康胰湯治療急性胰腺炎大鼠模型的效果

王綏能　龍育儒　曹小恒　王　菁　趙國(guó)棟　梁賢文

(海口市人民醫(yī)院普外三科，海南　海口　570208)

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康胰湯治療急性胰腺炎大鼠模型的效果

王綏能龍育儒1曹小恒1王菁1趙國(guó)棟梁賢文

(海口市人民醫(yī)院普外三科，海南海口570208)

目的觀察康胰湯(KYT)對(duì)大鼠急性胰腺炎的治療作用。方法選用SD大鼠，經(jīng)膽胰管逆行加壓注射4.5%牛磺膽酸鈉復(fù)制急性胰腺炎動(dòng)物模型；化學(xué)比色法測(cè)血清淀粉酶活性；快速比濁法測(cè)血清脂肪酶活性；濕棉球減干棉球重量測(cè)腹水量，并觀察大鼠6 h存活情況；顯微鏡觀察胰腺組織病理學(xué)改變，并進(jìn)行胰腺炎組織學(xué)評(píng)分。結(jié)果400 mg生藥/kg和800 mg生藥/kg的康胰湯使大鼠存活率由66.67%分別升至75.00%和91.67%；腹水量由(4.1±0.83)g分別降至(2.7±0.66)g和(2.0±0.37)g；血清淀粉酶由(450.8±81.25)U/dl分別降至(322.1±64.08)U/dl和(203.2±55.47)U/dl；血清脂肪酶由(625.6±105.24)IU分別降至(179.8±47.01)IU和(148.1±31.35)IU；與胰腺炎模型組比較均有顯著差異(P<0.05)。光鏡下可見(jiàn)康胰湯治療組胰腺水腫及炎性反應(yīng)均明顯減輕。結(jié)論康胰湯對(duì)大鼠急性胰腺炎具有較好治療作用。

康胰湯；急性胰腺炎

急性胰腺炎(AP)的發(fā)生和發(fā)展是由各種炎癥介質(zhì)、氧自由基、胰腺泡細(xì)胞內(nèi)鈣超負(fù)荷等多因素共同作用的結(jié)果〔1～4〕。目前治療AP的中藥制劑不少〔5～8〕，但臨床療效顯著的不多，而且其確切作用機(jī)制也未能完全明確。康胰湯是我院使用多年治療AP的復(fù)方中藥方劑，療效非常顯著〔9〕。該方劑主要組成：柴胡、黃岑、白芍、赤芍、郁金、木香、桃仁、金錢(qián)草、金銀花、蒲公英、炒萊菔子、大黃和芒硝等，但它的作用機(jī)制也一直沒(méi)有得到闡述。本研究擬觀察康胰湯治療AP大鼠的療效。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SD大鼠，體重(265±15)g，購(gòu)自廣州第一軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。自購(gòu)買(mǎi)之日起飼養(yǎng)于溫度(25.0±3.24)℃、相對(duì)濕度為(81.5 ±5.85)%的室內(nèi)條件下，光照周期光∶暗為1∶1。

1.2藥品與試劑康胰湯方劑的藥材購(gòu)自海口市人民醫(yī)院藥房，常規(guī)煎制，并經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國(guó)Band公司產(chǎn)品)濃縮至1 g生藥/ml備用，灌胃時(shí)用生理鹽水配成不同濃度，每只大鼠灌胃5 ml；4.5%牛磺膽酸鈉(Sigma公司產(chǎn)品)；血清淀粉酶和脂肪酶試劑盒購(gòu)于南京建成生物有限公司。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1動(dòng)物分組與模型制備使用雄性SD大鼠制備實(shí)驗(yàn)所需動(dòng)物模型。將小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組(AP組)、維拉帕米1 mg/kg鼠重組、400 mg生藥/kg鼠重康胰湯組和800 mg生藥/kg鼠重康胰湯組，每組12只。康胰湯組動(dòng)物每天灌胃不同劑量的康胰湯，其他組灌胃等體積生理鹽水，連續(xù)1 w。手術(shù)前大鼠禁食12 h，自由飲水，1%戊巴比妥鈉(3 ml/kg鼠重) 腹腔注射麻醉，常規(guī)消毒，參照Aho等〔10〕的方法復(fù)制大鼠AP模型：取上腹部正中切口，逐層切開(kāi)腹壁進(jìn)入腹腔，在近肝門(mén)處分離出胰膽管，用血管夾夾閉膽管，在十二指腸乳頭對(duì)側(cè)用4.5號(hào)注射器針頭穿透腸壁，刺入胰管，以恒定的速度(0.2 ml/min)緩慢注入牛磺膽酸鈉(按1 kg小鼠注入1.5 ml計(jì)算)，注射完后留針3 min，放開(kāi)血管夾，檢查術(shù)野無(wú)出血，逐層縫合腹壁各層后。將大鼠置于通風(fēng)處。假手術(shù)組同樣方法開(kāi)腹，翻動(dòng)胃和十二指腸后關(guān)腹，置于相同環(huán)境。

1.3.2觀察指標(biāo)記錄各組大鼠6 h存活情況，并計(jì)算存活率；存活大鼠于術(shù)后6 h剖腹，用準(zhǔn)備好的干棉球置于腹腔內(nèi)將腹水吸干并稱(chēng)重，隨后烤干稱(chēng)重，計(jì)算腹水量；肉眼觀察各組動(dòng)物胰腺組織大體標(biāo)本的病理改變，同時(shí)切取胰腺組織，常規(guī)行甲醛固定、石蠟包埋制片及HE染色，在顯微鏡下觀察胰腺病理?yè)p害程度，按Schmidt方法評(píng)分〔11〕，并記錄結(jié)果。

1.3.3血清標(biāo)本收集術(shù)后6 h，每組大鼠經(jīng)下腔靜脈穿刺抽取血液約10 ml，并抽取血液標(biāo)本置于4℃的離心機(jī)中，3 500 r/min離心15 min，分離上層血清，置于-20℃冰箱中待測(cè)。

1.3.4血清淀粉酶及血清脂肪酶檢測(cè)血清淀粉酶測(cè)定采用碘-淀粉比色法；血清脂肪酶測(cè)定采用快速比濁法，全部按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0軟件行單因素分析。

2　結(jié)　果

2.1大鼠存活情況假手術(shù)組大鼠術(shù)后6 h全部存活，AP組存活率為66.67%(8/12 只)，高劑量康胰湯治療組為91.67%(11/12只)，低劑量康胰湯治療組75.00%(9/12只)，維拉帕米組為83.33%(10/12只)。

2.2各組大鼠血清淀粉酶、脂肪酶、腹水量的比較AP組大鼠血清淀粉酶、脂肪酶活性及腹水量明顯高于假手術(shù)組，康胰湯組及維拉帕米組均低于AP組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.3胰腺標(biāo)本組織學(xué)觀察

2.3.1胰腺病理形態(tài)學(xué)觀察 大體標(biāo)本：除假手術(shù)組外，其余各組大鼠均可見(jiàn)胰腺組織水腫，表面顏色稍暗，并可見(jiàn)數(shù)量不等的散在出血點(diǎn)；腹腔內(nèi)均有少量腹水，并有少數(shù)大鼠呈淡紅色血性腹水；部分大鼠胰腺表面及大網(wǎng)膜可見(jiàn)輕重一不的皂化斑。部分AP組還可見(jiàn)胰腺片狀壞死，并與胃、結(jié)腸等粘連，小腸壁充血水腫。顯微鏡下表現(xiàn)：假手術(shù)組大鼠胰腺組織腺泡及

表1　康胰湯對(duì)大鼠血清淀粉酶、脂肪酶及腹水量的影響

與假手術(shù)組比較:1)P<0.01；與維拉帕米組比較:2)P<0.05；與AP組比較:3)P<0.05；下表同

小葉結(jié)構(gòu)完整，間質(zhì)未見(jiàn)明顯異常改變，未見(jiàn)細(xì)胞腫脹、壞死，亦未見(jiàn)出血壞死及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；而AP組大鼠胰腺組織可見(jiàn)大范圍凝固性壞死，細(xì)胞腫脹明顯，結(jié)構(gòu)較為模糊，不易辨認(rèn)，可見(jiàn)部分細(xì)胞溶解壞死，間質(zhì)亦有水腫，小血管壁可見(jiàn)壞死，伴有出血，小葉及小葉間隔亦有累及，另外，腺泡間隔內(nèi)還可見(jiàn)到大量的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)；維拉帕米組大鼠胰腺間質(zhì)可見(jiàn)較多中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，小葉內(nèi)腺泡細(xì)胞存在局灶性壞死，并可見(jiàn)明顯出血；低劑量康胰湯組大鼠胰腺顯微鏡下表現(xiàn)與維拉帕米組相似；高劑量康胰湯組主要表現(xiàn)：胰腺間質(zhì)有少許充血、水腫，伴有輕度中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，僅部分大鼠胰腺小葉內(nèi)腺泡細(xì)胞有散在出血點(diǎn)，未見(jiàn)明顯壞死灶。

2.3.2胰腺組織學(xué)評(píng)分比較AP組大鼠胰腺組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞水腫、出血及腺泡壞死評(píng)分明顯高于假手術(shù)組(P<0.01)；AP組大鼠相關(guān)指標(biāo)評(píng)分均明顯高于各用藥組(P<0.05)，其中維拉帕米組及低劑量康胰湯組大鼠胰腺組織細(xì)水腫、腺泡壞死程度較高劑量康胰湯組重(P<0.05)，而高劑量康胰湯組胰腺出血評(píng)分與維拉帕米組相似，但較低劑量康胰湯組低(P<0.05)；高劑量康胰湯組大鼠胰腺組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度較維拉帕米組輕(P<0.05)，且在一定范圍內(nèi)，隨著康胰湯劑量的增加，大鼠胰腺組織學(xué)評(píng)分降低。見(jiàn)表2。

表2　各組大鼠胰腺組織學(xué)評(píng)分比較±s，n=8，分)

3　討　論

在正常情況下胰液中的胰酶無(wú)活性，只有在十二指腸內(nèi)被激活后方有消化功能。在各種致病因素的作用下，各種胰酶提前在胰管或腺泡內(nèi)被激活，這些具有活性的胰酶在局部對(duì)胰腺及其周?chē)M織產(chǎn)生自身消化，各種蛋白酶、脂肪酶都可導(dǎo)致細(xì)胞壞死，磷脂酶A可產(chǎn)生有細(xì)胞毒性的溶血性卵磷脂，可溶解破壞細(xì)胞膜和線(xiàn)粒體膜的脂蛋白結(jié)構(gòu)，致細(xì)胞死亡；彈力蛋白酶可破壞血管壁和胰腺導(dǎo)管，使胰腺出血和壞死；脂肪酶將脂肪分解成脂肪酸后，與鈣離子結(jié)合形成脂肪酸鈣，使血鈣下降。胰液中各種酶被激活后的共同結(jié)果是胰腺和周?chē)M織廣泛充血、水腫，甚至出血壞死，并在腹腔和腹膜后滲出大量液體。大量胰酶及有毒物質(zhì)被腹膜吸收后入血后，可導(dǎo)致心、腦、肝、肺、腎等器官損害，引起多器官功能障礙綜合征。胰腺小葉內(nèi)動(dòng)脈及其分支之間無(wú)吻合存在，屬于終末動(dòng)脈，故胰腺組織對(duì)缺血非常敏感，急性胰腺炎時(shí)血流動(dòng)力學(xué)發(fā)生改變，加重胰腺的血液循環(huán)障礙，可使水腫性胰腺炎向出血壞死性胰腺炎轉(zhuǎn)化。

AP患者病變輕重不等，輕者病變多局限在體尾部，胰腺腫脹變硬，充血，被膜緊張，其下可有積液，腹膜內(nèi)脂肪組織特別是大網(wǎng)膜可見(jiàn)散在的皂化斑，腹水為淡黃色，預(yù)后較好；重者病變以胰腺實(shí)質(zhì)出血、壞死為特征，胰腺腫脹呈暗紫色，腹腔內(nèi)為血性混濁滲液，可導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征及多器官功能損害，引起嚴(yán)重腹膜炎、循環(huán)呼吸衰竭、休克等。AP有死亡率高、致殘率高、住院費(fèi)用高等特點(diǎn)。西醫(yī)治療以禁飲食、胃腸減壓、鎮(zhèn)痛解痙、抑制胃酸及胰液的分泌為主，存在感染征象時(shí)則需給予廣譜高效抗生素抗感染治療，同時(shí)補(bǔ)足血容量，維持水電解質(zhì)、酸堿平衡，保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，并予足量的腸外營(yíng)養(yǎng)支持，及時(shí)監(jiān)測(cè)病情變化發(fā)展。內(nèi)科保守治療效果不佳時(shí)，行急診手術(shù)治療。

在中醫(yī)范疇中，AP屬“脾膽痛”、“脾心痛”、“胃脘痛”、“結(jié)胸痛”，其主要病機(jī)是氣機(jī)升降失調(diào)、肝脾失和、肝失條達(dá)、脾失運(yùn)化、脾胃濕熱、氣滯濕阻，蘊(yùn)積于中焦而致病，根據(jù)“六腑以通為用，不通則痛”的理論，治療以舒肝解郁、健脾燥濕、清熱解毒、活血化瘀、瀉實(shí)通下為主。目前已經(jīng)知道，大黃可以抑制胰液的分泌，減輕胰液中胰蛋白酶、胰淀粉酶、彈性蛋白酶對(duì)胰腺組織的損傷，并可抑制多種炎癥細(xì)胞因子及氧自由基的釋放。康胰湯可緩解腸道麻痹，促進(jìn)胃腸道蠕動(dòng)，加快腸道功能恢復(fù)，促進(jìn)排氣排便，以減輕腹痛腹脹等癥狀，并降低腸黏膜的通透性，增加其屏障作用，防止腸內(nèi)細(xì)菌異位入血，減少毒素吸收，同時(shí)減輕腹內(nèi)壓，促進(jìn)靜脈回流，并可使膈肌上抬得以緩解，減輕了對(duì)肺的擠壓，可明顯改善呼吸、循環(huán)系統(tǒng)癥狀。AP時(shí)胰腺分泌的各種胰酶提前在胰管或腺泡內(nèi)激活，對(duì)胰腺及其周?chē)M織產(chǎn)生自身消化，是引起胰腺炎加重的一個(gè)重要因素，中藥康胰湯可抑制胰腺對(duì)各種胰酶的分泌，促進(jìn)胰液的排泄，減少胰液滯留引起的自身消化損傷。Gong等〔12〕報(bào)道，中藥對(duì)胰腺組織的再生具有促進(jìn)作用，聯(lián)合生長(zhǎng)抑素能提高轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子和表皮生長(zhǎng)因子的基因表達(dá)，增加DNA合成和蛋白含量，促進(jìn)胰腺的修復(fù)和再生。本研究結(jié)果顯示，康胰湯可減輕胰腺組織水腫、出血壞死，減少腹腔及腹膜后滲液，降低血清淀粉酶及脂肪酶膿度，明顯降低實(shí)驗(yàn)大鼠的死亡率。

1周新澤，陳玉泉.急性胰腺炎大鼠氧自由基、血栓素和前列環(huán)素變化及維生素E治療研究〔J〕.肝膽外科雜志，1996；8(3)：121-6.

2Formela LJ，Galloway SW，Kingsnorth AN.Inflammatory mediators in acute pancreatitis〔J〕.Br J Surg，1995；82(1)：6-12.

3蒲青凡，嚴(yán)律南，沈驥，等.胰腺腺泡細(xì)胞鈣超負(fù)荷在誘發(fā)大鼠由水腫性向壞死性胰腺炎轉(zhuǎn)變中作用〔J〕.中華醫(yī)學(xué)雜志，1999；79(2)：143-6.

4蘆波，錢(qián)家鳴.重癥急性胰腺炎病因及發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)用外科雜志，2012；32(7)：590-2.

5丁紅，李玖哲，伍西康，等.中西醫(yī)結(jié)合治療急性胰腺炎30例療效觀察〔J〕.云南中醫(yī)中藥雜志，2007；28(7)：11-4.

6許威，周木里，徐娉婷，等.銀杏苦內(nèi)酯B對(duì)急性壞死性胰腺炎大鼠肺組織PAF-R表達(dá)的影響〔J〕.胰腺病學(xué)，2007；7(4)：216-8.

7楊金虎，李大庫(kù)，張?zhí)炜梗?持續(xù)區(qū)域動(dòng)脈灌注奧曲肽、復(fù)方丹參治療犬重癥急性胰腺炎〔J〕.肝膽胰外科雜志，2007；19(4)：227-9.

8孔棣，王思懿，陳永華，等.大柴胡湯對(duì)蛙皮素和內(nèi)毒素引起的大鼠急性胰腺炎的作用〔J〕.中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，1997；28(3)：297-31.

9王綏能，林方略.中西醫(yī)結(jié)合治療重癥型胰腺炎38例〔J〕.海南醫(yī)學(xué)，2001；12(5)：39.

10Aho HJ，Koskensalo SM，Nevalainen TJ.Experimental pancreatitis in the rat.Sodium taurocholate-induced acute haemorrhagic pancreatitis〔J〕.Scand J Gastroenterol，1980；15(4)：411-6.

11Schmidt J，Lewandrowski K，Castillo CF.Histopathologic correlates of serum amylase activity in acute experimental pancreatitis〔J〕.Dig Dis Sci，1992；37(9)：1426-31.

12Gong Z，Yuan Y，Lou K，etal.Mechanisms of Chinese herb emodin and somatostatin analogs on pancreatitic regeneration in acute pancreatitis in rats〔J〕.Pancreas，2002；25：154-60.

〔2016-07-30修回〕

(編輯曲莉)

海南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No：808244)

趙國(guó)棟(1978-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事消化道腫瘤的外科治療研究。

王綏能(1964-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事消化道腫瘤的外科治療研究。

R57

A

1005-9202(2016)15-3640-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.15.013

1海南省熱帶藥用植物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室