基于川楝子不同部位川楝素含量的古今炮制方法與臨床用量研究

黃立輝，張志國(guó)，楊磊

（1.湖南省監(jiān)獄管理局中心醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙410014；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院·國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥炮制學(xué)重點(diǎn)學(xué)科，湖南長(zhǎng)沙410007）

基于川楝子不同部位川楝素含量的古今炮制方法與臨床用量研究

黃立輝1，張志國(guó)2，楊磊2

（1.湖南省監(jiān)獄管理局中心醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙410014；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院·國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥炮制學(xué)重點(diǎn)學(xué)科，湖南長(zhǎng)沙410007）

目的建立川楝子不同部位川楝素含量的高效液相色譜法，并探討古今炮制方法及用量異同。方法以川楝素為指標(biāo)，對(duì)炒川楝子果皮、果肉、果核進(jìn)行含量測(cè)定。色譜柱為Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流動(dòng)相為乙腈-水（33∶77），檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，流速1.0 mL/min，柱溫35℃。結(jié)果川楝子果皮、果肉、果核中川楝素含量分別為0.058 9%，0.200 5%，0.002 3%。結(jié)論古人在使用川楝子時(shí)多去皮、去核，是有一定科學(xué)依據(jù)的。現(xiàn)今川楝子臨床用量和古代劑量相仿，但實(shí)際有效成分含量降低，臨床用量偏輕。

川楝子；川楝素；炮制；劑量

湖南省中醫(yī)藥管理局基金項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：2013134。

川楝子來源于楝科植物楝Melia toosendan Sieb.et Zucc的干燥成熟果實(shí)，冬季果實(shí)成熟時(shí)采收。性味苦寒，有小毒，歸肝、小腸、膀胱經(jīng)［1］。主產(chǎn)于四川、貴州、湖南、湖北等地，以四川產(chǎn)的為道地藥材，故稱之為川楝子［2］。川楝子是我國(guó)傳統(tǒng)中藥材，歷史悠久，來源廣，價(jià)格低廉，臨床應(yīng)用廣，療效確切［3］。歷代炮制方法豐富，現(xiàn)今炮制方法與歷代文獻(xiàn)中記載的炮制方法存在較大區(qū)別，主要為是否去皮、去核。川楝素是川楝子中主要活性成分［4］。現(xiàn)今川楝子用量為5～10 g［1］，與古今劑量相仿，有效成分含量卻不同。因此，本研究中以川楝子有效成分川楝素為有效成分［5-10］，對(duì)其果實(shí)的皮、肉、核不同部位川楝素含量進(jìn)行研究，以期為川楝子的炮制方法和臨床用藥的劑量提供參考依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

LC-20AT型高效液相色譜儀（日本島津公司）；T-214型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；LT-102型粉碎機(jī)（北京興時(shí)利和科技有限公司）；DK-S26型電熱恒溫水浴鍋（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）。

1.2試藥

川楝子飲片（安徽滬樵中藥飲片廠，批號(hào)為20150212）；川楝素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為58812-37-6）。乙腈為色譜純（天津科密歐化學(xué)試劑），其他試劑均為分析純，水為超純水。

2　方法與結(jié)果

2.1樣品準(zhǔn)備

川楝子：取川楝子除去雜質(zhì)；炒川楝子：取凈川楝子按2015年版《中國(guó)藥典（一部）》（通則0213）炒至表面焦黃色，攤涼。分別將川楝子和炒川楝子的果皮、果肉和果核分離備用。

2.2溶液制備

2.2.1對(duì)照品溶液

精密稱取川楝素對(duì)照品2.8 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，即得質(zhì)量濃度為0.28 g/L的對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液

取炒川楝子各部位樣品粉末，過3號(hào)篩，稱取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，置水浴鍋中水浴（80℃）回流提取1 h，取出，放冷，稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液過0.22 μm微孔濾膜，即得。

2.3川楝素含量測(cè)定

2.3.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（33∶77）；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：35℃。色譜見圖1。

2.3.2方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密吸取川楝素對(duì)照品溶液0.1，0.5，1.0，3.0，5.0 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至質(zhì)量濃度分別為每1 mL含川楝子素2.8，14，28，84，140 μg。分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定其峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=200 068 X+10 192，r2=0.999 6（n=5）。結(jié)果表明，川楝素進(jìn)樣量在0.002 8～1.4 μg范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

圖1　高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定川楝素的含量。結(jié)果的RSD為0.65%（n=6）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10 h時(shí)進(jìn)行川楝素峰面積測(cè)定。結(jié)果的RSD為1.22%（n=6）。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)樣品，按照2.2.2項(xiàng)下供試品溶液的制備方法，分別制備6份供試品溶液，測(cè)定川楝素的峰面積。結(jié)果的RSD為1.41%（n=6），表明方法重復(fù)性好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱定己知含量的樣品6份，各1 g，分別精密加入一定量的川楝素對(duì)照品，依法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

2.3.3樣品含量測(cè)定

取各供試品溶液，按擬訂色譜條件，進(jìn)樣10 μL，測(cè)定川楝素峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表1　川楝素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表2　炒川楝子果實(shí)不同部位川楝素的含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3　討論

《神農(nóng)本草經(jīng)》曰：“主溫疾傷寒，大熱煩狂，殺三蟲疥瘡，利小便水道。”現(xiàn)代《中國(guó)藥典》記載：具有疏肝泄熱、行氣止痛、殺蟲的作用，用于肝郁化火，胸脅、脘腹脹痛，疝氣疼痛，蟲積腹痛［3］。川楝子的炮制方法最早見于《雷公炮炙論》：“……酒拌浸冷濕，蒸，待上皮軟，剝?nèi)テぃ∪馊ズ耍饐斡闷浜恕薄：髿v代炮制方法中都多去皮核，如去核用（唐《精微》）；蒸去皮核，酒浸去皮核，面炒（宋《太平惠民和劑局方》）；洗過……以刀子削下瓤，去皮核不用（宋《蘇沈》）；酒潤(rùn)去核（明《通玄》）；入丸，用核，槌細(xì)，入煎用肉不用核（清《外科證治全生集》）；鹽水泡去核（清《醫(yī)宗金鑒》）；近惟酒炒，亦有去肉取皮用，則苦寒性減（清《本草害利》）。由此可見，古人認(rèn)為川楝子果實(shí)的皮、肉和核的作用和藥效是不相同的，多以去皮、核用肉為主。2015年版《中國(guó)藥典（一部）》將川楝子分為生品川楝子和炒川楝子，生品的炮制方法為除去雜質(zhì)，用時(shí)搗碎；炒川楝子炮制方法為取凈川楝子，切厚片或碾碎，照清炒法（參照通則0213）炒至表面焦黃色［3］，均未參照古法去皮、核。在臨床用量方面，古籍中記載的川楝子用量多為一至三錢，相當(dāng)于現(xiàn)今的3～9 g。如“治療妊娠心氣痛川楝子、小茴香（炒）各三錢，艾葉末（鹽炒）半錢。上作一服，水二鐘……（《衛(wèi)生寶鑒》火龍散）”；“治寒疝，以及偏墜，小腸廟痛：川楝子三錢，小茴香五分，木香一錢……（《醫(yī)方簡(jiǎn)義》導(dǎo)氣湯）”；“治熱厥心痛，或發(fā)或止，久不愈者：金鈴子、延胡索各一兩，上為細(xì)末，每服二、三錢，酒調(diào)下，溫湯亦得（《活法機(jī)要》金鈴子散）”。

由表2可知，川楝子肉中川楝素含量為0.200 5%，皮和核中分別為0.058 9%，0.002 3%。相當(dāng)于川楝子中76.6%的川楝素在果肉，22.5%的川楝素在果皮，0.88%的川楝素在果核，經(jīng)炒制后均有一定程度的降低，故古人在炮制時(shí)去皮、去核是有一定科學(xué)理論依據(jù)的。

川楝子各部位有效成分含量不一，導(dǎo)致臨床應(yīng)用劑量也會(huì)出現(xiàn)偏差。川楝子果核含量最低，但果核的質(zhì)量約占整個(gè)川楝子重量的40%。果肉含量最高，古人只用果肉，常用量一至三錢，相當(dāng)于現(xiàn)今的3～9 g，藥典規(guī)定劑量為5～10 g，雖與古代用量相仿，但實(shí)際有效成分含量卻降低，臨床用量偏輕，建議藥典修改川楝子的加工炮制方法，或提高臨床用藥劑量。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：42.

［2］李良國(guó)，張榮娟.川楝子的炮制歷史沿革［J］.中草藥，1997，28（1）：49-52.

［3］唐大新，熊靜悅，譚正懷.川楝子與炒黃川楝子急性毒性作用比較研究［J］.四川生理科學(xué)雜志，2013，35（2）：57-59.

［4］李振華，鞠建明，華俊磊，等.中藥川楝子研究進(jìn)展［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2015，21（1）：219-223.

［5］楊東升，張金桐.川楝素對(duì)家蠅幼蟲中腸細(xì)胞及淀粉酶活性的影響［J］.寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報(bào)，2002，9（1）：39.

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［8］齊雙巖，金若敏，周志蘭，等.川楝子對(duì)大鼠肝毒性的時(shí)效和量效關(guān)系研究［J］.毒理學(xué)雜志，2007，21（4）：301.

［9］時(shí)等，劉妍如，楊建云，等.中藥川楝子的最新研究進(jìn)展［J］.中國(guó)臨床藥理學(xué)與治理學(xué)，2012，17（3）：357-360.

［10］陳敏，胡芳.中藥川楝子的化學(xué)成分研究進(jìn)展［J］.北方藥學(xué)，2013，10（8）：70-71.

Study of Ancient and Present Preparation Based on the Content of Toosendanin in Different Parts of Fructus Toosendan

Huang Lihui1，Zhang Zhiguo2，Yang Lei2
（1.Hunan Judicial Police Hospital，Changsha，Hunan，China410014；2.The First Affiliated Hospital of Hunan University of Traditional Chinese Medicine· Science of Processing Chinese Materia Medica Key Discipline of the State Administration of Traditional Chinese Medicine，Changsha，Hunan，China410007）

ObjectiveTo explore the differences and similarities of methods and the dosage of ancient and present processing through determining the content of toosendanin in different parts of Fructus toosendan.M ethodsThe content of toosendanin in peel pulp and kemel was determined.The chromatographic column was Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），the mobile phase acetonitrile-water（33∶77），the detective length 210 nm，the flow rate 1.0 mL/min，colum temperature 35℃.ResultsThe contents of toosendanin in peel，pulp and kemel were 0.058 9%，0.200 5%and 0.002 3%.ConclusionThe ancients use fructus toosendan with peeled and pitted has some basis in science.Today，we use the ancient toosendan dose with the same clinical dosage，but in fact，the contents of effective ingredients are reduced and the clinical dosage is insufficient.

Fructus toosendan；toosendanin；preparation；dosage

R284.1；R282.71

A

1006-4931（2016）15-0040-03

黃立輝，女，主管藥師，主要從事藥品管理與藥學(xué)服務(wù)研究工作，（電子信箱）442391066@ qq.com；楊磊，女，碩士研究生，副主任藥師，主要從事中藥炮制、中藥制劑研究工作，本文通訊作者，（電子信箱）yanglei30@sohu.com。

（2016-04-20）