反相高效液相色譜法同時測定正胃膠囊中木香烴內酯和去氫木香內酯含量

張治軍，曾友保，覃曉

（廣西壯族自治區桂林食品藥品檢驗所，廣西桂林541002）

反相高效液相色譜法同時測定正胃膠囊中木香烴內酯和去氫木香內酯含量

張治軍，曾友保，覃曉

（廣西壯族自治區桂林食品藥品檢驗所，廣西桂林541002）

目的建立測定正胃膠囊中木香烴內酯和去氫木香內酯含量的反相高效液相色譜（RP-HPLC）法。方法色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5*m），流動相為乙腈-水（65∶35），流速為1.0 mL/min，檢測波長為225 nm。結果木香烴內酯質量濃度在24.78～198.24*g/mL范圍內與峰面積線性關系良好，r=0.999 8，平均回收率為98.67%，RSD為1.33%（n=6）；去氫木香內酯質量濃度在5.06～40.48*g/mL范圍內與峰面積線性關系良好，r=0.999 8，平均回收率為97.07%，RSD為1.07%（n=6）。結論該方法簡便、準確、重復性好，可作為控制和評價正胃膠囊質量的方法。

正胃膠囊；木香烴內酯；去氫木香內酯；反相高效液相色譜法；含量測定

正胃膠囊為常見胃藥，由猴耳環、木香、七葉蓮、陳皮、甘草、次硝酸鉍、氧化鎂、氫氧化鋁組方，收載于國家食品藥品監督管理總局藥品標準，具有清熱涼血、健脾和胃、制酸止痛功效，主要用于胃中灼熱、脘腹脹痛、胃炎等的治療［1］。其中，木香具有健脾消食、行氣止痛的功效，主要成分有木香烴內酯和去氫木香內酯［2-3］。為了更全面地控制、評價該制劑的質量，本研究中建立了同時測定正胃膠囊中木香烴內酯和去氫木香內酯含量的反相高效液相色譜（RP-HPLC）法，經方法學驗證，其操作簡便，結果準確，可用于控制和評價正胃膠囊的質量。

1　儀器與試藥

島津LC-2010AHT型高效液相色譜儀，紫外檢測器（日本島津公司）。對照品木香烴內酯（批號為111524-200503）和去氫木香內酯（批號為110525-201008）均購自中國食品藥品檢定研究院；正胃膠囊（批號分別為140801，140305，131101）為市售品；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1溶液制備

混合對照品溶液：精密稱取氫木香內酯20.26 mg，置100 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解稀釋成質量濃度為0.202 6 mg/mL的溶液；精密稱取木香烴內酯對照品24.78 mg，置100 mL棕色容量瓶中，加上述去氫木香內酯對照品溶液25 mL，溶解稀釋至刻度，制成每1 mL分別含木香烴內酯0.247 8 mg、去氫木香內酯0.050 6 mg的混合對照品貯備液。取上述對照品貯備液4 mL，稀釋至10 mL，作為混合對照品溶液。

供試品溶液：取正胃膠囊（批號為140305）20粒，倒出內容物，將其研細混勻。稱取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質量，超聲提取（功率400 W，頻率60 kHz）30 min，放冷，稱定，用甲醇補足減失的質量，濾過，棄去初濾液約10 mL，取續濾液25 mL，水浴中揮干至約5 mL，置中性氧化鋁柱（50～200目，6 g）上，用甲醇50 mL洗脫，水浴中蒸干后用適量甲醇溶解并轉移至10 mL棕色容量瓶中，定容，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得。

陰性對照品溶液：按正胃膠囊的處方比例和工藝制備不含木香的陰性樣品，稱取陰性樣品約2 g，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.2色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（65∶35）；流速：1 mL/min；檢測波長：225 nm。在此色譜條件下，分別取混合對照品溶液、陰性對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，色譜圖見圖1。

2.3方法學考察

線性關系考察：分別精密量取上述混合對照品貯備液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋成每1 mL含木香烴內酯分別為24.78，49.56，99.12，148.71，198.24 μg，含去氫木香內酯分別為5.06，10.12，20.24，30.36，40.48 μg的混合對照品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定。以峰面積（Y）為縱坐標、質量濃度（X）為橫坐標進行線性回歸，得木香烴內酯、去氫木香內酯的回歸方程分別為Y=3.75×104X+ 6.94×103，r=0.999 8；Y=4.23×104X+1.17×104，r=0.999 8。結果，木香烴內酯質量濃度在24.78～198.24 μg/mL范圍內，去氫木香內酯質量濃度在5.06～40.48 μg/mL范圍內分別與各自峰面積線性關系良好。

圖1　高效液相色譜圖

精密度試驗：精密量取木香烴內酯和去氫木香內酯的混合對照品溶液10 μL，在擬訂色譜條件下連續進樣5次，測定。結果木香烴內酯色譜峰面積平均為118787.2，RSD為0.46%（n=5），去氫木香內酯色譜峰面積平均為300 172.4，RSD為0.54%（n=5），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一批（批號為140801）樣品6份，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定。結果木香烴內酯及去氫木香內酯的平均含量分別為0.974 5 mg/g和0.194 3 mg/g，RSD分別為1.37%和1.54%（n=6），表明該方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密稱取已知含量的正胃膠囊（批號為140801）內容物1 g，6份，分別精密加入混合對照品貯備溶液3，4，5 mL，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，計算回收率，結果見表1。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，1，2，4，12，18，24 h時進樣測定。結果木香烴內酯、去氫木香內酯峰面積的RSD分別為1.46%和1.13%（n=7），表明供試品溶液在24 h內穩定。

表1　加樣回收試驗結果（n=6）

2.4樣品含量測定

按2.1項下方法制備供試品溶液和混合對照品溶液，分別精密吸取各10 μL，按擬訂色譜條件進樣測定，按外標法計算含量。結果見表2。

表2　樣品含量測定結果（mg/g）

3　討論

本研究中參照文獻［4-13］，曾采用超聲波提取法與加熱回流提取法分別提取0.5，1.0，2.0 h，結果2種提取方法測定木香內酯2種成分的實際峰面積相近，表明提取效率基本相同。但采用加熱回流提取雜質較多，同時考慮試驗操作的簡便性，故選用超聲提取法。在提取時間上，試驗結果表明，0.5 h基本已提取完全。

由于樣品組方為中西藥配比，成分較復雜，在實際提取中雜質較多，導致液相色譜下木香烴內酯和去氫木香內酯基線分離不太理想，難以達到準確定量，故本研究中參照文獻［14-15］，提取液采用中性氧化鋁柱凈化后再進樣，試驗結果較理想。

木香在正胃膠囊處方中為臣藥，用量較大，其主要成分木香內酯具有行氣止痛、健脾消食功效，在整個制劑功效中起主要作用。但原質量標準中只有次硝酸鉍、氫氧化鋁和甘草的定量控制，本研究中建立的木香含量測定方法操作簡便，測定結果準確，重復性好，可為更全面控制和評價正胃膠囊的質量提供技術研究基礎。

［1］YBZ10432009，國家食品藥品監督管理局藥品標準［S］.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：57-58.

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［4］王海寧.HPLC法測定六味木香膠囊中木香烴內酯和去氫木香內酯［J］.中草藥，2014，45（16）：2 349-2 351.

［5］何洋，孫悅，黃娟萍，等.HPLC法同時測定加味香連丸中木香烴內酯和去氫木香內酯的含量［J］.藥物分析雜志，2011，31（2）：222-224.

［6］黃瀾，黃麗.RP-HPLC法同時測定保濟丸中厚樸酚、和厚樸酚、木香烴內酯及去氫木香內酯的含量［J］.藥物分析雜志，2012，32（3）：396-399.

［7］楊憲，劉筱琴，張雪，等.HPLC一測多評法用于木香及3種含木香中藥復方制劑的質量評價［J］.中國藥房，2014，25（11）：1 030-1 034.

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［9］裴貴珍，郭鑫，張雪峰，等.HPLC法同時測定六味能消膠囊中木香烴內酯、去氫木香烴內酯大黃素、大黃酚的含量［J］.藥物分析雜志，2015，35（2）：241-245.

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［14］魏華，彭勇，馬國需，等.木香有效成分及藥理作用研究進展［J］.中草藥，2012，43（3）：613-620.

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Content Determination of Costunolide and Dehydrocostuslactone in Zhengwei Capsules by RP-HPLC

Zhang Zhijun，Zeng Youbao，Qin Xiao
（Guilin Institute for Food and Drug Control，Guilin，Guangxi，China541002）

ObjectiveTo establish a RP-HPLC method for the content determination of costunolide and dehydrocostuslactone in Zhengwei Capsules.MethodsThe HPLC system consisted of the Agilent ZORBAX SB-C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）and acetonitrile-water（65∶35）as the mobile phase，the flow rate was 1.0 mL/min and the detectivewavelength was 225 nm.ResultsCostunlide showed a good linear relationship in the range of 24.78-198.24 μg/mL，r=0.999 8，the average recovery was 98.67%and RSD was 1.33%（n=6）.Dehydrocostuslactone showed a good linear relationship at the range of 5.06-40.48 μg/mL，r=0.999 8，the average recovery was 97.07%andRSD was 1.07%（n=6）.ConclusionThe method is sensitive，simple，accurate and repeatable.It can be used for the quality control of Zhengwei Capsules.

Zhengwei Capsules；costunolide；dehydrocostuslactone；RP-HPLC；content determination

R284．1；R286．0

A

1006－4931（2016）14－0078－03

張治軍（1971-），男，碩士研究生，副主任藥師，研究方向為中藥質量檢驗與控制，（電子信箱）770013802@qq.com。

2015－10－14；

2016－03－28）