豬繁殖與呼吸綜合征病毒NSP9蛋白單克隆抗體制備與鑒定

趙孟孟，張二芹，馮松林，郭依嘉，阮海宇，王文佳，邢星，張桂紅*

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，國家生豬種業(yè)工程技術(shù)研究中心，廣東省動物源性人獸共患病預(yù)防與控制重點實驗室，廣州　510642；2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，鄭州　450002；3.河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院制藥工程學(xué)院，鄭州　450046；4.廣西欽州保稅港區(qū)出入境檢驗檢疫局，廣西欽州　535008）

豬繁殖與呼吸綜合征病毒NSP9蛋白單克隆抗體制備與鑒定

趙孟孟1,2，張二芹2，馮松林1，郭依嘉2，阮海宇2，王文佳3，邢星4，張桂紅1*

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，國家生豬種業(yè)工程技術(shù)研究中心，廣東省動物源性人獸共患病預(yù)防與控制重點實驗室，廣州510642；2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，鄭州450002；3.河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院制藥工程學(xué)院，鄭州450046；4.廣西欽州保稅港區(qū)出入境檢驗檢疫局，廣西欽州535008）

根據(jù)NSP9非結(jié)構(gòu)蛋白參數(shù)選取相應(yīng)30 bp DNA片段，片段串聯(lián)后人工合成并連接pET-28a（+）載體，大腸桿菌BL21中表達(dá)得到可溶蛋白，鎳柱親和層析純化后免疫Balb/c小鼠，取免疫鼠脾細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合。細(xì)胞融合后利用間接ELISA法雜交瘤細(xì)胞陽性克隆篩選，2次亞克隆后共獲得3株抗PRRSV NSP9單克隆抗體，命名為3B17、3J13、3F19。這3株單抗可與大腸桿菌表達(dá)的蛋白產(chǎn)物和PRRSV感染的Marc-145細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)。在PRRSV感染的Marc-145細(xì)胞中，NSP9蛋白表達(dá)水平接毒后不斷升高，48 h達(dá)最高，為深入研究NSP9功能奠定基礎(chǔ)。

豬繁殖與呼吸綜合征病毒；NSP9；單克隆抗體；雜交瘤

網(wǎng)絡(luò)出版時間2016-7-20 16:39:49［URL］http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20160720.1639.012.html

趙孟孟,張二芹,馮松林,等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒NSP9蛋白單克隆抗體制備與鑒定[J].東北……