鮭魚甲病毒陽性核酸物質制備及RT-PCR檢測方法的建立

劉敏，杜航，宋傲臣，高帥，唐麗杰，蔣燁，李一經

（1.東北農業大學動物科學與技術學院，哈爾濱　150030;2.東北農業大學動物醫學學院，哈爾濱　150030）

鮭魚甲病毒陽性核酸物質制備及RT-PCR檢測方法的建立

劉敏1，杜航1，宋傲臣1，高帥1，唐麗杰2，蔣燁1，李一經2

（1.東北農業大學動物科學與技術學院，哈爾濱150030;2.東北農業大學動物醫學學院，哈爾濱150030）

為建立快速檢測鮭魚甲病毒（Salmonid alphavirus，SAV）RT-PCR方法，根據GenBank公布的E2基因序列（1 375 bp）設計引物，擴增SAV E2全長基因，利用假病毒制備技術獲得包裹E2核酸物質（RNA）的SAV假病毒溶液。以SAV假病毒作為陽性核酸物質質控品，以E2F：5'CCG-TTG-CGG-CCA-CAC-TGG-ATG 3'，E2R：5'CCTCAT-AGG-TGA-TCG-ACG-GCA-G 3'為引物，優化反應條件，建立SAV的RT-PCR檢測方法。結果表明，該方法可擴增SAV E2特異性516 bp的DNA片段，引物最適反應濃度為1.0 μmol·L-1，最佳退火溫度為57.5℃，對SAV的三種亞型SAV1（V4640）、SAV2（V4619）、SAV5（V4638）檢測結果均為陽性，對SVCV、IHNV和IPNV的PCR擴增結果均為陰性；并確定對SAV的核酸最低檢出量達1.59 pg；以RT-PCR方法在不同時間對每份樣品作3次重復檢測，檢測結果一致。表明此方法特異性強，敏感性高，穩定性和重復性較好，可用于SAV臨床診斷和檢測。

鮭魚甲病毒；SAV E2；核酸物質；RT-PCR；檢測方法

網絡出版時間2016-7-21 14:09:34[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20160721.1409.004.html

劉敏,杜航,宋傲臣,等.鮭魚甲病毒陽性核酸物質制備及RT-PCR檢測方法的建立[J].東北農業大學學報,2016,47(7):56-62.

Liu Min,Du Hang,Song Aochen,et al.Positive nucleic acid material preparation and establishment of a RT-PCR for salmonid alphavirus[J].Journal of Northeast Agricultural University,2016,47(7):56-62.(in Chinese with English abstract)

鮭魚甲病毒（Salmonid alphavirus，SAV）隸屬于披膜病毒科（Togaviridae），甲病毒屬（Alphavirus）［1］，主要感染大西洋鮭（Salmo salar）和虹鱒（Oncorhynchus mykiss）等鮭科魚類，引起胰腺、心肌炎癥和昏睡等癥狀，致死率達1%～48%，在魚類養殖各生長階段均有爆發［2-3］。目前該病廣泛流行于蘇格蘭、挪威、愛爾蘭、法國等歐洲國家［4-6］，2013年鮭魚甲病毒感染被列入OIE水生動物疫病名錄中?！?br>