高效液相色譜法測(cè)定芪麥苓口服液中原兒茶醛含量

刁保忠，馮家龍，趙文法

（1.山東省聊城市人民醫(yī)院，山東聊城252000；2.山東省聊城市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東聊城252000）

高效液相色譜法測(cè)定芪麥苓口服液中原兒茶醛含量

刁保忠1，馮家龍2，趙文法2

（1.山東省聊城市人民醫(yī)院，山東聊城252000；2.山東省聊城市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東聊城252000）

目的建立芪麥苓口服液中丹參主要成分原兒茶醛含量測(cè)定的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱采用Diamonsil C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 m），流動(dòng)相為甲醇-0.1%冰乙酸（20∶80），檢測(cè)波長(zhǎng)為279 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為30℃。結(jié)果原兒茶醛質(zhì)量濃度在1.46～116.64 g/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 9）；平均加樣回收率為92.64%（RSD=1.49%，n=6）。結(jié)論該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，結(jié)果穩(wěn)定，可用于芪麥苓口服液中丹參主要成分原兒茶醛的含量測(cè)定。

芪麥苓口服液；原兒茶醛；含量測(cè)定；高效液相色譜法

芪麥苓口服液處方來(lái)源于聊城市人民醫(yī)院名老中醫(yī)的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由丹參、黃芪、茯苓等11味藥組方，經(jīng)水煎、濾過(guò)、濃縮、配制、灌裝、滅菌等工序制得，具有益氣養(yǎng)陰、活血通絡(luò)的功效，臨床主要用于2型糖尿病的治療和糖尿病并發(fā)癥的防治。丹參經(jīng)水煎提取后，其有效成分主要為原兒茶醛等水溶性物質(zhì)，參考2010年版《中國(guó)藥典（一部）》收載的含有丹參水煎提取物的成方制劑，大都采用了高效液相色譜（HPLC）法控制其中原兒茶醛的含量［1］。檢索相關(guān)文獻(xiàn)，多采用反相高效液相色譜法測(cè)定含有丹參的經(jīng)水煎提取工藝最終制得的復(fù)方制劑中原兒茶醛的含量［2-8］，亦有少數(shù)采用其他方法［9-11］。本試驗(yàn)中采用HPLC法對(duì)芪麥苓口服液中主要成分原兒茶醛進(jìn)行了含量測(cè)定，可用于控制芪麥苓口服液的質(zhì)量，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供依據(jù)。

1　儀器與試藥

1.1儀器

1200型高效液相色譜儀（紫外檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫公司）；LC-20A型高效液相色譜儀（PDA檢測(cè)器，日本島津公司）；BT125D型電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）。1.2試藥

原兒茶醛對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110810-201007）；芪麥苓口服液（聊城市人民醫(yī)院，批號(hào)為20140201，20140202，20140203）；甲醇（色譜純，天津賽孚瑞科技有限公司），其他化學(xué)試劑（市售，分析純）。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%冰乙酸（20∶80）；檢測(cè)波長(zhǎng)：279 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2溶液制備

對(duì)照品溶液：取原兒茶醛對(duì)照品適量，精密稱定，置量瓶中，加甲醇制成每1 mL含原兒茶醛20 μg的溶液，即得。

供試品溶液：精密量本品10 mL，加稀鹽酸調(diào)pH至1～2，用醋酸乙酯提取3次，每次20 mL，合并醋酸乙酯液，揮干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?0 mL，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

陰性對(duì)照品溶液：按處方工藝制備不含丹參的陰性對(duì)照品，按照供試品溶液制備方法操作，即得。

2.3方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明，陰性對(duì)照品溶液對(duì)測(cè)定無(wú)干擾；PDA檢測(cè)器記錄的色譜峰純度檢查，峰純度匹配度996，表明峰純度符合規(guī)定，該方法專屬性良好。色譜圖見圖1。

線性關(guān)系考察：取原兒茶醛對(duì)照品，精密稱定，制成質(zhì)量濃度為1.46，2.916，11.664，58.32，116.64 μg/mL的溶液，在擬訂色譜條件下，分別注入液相色譜儀測(cè)定，以質(zhì)量濃度（C）為橫坐標(biāo)、峰面積（A）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為A=17.764 C-4.516，r= 0.999 9（n=5）。結(jié)果表明，原兒茶醛質(zhì)量濃度在1.46～116.64 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。見表1。

圖1　高效液相色譜圖

表1　原兒茶醛線性關(guān)系考察結(jié)果（n=5）

精密度試驗(yàn)：取低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，擬訂色譜條件下進(jìn)樣10 μL，分別于1 d內(nèi)測(cè)定5次，連續(xù)測(cè)定5 d，記錄峰面積，并計(jì)算日內(nèi)和日間RSD。結(jié)果3種質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液的日內(nèi)RSD均小于1%，日間RSD小于2%，表明儀器精密度良好，符合分析要求。

重復(fù)性試驗(yàn)：對(duì)同一均勻樣品溶液，連續(xù)取樣6份，各10 mL，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定。結(jié)果的RSD為1.70%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。見表2。

表2　重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下供試品溶液，分別于0，6，12，24 h時(shí)各進(jìn)樣1次，測(cè)定供試品中原兒茶醛的含量。原兒茶醛溶液具有還原性，在環(huán)境中易被氧化分解而變色，試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)密閉操作。結(jié)果的RSD為1.20%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。見表3。

表3　穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（n=4）

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的供試品（批號(hào)為20140201）適量，加入適量原兒茶醛對(duì)照品，制成低、中、高3個(gè)不同質(zhì)量濃度的待測(cè)溶液各3份，分別測(cè)定其含量。結(jié)果見表4。

表4　原兒茶醛加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4樣品含量測(cè)定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定，以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為20140201，20140202，20140203的樣品含量分別為0.024，0.025，0.025 g/L。

3　討論

3.1色譜條件選擇

主要選擇依據(jù)供試品溶液中原兒茶醛主峰有無(wú)干擾。通過(guò)DAD檢測(cè)器對(duì)供試品中原兒茶醛的全波長(zhǎng)檢測(cè)，流動(dòng)相為甲醇-0.1%冰乙酸（20∶80），檢測(cè)波長(zhǎng)為279 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為30℃，結(jié)果供試品原兒茶醛主峰與其他雜質(zhì)峰分離良好，原兒茶醛主峰的純度因子999，在可接受的閾值內(nèi)。

3.2提取溶液考察

比較了乙醚和醋酸乙酯2種不同提取溶劑的提取效果，綜合考慮提取溶劑的安全性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)醋酸乙酯提取原兒茶醛效果相對(duì)較好，所以本試驗(yàn)中采用醋酸乙酯為提取溶劑。

綜上所述，本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，結(jié)果穩(wěn)定，可用于控制芪麥苓口服液的質(zhì)量及本品中原兒茶醛含量的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：38，456-457，579-580，835-836.

［2］蔡麗云，李子鴻，劉東文，等.骨傷康顆粒中原兒茶醛的含量測(cè)定［J］.中國(guó)藥業(yè)，2007，16（11）：23-24.

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Content Determination of the Protocatechuic Aldehyde in Qimailing Oral Liquid by HPLC

Diao Baozhong1，F(xiàn)eng Jialong2Zhao Wenfa2
（1.Liaocheng People′s Hospital，Liaocheng，Shandong，China252000；
2.Liaocheng Institute for Food and Drug Control，Liaocheng，Shandong，China252000）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the content determination of protocatechuic aldehyde in Qimailing Oral Liquid. MethodsThe Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）was used as the chromatographic column，Methanol-0.1%glacial acetic acid solution（30∶70）as mobile phase；the wavelength was 279 nm.The flow rate was 1.0 mL/min，and the column temperature was at 30℃. ResultsThelinear rangeof protocatechuicaldehyde was 1.46-116.64μg/mL（r=0.999 9），with an averagerecovery rateof 92.64%（RSD=1.49%，n=6）.ConclusionThe method is simple，accurate and stable，which could be used for the content determination of Qimailing Oral Liquid.

Qimailing Oral Liquid；protocatechuic aldehyde；content determination；HPLC

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）15-0074-03

（2016-01-14；

2016-03-29）