，王華慶.銀杏性別的早期鑒定［J］.生物學雜志，1994，58（2）：25.

［5］許良政.銀杏雌雄株性別早期鑒別［J］.農業科技通訊，1996（4）：16.

［6］陳學好.黃瓜花性別分化的生理學研究［D］.揚州：江蘇農學院，2001.

［7］龍程，潘瑞熾.用溴麝香草酚藍鑒定石刁柏雌雄株［J］.植物生理學通訊，1991，27（3）：204-205.

［8］張雪明.利用溴麝香草酚藍鑒定楊梅和銀杏的雌雄性別［M］.武漢：中國植物生理學會第五次全國會議論文摘要，1990：228-229.

［9］龍程，潘瑞熾.影響溴麝香草酚藍法鑒定石刁柏性別的幾種因子［J］.植物生理學通訊，1992，28（2）：439-441.

［10］陳學好，陳艷萍，曹碚生，等.黃瓜雌雄株性別苗期化學鑒別方法［J］.中國蔬菜，2002，（4）：4-6.

（責任編輯：華偉平）

Preliminary Study on the Rapid Sex Identification of Pistacia Chinesis Female and Male Plants by Bromothymol Blue

YANG Lusheng1，LIGuoping2
（1.Office of Teaching Affairs，Wuyi University，Wuyishan，Fujian 354300；2.College of Ecology and Resource Engineering，WuyiUniversity，Wuyishan，Fujian 354300）

The identification of male and female plants of Pistacia chinensis was investigated by using bromothymol blue（BTB）method.Results showed that the solution color of extracts from female plants turned from kelly into brown 3 h after added in BTB solution，while the the solution color from male plants had no significant changes，maintaining the original yellow-green.As time increased，the solution color of female plants enhanced，while the the solution color ofmale plants had no changes.It was believed that the BTB staining method could be used to preliminary identify themale and female plants of Pistacia chinesis.The researchmight provide a scientific basis for the sex identification of Pistacia chinesis.

Pistacia chinesis；BTB solution；color change；sex identification

Q945.4

A文章標號：1674-2109（2016）06-0007-03

2015-01-01

福建省科技廳戰略性新興產業重點項目（2014N0030）；福建省科技創新平臺建設計劃項目（2013N2009）；福建省林業廳科學研究項目（閩林科［2013］5號）；國家級大學生創新創業訓練計劃項目（No.201410397006）；福建省科技廳項目（2016S0059）。

楊鷺生（1964-），女，漢族，高級實驗師，主要從事植物生物技術研究。