高效液相色譜法測定復方曲尼司特片中曲尼司特含量

王靜

（河南省濮陽市食品藥品檢驗檢測中心，河南濮陽457000）

高效液相色譜法測定復方曲尼司特片中曲尼司特含量

王靜

（河南省濮陽市食品藥品檢驗檢測中心，河南濮陽457000）

目的建立測定復方曲尼司特片中曲尼司特含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為XBridge C18柱（250 mm×4.6 mm，5*m），以甲醇-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液（63∶37，用磷酸調pH至4.6）為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長為333 nm。結果曲尼司特質量濃度在32.66～130.64*g/mL范圍內與峰面積積分值線性關系良好，平均回收率為99.67%，RSD為0.33%（n=6）。結論該方法簡便準確、重復性好，適用于復方曲尼司特片中曲尼司特的含量測定。

高效液相色譜法；復方曲尼司特片；曲尼司特；含量測定

復方曲尼司特片是由曲尼司特和硫酸沙丁胺醇組成的復方制劑，該制劑既能發揮曲尼司特的抗過敏作用［1］，又能發揮沙丁胺醇的迅速平喘、解痙作用［2］，臨床主要用于輕、中度支氣管哮喘，慢性喘息型支氣管炎的預防與治療。本研究中參考文獻［3-7］建立了測定復方曲尼司特片中曲尼司特含量的高效液相色譜（HPLC）法，該方法簡便、準確、專屬性強、靈敏度高，能較好地控制其質量，現報道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

Agilent1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司）；UvikonXL型紫外分光光度計（法國Secomam公司）；92SM-202A型電子分析天平（瑞士Precisa公司）。

1.2試藥

曲尼司特對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為100938-200701）；復方曲尼司特片（市售，批號分別為1406117，1409006，1412112，規格為每片含曲尼司特80 mg、硫酸沙丁胺醇2.4 mg）；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱：XBridge C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液（63∶37，用磷酸調pH至4.6）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：333 nm；進樣量：20 μL；柱溫：30℃。

2.2溶液制備

精密稱取經105℃干燥至恒重的曲尼司特對照品16.33 mg，置50 mL棕色容量瓶中，加少量無水乙醇使之溶解，再用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液5 mL，置20 mL棕色容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取樣品20片，精密稱定，研細，稱取細粉適量（約相當于曲尼司特8 mg），精密稱定，置25 mL棕色容量瓶中，加少量無水乙醇使之溶解，再用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 mL，置20 mL棕色容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按處方比例配制缺曲尼司特的陰性對照品，再按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3方法學考察

陰性干擾試驗：照擬訂色譜條件，吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各20 μL，分別注入高效液相色譜儀。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上有相同色譜峰，而陰性對照品溶液在相同保留時間處無此色譜峰，表明其他成分對含量測定無干擾。理論板數以曲尼司特峰計為6 482，見圖1。

線性關系考察：精密吸取對照品貯備液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別進樣20 μL，記錄色譜圖。以峰面積積分值（Y）為縱坐標、質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=132.32 X-2 167.06，r=0.999 9（n=7）。結果表明，曲尼司特質量濃度在32.66～130.64 μg/mL范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

精密度試驗：取同一對照品溶液，重復進樣5次，記錄曲尼司特的色譜峰面積。結果平均值為8 390.87，RSD為0.21%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10 h時進樣測定。結果曲尼司特峰面積的RSD為0.79%（n=6），表明供試品溶液在10 h內穩定。

重復性試驗：取同一批樣品5份，依法制備供試品溶液，進樣測定。結果平均含量為標示含量的100.2%，RSD為1.09%（n=5），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：稱取已知含量的樣品（批號為1406117）6份，每份約相當于曲尼司特4 mg，精密稱定，置25 mL棕色容量瓶中，分別精密加入曲尼司特對照品溶液（2.011 2 g/L）1.5，2.0，2.5 mL，依法制備供試品溶液，并按擬訂色譜條件進樣測定，計算回收率。結果見表1。

圖1　高效液相色譜圖

2.4樣品含量測定

分別按2.2項下方法制備供試品溶液和對照品溶液，精密量取2種溶液各20 μL，分別注入高效液相色譜儀，按外標法計算曲尼司特的含量。結果見表2。

表1　曲尼司特加樣回收試驗結果（n=6）

表2　樣品含量測定結果（n=3）

3　討論

波長選擇：按2.2項下方法制備曲尼司特對照品溶液，同法按復方曲尼司特片處方比例制備硫酸沙丁胺醇對照品溶液，取上述2種對照品溶液分別在200～400 nm波長范圍內進行紫外光譜掃描。結果曲尼司特、硫酸沙丁胺醇分別在333 nm和276 nm波長處有最大吸收，故以333 nm為檢測波長。

溶劑選擇：曲尼司特難溶于水，直接用流動相溶解對照品及供試品，效果不好。經試驗，在溶液制備時先加入少量無水乙醇使之溶解，再用流動相定容，溶解效果理想，且對含量測定無干擾。

流動相選擇：試驗結果表明，流動相的酸度對曲尼司特峰的保留時間及峰形影響較大，在一定范圍內保留時間隨pH增大而變小，經比較，甲醇與0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液比例為63∶37，且用磷酸調pH至4.6時，曲尼司特色譜峰的保留時間適中，峰形較好。

在處方中，由于曲尼司特含量比硫酸沙丁胺醇高30多倍，懸殊太大，在同一積分條件下，硫酸沙丁胺醇峰面積太小，暫未能同時測定其含量。

［1］陳新.抗變態反應新藥——曲尼司特膠囊［J］.中國醫院藥學雜志，1989，24（2）：125.

［2］鐘南山.支氣管哮喘——基礎與臨床［M］.北京：人民衛生出版社，2006：607-612.

［3］倪沖，繆玉山，陳國明，等.高效液相色譜法測定曲尼司特滴眼液中曲尼司特及其有關物質的含量［J］.東南大學學報：醫學版，2008，27（5）：365-367.

［4］趙飛浪，袁倚盛，譚力，等.反相高效液相色譜法測定人血漿中曲尼司特濃度［J］.色譜，1998，16（1）：78-79.

［5］何仲貴，唐磊，唐星，等.高效液相色譜法測定血漿中曲尼司特濃度［J］.中國現代應用藥學，1994，11（2）：43-44.

［6］郭曉烽，丁黎，馬鵬程.復方曲尼司特片在人體內的藥代動力學和相對生物利用度［J］.藥學與臨床研究，2007，15（5）：352-356.

［7］金偉華，劉永勝，譚永紅，等.曲尼司特滴鼻液的制備及其質量控制［J］.中國藥房，2013，24（13）：1 205-1 207.

Content Determination of Tranilast in Compound Tranilast Tablets by HPLC

Wang Jing
（Puyang Food and Drug Inspection and Testing Center，Puyang，Henan，China 457000）

ObjectiveToestablishanHPLCmethodfor thecontentdeterminationoftranilastinCompoundTranilastTablets. MethodsThe XBridge C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）was used with methanol-0.02 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution（63∶37）（adjusting pH to 4.6 with phosphoric acid）as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 333 nm.ResultsThere was a good linear relationship when the content of tranilast was within the range of 32.66-130.64 μg/mL.The average recovery was 99.67%and theRSD was 0.33%（n=6）.ConclusionThe method is simple and accurate with good reproducibility，which could be used for the analysis of tranilast in Compound Tranilast Tablets.

HPLC；Compound Tranilast Tablets；tranilast；content determination

R927．2；R974

A

1006－4931（2016）14－0074－03

王靜（1982-），女，大學本科，主管藥師，研究方向為藥品檢驗及質量標準，（電子信箱）396293403@qq.com。

2016－01－13）