早期梅毒患者治療前后血清IL-27和IL-33水平檢測

章鵬飛季必華

(1.蕪湖市第一人民醫院　皮膚科，安徽　蕪湖　241000；2.皖南醫學院第一附屬醫院 弋磯山醫院 皮膚科，安徽　蕪湖　241001)

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·臨床醫學·

早期梅毒患者治療前后血清IL-27和IL-33水平檢測

章鵬飛1，2季必華2

(1.蕪湖市第一人民醫院皮膚科，安徽蕪湖241000；2.皖南醫學院第一附屬醫院 弋磯山醫院 皮膚科，安徽蕪湖241001)

目的：檢測早期梅毒患者的血清IL-27及IL-33水平，觀察梅毒患者在治療前是否已存在IL-27、IL-33水平的變化及此變化是否影響其預后。方法：選取早期梅毒患者的血清樣本，根據治療后的隨訪情況分為梅毒血清轉陰組和非轉陰組，采用雙抗體夾心ELISA法分別檢測兩組治療前后及正常對照組的IL-27和IL-33水平。結果：①IL-27水平在梅毒血清轉陰組治療前高于非轉陰組治療前(27.31±6.19)ng/Lvs.( 20.98±5.10)ng/L，P<0.05；IL-27水平在非轉陰組治療后高于治療前(25.34±6.66)ng/Lvs. (20.98±5.10)ng/L，P<0.05。②IL-33水平在梅毒血清轉陰組治療后低于治療前(4.41±1.33)ng/Lvs. (3.26±1.41)ng/L，P<0.05。結論：IL-27可能有利于機體對梅素螺旋體(treponema pallidum,TP)的清除，而IL-33可能不利于機體對TP的清除。

梅毒;IL-27;IL-33

既往研究發現梅毒患者體內存在細胞免疫失衡，Fitzgerald等[1]提出在梅毒病程發展中，存在Th1向Th2漂移的假說，認為Th1/Th2免疫失衡，可能是梅毒螺旋體能夠逃避免疫監視得以繼續增殖、梅毒進入潛伏階段的原因。

IL-27與IL-33分別作為Th1和Th2的調節因子[2-3]，已經被發現參與較多感染性疾病的免疫反應。在梅毒患者體內，二者是否也存在異常？本研究旨在探討IL-27、IL-33分別作為Th1、Th2細胞的活化因子而在早期梅毒患者(病程小于2年[4])清除體內梅毒螺旋體的免疫應答中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料病例來源于2012年6月～2013年8月在弋磯山醫院皮膚性病科門診就診者，選取符合診斷及入選標準的初診未治療早期梅毒患者共124例，以血清快速血漿反應素環狀卡片試驗(rapid plasma reagent circle card test,RPR)檢測其滴度，并預留作為IL-27、IL-33檢測的治療前血清樣本。患者經芐星青霉素G驅梅治療結束后的第6個月，在入組的124例中共收集到RPR轉陰者22例，RPR未下降4倍滴度者19例，從中分別選取18例，作為轉陰組及非轉陰組，并再次留取其血清作為IL-27、IL-33治療后的檢測樣本。所有患者否認既往有驅梅治療史，排除合并HIV感染、自身免疫性疾病及近3個月內使用糖皮質激素或免疫抑制劑者。同時選取健康志愿體檢者18例為正常對照組，所有研究對象均簽署知情同意書。具體分組如下：①梅毒血清轉陰組共18例(男9例，女9例)，年齡20～49歲，平均(35.97±5.18)歲，正規驅梅治療6個月后復查血清RPR試驗轉陰者；②梅毒血清非轉陰組共18例 (男8例，女10例)，年齡22～53歲，平均(38.24±5.74)歲，正規驅梅治療6個月后，復查血清RPR試驗未下降4倍滴度者；③正常對照組共 18 例(男9例，女9例)，年齡20～50歲，平均(36.41±7.36)歲。3組間性別(χ2=0.148，P=0.929)和年齡(F=0.362，P=0.798)，差異無統計學意義。

1.2方法所有入選的早期梅毒患者治療前、治療后及正常對照組人群均抽取外周靜脈血5 mL，于室溫下靜置10～20 min后放入離心機分離血清(2500～3000 r/min，離心15 min)，取其中部分血清立即做RPR和TPPA試驗，同時進行HIV抗體的檢測。另取1 mL血清于凍存管分裝，并標注編號、姓名、采集日期等放置于-70℃冰箱凍存待測。用雙抗體夾心ELISA法集中檢測血清IL-27及IL-33水平，試劑盒均購自上海源葉生物技術有限公司，操作按試劑盒說明書的步驟進行。

2　結果

2.1各組IL-27表達量治療前，梅毒血清轉陰組、梅毒非轉陰組的血清IL-27水平均高于正常對照組(F=47.79,P<0.05)，且梅毒血清轉陰組高于非轉陰組 (P<0.05)。治療后，梅毒血清轉陰組、梅毒非轉陰組的血清IL-27水平仍高于正常對照組(F=37.42,P<0.05)，但梅毒血清轉陰組與非轉陰組差異無統計學意義(P>0.05)。IL-27水平在梅毒血清轉陰組治療前后差異無統計學意義(P>0.05)；在非轉陰組治療前后差異有統計學意義 (P<0.05)。見表1。

組別n治療前治療后d±sd配對t值P值轉陰組1827.31±6.1928.82±8.131.52±8.360.771>0.05非轉陰組1820.98±5.1025.34±6.664.36±8.452.189<0.05

注：正常對照組IL-27=(12.14±1.13)ng/L,F=47.79,P< 0.05。

2.2各組IL-33表達量治療前，梅毒血清轉陰組、梅毒非轉陰組的血清IL-33水平均高于正常對照組(F=46.66,P<0.05)，但梅毒血清轉陰組與非轉陰組差異無統計學意義(P>0.05)。治療后，梅毒血清轉陰組、梅毒非轉陰組的血清IL-33水平仍高于正常對照組(F=21.57,P<0.05)，但梅毒血清轉陰組與非轉陰組差異無統計學意義(P>0.05)。IL-33水平在梅毒血清轉陰組治療前后差異有統計學意義(P<0.05)；在非轉陰組治療前后差異無統計學意義 (P>0.05)。 見表2。

組別n治療前治療后d±sd配對t值P值轉陰組184.41±1.333.26±1.411.15±1.064.603<0.05非轉陰組184.37±1.293.97±1.560.40±1.970.861>0.05

注：正常對照組IL-33=(1.38±0.25)ng/L，F=46.66,P< 0.05。

3　討論

IL-27是2002年發現并命名的IL-12家族細胞因子[5]。IL-27主要由巨噬細胞和樹突狀細胞產生，是一種由EBI3和p28組成的異二聚體，EBI3與IL-12的p40亞基同源，p28則與IL-12的p35亞基相關[6]。IL-27可誘導巨噬細胞產生IL-12，促進CD4+T細胞的增殖，也能夠激活STAT1途徑，誘導T-bet活化，從而誘導初始CD4+T細胞向Th1分化，并促進IFN-γ的產生[7-9]。由此可見，IL-27屬于Th1系列細胞因子之一。

本實驗中轉陰組IL-27水平在治療前明顯高于非轉陰組治療前，說明轉陰組的患者在治療前，其血清IL-27即已處于高水平狀態，提示對于早期梅毒患者，高水平的IL-27驅動的Th1反應可能有利于對TP的清除。

作為Th1細胞的代表性因子，IL-2、IFN-γ與梅毒的關系已多有報道。有學者檢測梅毒患者外周血IL-2水平，發現血清IL-2水平在早期梅毒患者治療后RPR轉陰組最高，未治療組次之，而治療后RPR非轉陰組最低，表明IL-2水平與RPR的轉陰具有正相關性，提示IL-2有利于機體對TP的清除[10]。師金川等[11]采用ELISA分別檢測梅毒患者血清復發組、RPR轉陰組和正常人群組血清IFN-γ的含量，發現血清復發組IFN-γ水平明顯低于正常對照組及RPR轉陰組，提示若IFN-γ參與的Th1反應減弱，則不利于TP的清除。以上均提示Th1型反應有利于梅毒螺旋體的清除；而IL-27對Th1型細胞因子的促進作用，可能是其有利于清除TP的原因。

但本實驗中，非轉陰組的IL-27水平在治療后明顯升高，而梅毒患者血清試驗仍未轉陰。IL-27對IL-10(Th2型細胞因子)生成的促進作用，可能有助于解釋這個現象。Anderson等[12]以利什曼原蟲感染小鼠，檢測皮損及淋巴結中的白介素及CD4+T細胞數，發現IL-27及IL-10、IFN-γ水平在感染后均增高，再感染IL-27受體缺陷(WSX-1-/-)的小鼠，發現IL-10水平逐漸下降，證明IL-27對IL-10生成的促進作用。IL-27對IL-10的促進作用是否影響對TP的清除，仍需進一步探討。

IL-33是2005年由Schmitz等[13]鑒定發現的IL-1家族成員，主要由上皮細胞、呼吸道平滑肌細胞、內皮細胞和脂肪細胞產生，可促進 IL-4、IL-5 以及IL-13等Th2型細胞因子產生，在多種炎癥過程中發揮重要作用[14]。因此IL-33屬于Th2系列細胞因子之一。本研究中，梅毒血清轉陰組的IL-33水平在治療后降低，而非轉陰組的IL-33水平在治療后未明顯降低，提示IL-33不利于機體清除TP，這可能與其能夠促進Th2反應有關。

有學者[15]發現，梅毒血清固定患者血清中Th2細胞分泌的IL-4、IL-10明顯高于梅毒血清轉陰組，提示在梅毒患者體內的Th2型反應不利于梅毒螺旋體清除。最近Sattler等[16]發現在炎癥性腸病模型的小鼠體內，IL-33能促進IL-10分泌。有學者[17]用流式細胞儀檢測梅毒血清固定患者外周血CD4+CD25+IL-10+細胞比例，再用實時PCR技術檢測CD4+CD25+細胞的IL-10 mRNA相對表達量。結果顯示梅毒血清固定患者組外周血CD4+CD25+IL-10+細胞比例及IL-10 mRNA表達水平均比健康對照組明顯增高，認為IL-10參與Th2型免疫反應，造成梅毒患者外周血RPR滴度不轉陰。IL-33導致患者體內TP難以清除，是否是因為對IL-4、IL-10等Th2型細胞因子的促進作用，亦需進一步論證。

IL-33對梅毒感染的免疫反應的影響，可能還存在于Th1/Th2平衡的變化中，Leader[18]將芝加哥株梅毒螺旋體感染兔睪丸，實時反轉錄PCR定量檢測外周血的mRNA水平，發現在感染后第11天，IFN-γ的mRNA水平達到最高峰，而IL-4的水平僅為微量，提示在病程早期，機體抵抗梅毒螺旋體的免疫應答以Th1型為主，而隨著梅毒病程的進展，IL-10的mRNA水平在感染后第18天達到最高峰，提示病程后期階段轉為以Th2為主的免疫應答。王瑞等[19]也證實了此觀點，以ELISA法檢測早期梅毒患者的血清IFN-γ水平，結果Ⅰ期、Ⅱ期組的IFN-γ水平均顯著高于正常組，且Ⅰ期梅毒組高于Ⅱ期梅毒組，(231±19.7)ng/Lvs.(199.0±16.5)ng/L,P<0.05。IFN-γ在早期梅毒患者血清中呈高表達,且隨著患者梅毒分期進展而降低,其免疫應答由Th1優勢型轉為Th2優勢型。

本實驗中數據的變化也體現了在早期梅毒患者體內，存在Th1/Th2平衡的變化，治療前的IL-27水平在轉陰組比非轉陰組明顯較高，轉陰組IL-27/IL-33較高，提示轉陰組的早期梅毒患者，機體抵抗TP的免疫反應以Th1型為主，而IL-27參與的Th1反應，在機體抵抗TP的免疫應答的早期即已占主要地位；并且轉陰組治療前后的IL-27/IL-33均高于非轉陰組，提示IL-27有利于機體對TP的清除；非轉陰組的IL-33水平在治療后未明顯下降，提示隨著病程進展，非轉陰組患者體內的Th2反應未能受到足夠的抑制，不利于TP的清除。

綜上所述，IL-27及IL-33均可能參與TP感染過程中的免疫應答，IL-27可能有利于機體對TP的清除，而IL-33可能不利于機體對TP的清除。鑒于本實驗樣本量較小，尚需擴大樣本量、豐富檢測方法等進一步證實。

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Measurement of serum levels of IL-27 and IL-33 in early syphilis patients before and after therapy

ZHANG Pengfei,JI Bihua

Department of Dermatology,Wuhu No.1 People′s Hospital,Wuhu 241000,China

Objective： To measure the serum levels of IL-27 and IL-33 in patients with early syphilis infection before and after treatment for estimating the association of level changes in the two proteins with prognosis.Methods:Serum samples were obtained in patients with early syphilis infection.Then the patients were allocated to group of serological conversion(negative) or persistence(remaining positive) based on the follow-up serology measurement.Double-antibody sandwich ELISA was performed to detect the serum levels of IL-27 and IL-33 in the two groups of patients.Results:① Serological conversion group had higher serum IL-27 level than the persistence group before treatment (27.31±6.19)ng/Lvs.(20.98±5.10)ng/L,P<0.05,and the level of IL-27 was increased in the persistence group after therapy (25.34±6.66)ng/Lvs.(20.98±5.10)ng/L，P<0.05;②Serum IL-33 level was significantly decreased in serological conversion group after treatment compared to pre-treatment (4.41±1.33)ng/Lvs.(3.26±1.41)ng/L,P<0.05.Conclusion:IL-27 may facilitate clearance ofTreponemapallidum,yet IL-33 can not.

syphilis;IL-27;IL-33

1002-0217(2016)05-0453-04

2015-12-15

章鵬飛(1987-)，男，住院醫師，碩士，(電話)13956204533，(電子信箱)cleanspy@163.com；

.1

A

10.3969/j.issn.1002-0217.2016.05.014

季必華，男，主任醫師，碩士生導師，(電子信箱)jibihua@aliyun.com，通信作者.