復方蜂膠膠囊中非法添加格列波脲的分離與鑒定

黃海燕，鐘建理，饒偉文，陳瀚

（廣西壯族自治區桂林食品藥品檢驗所，廣西桂林541002）

復方蜂膠膠囊中非法添加格列波脲的分離與鑒定

黃海燕，鐘建理，饒偉文，陳瀚

（廣西壯族自治區桂林食品藥品檢驗所，廣西桂林541002）

目的分離和鑒定復方蜂膠膠囊中非法添加的格列波脲。方法采用半制備液相色譜法分離該化合物，并用波譜法鑒定其結構。結果從復方蜂膠膠囊中分離純化得到的化合物，經核磁共振（NMR）驗證了其結構。結論復方蜂膠膠囊中非法添加組分為格列波脲。

復方蜂膠膠囊；格列波脲；分離；鑒定；核磁共振

近年來，在藥品、保健食品中非法添加化學成分現象日趨嚴重，危害公眾的身體健康，甚至還危及其生命安全，特別是降糖類保健食品，非法添加化學成分屢禁不止。目前，我國報道降糖類藥品、保健食品中非法添加的化學成分有二甲雙胍、苯乙雙胍、格列本脲、格列吡嗪、格列齊特、羅格列酮等［1-12］。筆者曾采用薄層色譜法和液質聯用法從一批復方蜂膠膠囊中檢出非法添加的格列波脲（glibornuride）［13］。本研究中采用半制備液相色譜法分離出非法添加的組分格列波脲，并運用核磁共振（NMR）進行驗證。

1　儀器與試藥

1.1儀器

Agilent 1260型高效半制備液相色譜儀（美國安捷倫公司）；1260 DAD VL+二級陣列管檢測器（美國安捷倫公司）；核磁共振儀（德國Bruker公司）；高效液相（Waters 2695型、2998 PAD型二極管陣列檢測器）-質譜（VB-QMicro）聯用儀（美國Waters公司）。

1.2試藥

格列波脲對照品（加拿大TLC PharmaChem Inc，批號為Lot#1113-082B1，含量為86.5%）；乙腈、甲醇均為色譜純；其余試劑均為分析純；水為高純水；復方蜂膠膠囊（北京某保健食品廠，批號為110301）系消費者郵購產品，服用后出現低血糖、頭昏等不良反應后投訴并送檢的樣品。

2　方法與結果

2.1非法添加成分的確定（高效液相-質譜聯用法）

色譜條件：色譜柱為WatersXBridgeTMC18柱（150 mm×2.1 mm，3.5 μm，美國Waters公司）；流動相為甲醇-0.01 mol/L乙酸銨溶液（70∶30）；流速0.2 mL/min；檢測波長235 nm；柱溫25℃；進樣量5 μL。

質譜參數：電噴霧電離源（ESI），正離子檢測，毛細管電壓為3.0 kV，脫溶劑氣（N2）的流量為600 L/h，錐孔氣流量為50 L/h，錐孔電壓為30 V，掃描方式為全掃描一級質譜，質量數范圍為100～1 000。

成分測定：取格列波脲對照品2.58 mg，置20 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，取1 mL，加甲醇2 mL，搖勻，用微孔濾膜（0.22 μm）濾過，作為對照品溶液。取1粒樣品內容物，加三氯甲烷20 mL，超聲處理10 min，濾過，取濾液，蒸干，殘渣加甲醇10 mL使溶解，取2 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.22 μm）濾過，作為供試品溶液。取對照品溶液和供試品溶液適量，按擬訂色譜條件進樣測定。結果供試品溶液色譜出現與對照品溶液色譜相同保留時間的色譜峰。采用二極管陣列檢測器比較相應色譜峰的紫外-可見吸收光譜，結果吸收光譜相同，相應的一級質譜及二級質譜與對照品一致，即可判斷該批復方蜂膠膠囊含有格列波脲。

2.2提取分離

取10粒本品內容物，加三氯甲烷20 mL，超聲處理10 min，濾過，殘渣加三氯甲烷20 mL，重復操作2次，合并濾液，濾液回收，溶劑至干，殘渣加甲醇10 mL使溶解，即得供試品溶液。

取上述供試品溶液通過半制備液相色譜分離，色譜柱為ZORBAX SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，10 μm），檢測波長為235 nm，柱溫為25℃，流動相為乙腈-水（70∶30），流速為5.0 mL/min，洗脫時間為5 min。收集與格列波脲對照品溶液保留時間一致（約3.349 min）的色譜峰的流出液，40℃水浴旋蒸至溶液約100 mL，轉移至離心管中，放冷，靜置，析出白色結晶，離心，棄上清液，加5 mL水，攪拌，靜置，離心，棄上清液，沉淀物于五氧化二磷減壓干燥72 h，得類白色粉末（約50 mg）。

2.3結構鑒定

2.3.11H-NMR譜

1H-NMR（CDCl3，500 MHz）顯示出4個苯環氫的信號，其化學位移和歸屬如下。δ：7.85（2H，d，J=8.0Hz，H-2，6），7.31（2H，d，J=8.0 Hz，H-3，5），H-2，6受到—SO2NH—基的去屏蔽作用移向低場，H-3，5受到—CH3的屏蔽作用而移向高場。δ：8.38（1H，bra，—SO2NH），6.99（1H，s，—CONH）為2個氮上氫質子的化學位移值。4.08（1H，m，H-1’），4.00（1H，d，J= 4.5 Hz，m，H-2’），2.42（3H，s，H-10），1.91（1H，t，J= 4.0 Hz，m，H-6’），1.77（1H，m，H-4’a），1.38（1H，m，H-5’a），1.18（1H，m，H-4’b），1.14（1H，m，H-5’b），0.90（3H，s，H-10’），0.88（6H，s，H-8’，9’）。

2.3.213C-NMR譜

13C-NMR（CD3OD，125 MHz）數據給出16個碳原子信號。δ：151.3（C-8）為羰基信號，144.9（C-4），136.7（C-1），130.0（C-3，5），127.5（C-2，6），處于雙鍵碳的化學位移范圍，歸屬為苯環上特征信號。74.0（C-2’），50.6（C-1’），49.8（C-3’），48.8（C-6’），45.5（C-7’），25.4（C-4’），21.8（C-10），20.0（C-8’），19.7（C-5’），18.4（C-9’），14.0（C-10’）。化合物結構見圖1。

2.3.3HMBC譜

HMBC譜中，δ144.9（C-4）分別與質子δ7.85（H-2，6），2.42（H-10）相關，δ：74.0（C-2’）與質子1.77（H-4’a），1.18（H-4’b），0.90（H-10’）相關。據此，推測化合物的結構，見圖2。

圖1　化合物的結構

圖2　主要HMBC關系圖

2.4波譜數據

1H-NMR（CDCl3，500 MHz）δ：7.85（2H，d，J= 8.0 Hz，H-2，6），7.31（2H，d，J=8.0 Hz，H-3，5），4.08（1H，m，H-1’），4.00（1H，d，J=4.5 Hz，m，H-2’），2.42（3H，s，H-10），1.91（1H，t，J=4.0 Hz，m，H-6’），1.77（1H，m，H-4’a），1.38（1H，m，H-5’a），1.18（1H，m，H-4’b），1.18（1H，m，H-5’b），1.16（3H，s，H-10’），1.14（6H，s，H-8’，9’）。

13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：151.3（C-8），144.9（C-4），136.7（C-1），130.0（C-3，5），127.5（C-2，6），74.0（C-2’），50.6（C-1’），49.8（C-3’），48.8（C-6’），45.5（C-7’），25.4（C-4’），21.8（C-10），20.0（C-8’），19.7（C-5’），18.4（C-9’），14.0（C-10’）。

3　討論

復方蜂膠膠囊是以人參、蜂膠、吡啶甲酸鉻、黃芪、桑葉、山藥、枸杞子、玉竹、女貞子為主要原料制成的保健食品，有輔助降血糖、增強免疫力的保健功能。本研究中從復方蜂膠膠囊中分離提純得到化合物，通過NMR法驗證，進一步證明該保健食品中非法添加了化學藥品格列波脲。

曾試驗用薄層刮板法、柱色譜法、重結晶法等方法對復方蜂膠膠囊中非法添加的格列波脲進行分離提純，結果均不理想。半制備液相色譜分離也曾試驗用甲醇-水（70∶30）為流動相，但以乙腈-水（70∶30）為流動相的分離效果較好，故本研究中選用后者為流動相。

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Isolation and Identification of Glibornuride Illegally Added in Compound Propolis Capsules

Huang Haiyan，Zhong Jianli，Rao Weiwen，Chen Han
（Guilin Institute for Food and Drug Control，Guilin，Guangxi，China541002）

ObjectiveTo separate and identify the structure of the glibornuride as an illegal adulterant in a health product Compound Propolis capsules.M ethodsA pectroscopic method was used to isolate and a NMR method was used to identify the structure of glibornuride.ResultsThe chemical structure of the compound isolated from the capsule was identified by NMR.ConclusionThe compound is glibornuride，which is illegally added in Compound Propolis Capsules.

Compound Propolis Capsules；glibornuride；isolation；identification；NMR

R954；R284．1；R286．0

A

1006－4931（2016）14－0076－03

2015－08－13；

2016－02－23）