老年乳腺癌患者癌組織中FoxP3蛋白的檢測意義

吳曉波　曹亞麗　劉秋明　陳　軍　胡平華　周　平　丁景弦

(南昌市第三醫院乳腺中心，江西　南昌　330009)

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老年乳腺癌患者癌組織中FoxP3蛋白的檢測意義

吳曉波曹亞麗劉秋明陳軍胡平華周平丁景弦

(南昌市第三醫院乳腺中心，江西南昌330009)

目的探析老年婦女乳腺癌及轉移灶內叉頭狀轉錄因子(FoxP)3蛋白的表達水平及其臨床意義。方法免疫組化EnVision兩步染色法檢測56例乳腺浸潤性導管癌老年女性患者腋下轉移灶內的FoxP3的表達水平，比較癌組織及癌旁組織內、原發灶及轉移灶內FoxP3表達及FoxP3+淋巴細胞，分析臨床病理特征與FoxP3表達及FoxP3+淋巴細胞的關系。結果癌組織及癌旁組織內FoxP3、FoxP3+淋巴細胞表達水平均有顯著差異(P<0.01)，原發灶與轉移灶中FoxP3、FoxP3+淋巴細胞表達水平均有顯著差異(P<0.01)。組織學分級、直徑與FoxP3、FoxP3+淋巴細胞表達水平均無關(P>0.05)，而淋巴結轉移、雌激素受體(ER)及Her2與FoxP3、FoxP3+淋巴細胞表達水平均相關(P<0.01)。孕激素受體(PR)與FoxP3表達水平無關(P>0.05)，卻與FoxP3+淋巴細胞表達水平相關(P<0.01)。結論乳腺浸潤性導管癌老年女性患者發生淋巴結轉移與FoxP3蛋白、FoxP3+淋巴細胞相關，對FoxP3蛋白進行抑制有助于發生轉移的乳腺癌患者的治療。

叉頭狀轉錄因子3；乳腺癌；浸潤性導管癌；淋巴結轉移

乳腺癌特別是浸潤性導管癌作為一種惡性腫瘤，一旦發生轉移則預后較差，療效往往不夠理想〔1〕。調節性T淋巴細胞(Treg)與乳腺癌關系密切；叉頭狀轉錄因子(FoxP)3是Treg的一個特異性標記，其作為轉錄因子也發揮著不可替代的作用〔2〕。本文旨在通過對老年乳腺癌淋巴結轉移灶及浸潤性導管癌中FoxP3蛋白水平的檢測，探析其臨床價值。

1　資料與方法

1.1一般資料2013年4月至2015年1月在我院接受治療的56例老年乳腺癌患者的臨床資料，癌組織制成蠟塊標本，經病理切片確診為浸潤性導管癌，嚴格依據2003年世界衛生組織(WHO)關于乳腺癌的相關分類標準〔3〕，且腋下的淋巴結檢出數目至少為15枚作為此次的診斷標準，均為女性，年齡≥60歲，其中伴發腋下淋巴結轉移者22例。

1.2研究方法主要試劑：福州邁新生物技術公司生產的pH6.0檸檬酸緩沖修復液和二氨基聯苯胺(DAB)顯色劑、辣根過氧化物酶(HRP)標記二抗，Santa Cruz公司生產的1∶50稀釋過的鼠抗人FoxP3單克隆抗體。

1.3免疫組化EnVision兩步染色法嚴格參照試劑盒所規定的步驟實施操作：切片、脫水；于3%雙氧水中浸泡3 min后，抗原熱修復30 min；將一抗滴入其中，于4℃下過夜；滴加二抗，30 min后進行顯色反應。期間每個步驟均經磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗，復染后封片。陽性對照：試劑盒內的陽性圖片；陰性對照：PBS替代一抗。

1.4結果判定FoxP3主要出現在癌細胞核或細胞質及Treg細胞核上，棕黃色顆粒的出現定義為陽性。行半定量分析。切片均取高倍視野10個進行陽性評分。按染色百分比與染色強度分別對癌細胞進行評分：染色百分比超過75%為4分，51%～75%為3分，26%～50%為2分，5%～25%為1分，低于5%為0分；染色強度：棕褐色為3分，棕黃色為2分，淡黃色為1分；無染色為0分。上述兩者的分數和超過6分為高表達；不超過6分則為低表達。FoxP3+淋巴細胞評分：視野超過3個，每個視野的陽性細胞數超過3個，3分；視野超過3個，每個視野的陽性細胞為1～3個，2分；視野不超過3個，每個視野的陽性細胞為1～3個，1分；沒有陽性細胞則為0分。2、3分為高表達；0、1分為低表達。

1.5統計學方法采用SPSS19.0統計軟件進行t檢驗和χ2檢驗。

2　結　果

2.1FoxP3表達癌組織及癌旁組織內FoxP3、FoxP3+淋巴細胞表達水平均有顯著差異(P<0.01)，見表1。

表1　癌組織及癌旁組織內FoxP3表達的比較(n,n=56)

2.2原發灶及轉移灶內FoxP3表達原發灶與轉移灶中FoxP3、FoxP3+淋巴細胞表達水平均有顯著差異(P<0.01)。見表2。

表2　原發灶及轉移灶內FoxP3表達的比較(n,n=22)

2.3臨床病理特征與FoxP3表達的關系組織學分級、直徑與FoxP3、FoxP3+淋巴細胞表達水平均無關(P>0.05)，而淋巴結轉移、雌激素受體(ER)及Her2與FoxP3、FoxP3+淋巴細胞表達水平均相關(P<0.01)。孕激素受體(PR)與FoxP3表達水平無關(P>0.05)，卻與FoxP3+淋巴細胞表達水平相關(P<0.01)。見表3。

表3　臨床病理特征與FoxP3表達的關系(n)

3　討　論

FoxP3和調節性Treg的分化與功能關系密切，大量的研究資料顯示Treg在抑制腫瘤免疫中扮演了重要的角色〔4〕。Treg存在于各種惡性腫瘤內，許多學者認為乳腺癌患者的預后與癌組織內的Treg息息相關〔5〕。Treg的亞群有γδ-黃胸鼠肺成纖維細胞(YCR)、CD8+Treg細胞及CD4+Treg細胞，其中CD4+Treg細胞的亞群有CD4+FoxP3-富含甘油三酯脂蛋白(Trl)細胞、抗原誘導及自然分化的CD4+CD25+FoxP3+Treg細胞〔6〕。乳腺癌患者體內FoxP3+Treg數目的增加通常被認作是乳腺癌惡化的體現，且被看作腫瘤進展的一個重要指標。大量因子可以間接或直接參與Treg反應，Treg最為重要的一種作用機制是轉化生長因子(TGF)通路，在腫瘤發展特別是轉移期間對腫瘤細胞擴散能力產生了極大影響〔7〕。Treg表達受體CCR4被其配體CCL22、CCL17及CCL5等吸引而匯集至腫瘤區域，激活后產生大量的TGF-β因子，該因子依靠各種途徑使腫瘤進展加速，此外Treg還會與部分癌基因互相作用，然而具體的作用機制目前還未確定。

研究顯示，FoxP3是X染色體的一種抑制基因，主要在各種惡性腫瘤如腸癌、肺癌、乳腺癌等癌細胞內表達，其在乳腺癌患者癌細胞內的表達FoxP3與此類患者的預后關系密切，特別是在淋巴轉移患者中〔8〕。FoxP3屬于轉錄因子，對癌細胞生長有著多種作用的影響，最新的研究發現FoxP3轉錄抑制乳腺癌癌基因Her2和SKP2。雖然FoxP3一般與乳腺癌患者的不良預后有關〔9〕，但是近期的研究結果顯示乳腺癌患者中，Her2過表達的亞型內的FoxP3陽性表達與其良好的預后有關，其作用機制也許是通過對乳腺癌Her2轉錄表達進行抑制，達到抑制Her2的目的，對癌細胞生長進行抑制來調節乳腺癌，說明腫瘤自身的特征是FoxP3蛋白發揮作用的重要基礎〔10〕。

目前尚未明確FoxP3對乳腺癌患者淋巴轉移的促進機制，推測可能有兩個方面：FoxP3+淋巴細胞發揮著免疫抑制的重要作用，可以通過細胞間的直接接觸或者是通過產生部分炎癥調節因子進行間接調節，Treg上升抑制了機體產生抗瘤免疫，加速了癌組織免疫逃逸，進而使轉移較容易產生；此外，癌組織內的FoxP3表達可以與癌細胞表達的受體CXCR4和CCR7連接，上調其表達及轉錄，促進其轉移和浸潤〔11〕。

本研究結果提示FoxP3蛋白是惡性腫瘤的標記；轉移灶內組織存在局部免疫狀態變化，FoxP3與浸潤性導管癌的淋巴結轉移可能相關，可以看作發生淋巴轉移的老年乳腺浸潤性導管癌女性患者的一個治療靶點，此外在靶向治療的同時應該盡量考慮轉移灶與原發灶間的差異，選擇適當的放化療治療方案。本研究提示FoxP3蛋白與多種臨床病理特征相關。但是尚不能將FoxP3作為唯一指標去判斷其是否發生淋巴結轉移。

1Jing Y，Bejarano MT，Zaias J，etal.In vivo anti-metastatic effects of uPAR retargeted measles virus in syngeneic and xenograft models of mammary cancer〔J〕.Breast Cancer Res Treat，2015；149(1)：99-108.

2Woo S，Lee BL，Yoon J，etal.Constitutive activation of signal transducers and activators of transcription 3 correlates with better prognosis，cell proliferation and hypoxia-inducible factor-1alpha in human gastric cancer〔J〕.Pathobiology，2011；78(6)：295-301.

3Morales-Sanchez A，Molina-Munoz T，Martinez-Lopez JL，etal.No association between epstein-barr virus and mouse mammary tumor virus with breast cancer in Mexican women〔J〕.Sci Rep，2013；3：2970.

4Li J，Jiang X.Loss of runt-related transcription factor 3 expression associated with human hepatocellular carcinoma progression and prognosis〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev，2011；12(9)：2285-90.

5Hertel J，Hirche C，Wissmann C，etal.Transcription of the vascular endothelial growth factor receptor-3 (VEGFR3) gene is regulated by the zinc finger proteins Sp1 and Sp3 and is under epigenetic control：transcription of vascular endothelial growth factor receptor 3〔J〕.Cell Oncol (Dordr)，2014；37(2)：131-45.

6Mason AL，Gilady SY，Mackey JR.Mouse mammary tumor virus in human breast cancer red herring or smoking gun〔J〕?Am J Pathol，2011；179(4)：1588-90.

7Naushad W，Bin RT，Gomez MK，etal.Detection and identification of mouse mammary tumor virus-like DNA sequences in blood and breast tissues of breast cancer patients〔J〕.Tumour Biol，2014；35(8)：8077-86.

8Motamedifar M，Saki M，Ghaderi A.Lack of association of mouse mammary tumor virus-like sequences in Iranian breast cancer patients〔J〕.Med Princ Pract，2012；21(3)：244-8.

9Tabriz HM，Zendehdel K，Shahsiah R，etal.Lack of detection of the mouse mammary tumor-like virus (MMTV) Env gene in Iranian women breast cancer using real time PCR〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev，2013；14(5)：2945-8.

10Baltzell K，Buehring GC，Krishnamurthy S，etal.Epstein-Barr virus is seldom found in mammary epithelium of breast cancer tissue using in situ molecular methods〔J〕.Breast Cancer Res Treat，2012；132(1)：267-74.

11Pond AC，Herschkowitz JI，Schwertfeger KL，etal.Fibroblast growth factor receptor signaling dramatically accelerates tumorigenesis and enhances oncoprotein translation in the mouse mammary tumor virus-Wnt-1 mouse model of breast cancer〔J〕.Cancer Res，2010；70(12)：4868-79.

〔2014-12-19修回〕

(編輯苑云杰)

江西省科學技術廳項目(No.20121BB070034)

吳曉波(1972-)，男，碩士，副主任醫師，主要從事乳腺癌手術、化療研究。

R737.9

A

1005-9202(2016)15-3727-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.15.054