胃癌組織中肌動蛋白樣-6a表達及其與臨床病理特征和預后的關系

邱會，胡敏，鐘敏鈺

(1華中科技大學附屬武漢市第一醫院，武漢430022；2華中科技大學同濟醫學院附屬武漢中心醫院)

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胃癌組織中肌動蛋白樣-6a表達及其與臨床病理特征和預后的關系

邱會1，胡敏2，鐘敏鈺1

(1華中科技大學附屬武漢市第一醫院，武漢430022；2華中科技大學同濟醫學院附屬武漢中心醫院)

目的觀察肌動蛋白樣-6a(ACTL6A)在胃癌組織中的表達，探討其與胃癌患者臨床病理特征及預后的關系。方法 收集手術切除的胃癌及對應癌旁組織共152例，采用qRT-PCR、Western blot法分別檢測ACTL6A mRNA及蛋白，分析ACTL6A表達與胃癌患者臨床病理特征的關系，采用Cox回歸模型和Kaplan-Meier生存曲線分析ACTL6A表達與胃癌患者無瘤生存期(DFS)、總生存期(OS)的關系。結果 胃癌組織中ACTL6A mRNA和蛋白表達水平均高于對應癌旁組織(P均<0.05)，ACTL6A mRNA表達與胃癌分化程度、臨床分期、浸潤深度及淋巴結轉移均有關(P均<0.05)；高表達ACTL6A mRNA的胃癌患者DFS為(12.3±1.5)個月、OS為(19.2±2.5)個月，均顯著低于ACTL6A mRNA低表達者的(17.4±1.2)個月、(25.6±2.6)個月，P均<0.05；Cox分析顯示，ACTL6A mRNA高表達是胃癌患者DFS及OS的獨立危險因素(P均<0.05)。結論 ACTL6A在胃癌組織中高表達，并與胃癌的惡性表型有關，可作為判斷胃癌患者腫瘤復發及預后評價的重要指標。

胃癌；肌動蛋白樣-6a；臨床病理特征；預后

胃癌是世界范圍內最常見惡性腫瘤之一，在亞洲尤為普遍[1,2]。早期胃癌患者經手術治療后能獲得較好的預后，但中晚期胃癌患者由于腫瘤轉移或化療耐藥等原因導致其病死率仍較高[3, 4]。目前，導致胃癌發生的具體分子機制仍不清楚。因此，研究胃癌發病機制、尋找新的診斷及預后評價指標，對指導胃癌患者的治療和改善患者預后具有重要意義。肌動蛋白樣-6a(ACTL6A)又名BAF53A，是ATP依賴性SWI/SNF樣BAF染色質重塑復合物的重要成員，在哺乳動物中編碼一個53 kD的亞基[5]。以往研究顯示，ACTL6A在細胞內的功能涉及多個生理過程，包括基因的轉錄調控、染色質重塑以及核轉位等[6]。近年來有研究發現，ACTL6A在原腸胚形成過程中參與調控神經祖細胞的增殖、分化以及遷移[7, 8]。目前，ACTL6A在人類惡性腫瘤中的作用研究較少。最近的一項研究發現，ACTL6A高表達于人肝癌組織中，并與肝癌患者的生存預后顯著相關，過表達ACTL6A能夠通過調控細胞的上皮間質轉換促進肝癌細胞遷襲轉移[9]。以上研究結果提示，ACTL6A在腫瘤中具有重要功能，但ACTL6A在胃癌中的表達情況及其臨床意義尚未見報道。本研究在胃癌及對應癌旁組織中檢測了ACTL6A的表達情況，分析其與胃癌臨床病理特征的關系及對胃癌患者預后的影響,為闡明ACTL6A在胃癌中的作用和尋找新的作用靶點提供理論基礎。

1　資料與方法

1.1臨床資料收集2006年1月～2011年12月于我院行手術切除治療并具有完整隨訪資料的胃癌及對應癌旁組織病理標本152例，每例樣本均經病理確診。所有病例的復發時間及總生存時間均通過術后電話隨訪獲得，時間截止2015年7月，無失訪病例。死亡123例、存活29例，無瘤生存期(DFS)為(18.5±2.1)個月、總生存期(OS)為(22.3±3.4)個月。胃癌組織及對應癌旁組織標本經手術切除后迅速進行多點取材，分塊置于液氮凍存或4%多聚甲醛固定并石蠟包埋保存備用。

1.2主要試劑總RNA提取試劑TRIzol、反轉錄試劑盒、qRT-PCR試劑盒SYBR prime script均購自Takara公司；RIPA裂解液購于上海碧云天生物技術有限公司；ACTL6A和GAPDH 基因引物由深圳華大基因生物科技有限公司合成；小鼠抗人ACTL6A單克隆一抗抗體和辣根過氧化物酶標記兔抗小鼠二抗均購自美國CST公司。

1.3ACTL6A蛋白檢測采用Western blot法。從凍存組織樣本用RIPA裂解液提取樣本總蛋白，分別取相同質量的蛋白樣品上樣10%SDS-PAGE電泳后轉印至PVDF膜；經5%脫脂奶粉室溫封閉1.5 h，4 ℃孵育ACTL6A(1∶1 000)一抗以及GAPDH(1∶1 000)一抗過夜；TBST洗膜3次，室溫孵育辣根過氧化物酶標記的二抗(1∶1 000)1.5 h；TBST洗膜3次，用ECL顯影，以目的條帶與內參CAPDH的光密度比值表示目的蛋白表達量。

1.4ACTL6A mRNA檢測采用qRT-PCR法。將液氮凍存的胃癌組織及癌旁組織標本于預冷研缽中迅速研碎，加入1 mL TRIzol提取試劑提取總RNA，取1 μg總mRNA按照cDNA反轉錄說明書反轉成cDNA。引物序列：ACTL6A上游引物5′-GTCAAAAACAAGGGCTCCAA-3′，下游引物5′-AGTCACTTCGCCAGTTAGCC-3′；GAPDH上游引物5′-TATGCTCTCCTCATGCATTG -3′，下游引物5′-GGGACGACCTTCGATCTACC-3′。按qRT-PCR說明書配制反應體系進行PCR擴增反應。以GAPDH基因為內參，采用2-ΔΔCt法計算ACTL6A mRNA相對表達量。將所有胃癌組織標本中的ACTL6A表達量取平均值，大于平均值為ACTL6A高表達，小于平均值為ACTL6A低表達。

2　結果

2.1ACTL6A蛋白在胃癌和癌旁組織中的表達胃癌組織中ACTL6A蛋白表達量(5.37±0.32)高于癌旁組織(1.79±0.19)，P<0.05。

2.2 ACTL6A mRNA在胃癌和癌旁組織中的表達胃癌組織中ACTL6A mRNA相對表達量(4.7±1.34)高于癌旁組織(1.8±0.52)，P<0.01。152例胃癌患者中，ACTL6A mRNA高表達110例、低表達42例。

2.3ACTL6A mRNA表達與胃癌臨床病理參數的關系ACTL6A mRNA表達與胃癌的分化程度、臨床分期、浸潤深度及淋巴結轉移均有關(P均<0.05)，與患者性別、年齡及腫瘤遠處轉移均無關(P均>0.05)。見表1。

2.4ACTL6A mRNA表達與胃癌患者預后的關系胃癌患者中，ACTL6A mRNA高表達者DFS為(12.3±1.5)個月、OS為(19.2±2.5)個月，均顯著低于ACTL6A低表達者的(17.4±1.2)個月、(25.6±2.6)個月，P均<0.05。COX回歸模型分析顯示，ACTL6A mRNA高表達是判斷胃癌患者DFS及OS的獨立危險因素。見表2、表3。

表1　　　　ACTL6A mRNA表達與胃癌臨床病理特征的關系(例)

表2　影響胃癌患者DFS及OS相關因素的單因素分析

注：HR為相對風險比；95%CI為95%可信區間。

表3　影響胃癌患者DFS及OS相關因素的多因素分析

注：HR為相對風險比；95%CI為95%可信區間。

3　討論

本研究發現，ACTL6A蛋白在胃癌組織中的表達顯著高于對應的癌旁組織，ACTL6A mRNA高表達的胃癌患者與其惡性的臨床表型有關，且ACTL6A mRNA高表達可作為預測胃癌患者預后的獨立危險因素。

SWI/SNF家族是研究非常廣泛的染色質重塑復合體，包括多達12個組份，在哺乳動物發育過程中起著重要的調控作用。其中，高度保守的關鍵復合體BAF復合體在不同的時間、空間內特定的組織特異表達來維持生物的發育和分化[10～13]。有研究發現，BAF53B能夠招募BAF復合體結合到基因的啟動子區域從而促進基因的表達[14]。目前，對ACTL6A(BAF53A)的功能也有相關報道。例如：在造血系統中，ACTL6A mRNA高表達于造血干細胞和祖細胞，而在成熟的骨髓細胞里面其表達顯著下降，提示ACTL6A在維持造血干細胞和祖細胞的干性方面發揮重要作用[6,15]。

目前，關于ACTL6A在人類腫瘤中的作用報道相對較少。Taulli等[15]研究發現，ACTL6A在原發性橫紋肌瘤組織的表達顯著高于正常肌肉組織，持續的ACTL6A表達能夠影響肌細胞的分化，沉默ACTL6A的表達能抑制腫瘤生長，提示ACTL6A能夠作為治療腫瘤的新靶點。本研究也發現，在胃癌組織中ACTL6A mRNA和蛋白表達量顯著高于對應的癌旁組織，與以前的報道一致。Xiao等[9]在肝癌中的最新發現表明，ACTL6A在肝癌的轉移和促進上皮間質轉化方面發揮重要作用，ACTL6A高表達于肝癌細胞系和肝癌組織，臨床病理分析發現高水平的ACTL6A與惡性臨床參數顯著相關，并在肝癌患者中作為評估OFS、OS的獨立危險因素。本研究分析發現，ACTL6A mRNA表達與胃癌患者的惡性病理特征如腫瘤大小、臨床分期、病理分期及淋巴結轉移均有關，ACTL6A mRNA高表達的胃癌患者其DFS及OS均顯著縮短，多因素分析發現ACTL6A mRNA高表達可作為評估胃癌患者預后的獨立危險因素。以上結果提示，ACTL6A在胃癌的發生發展中具有重要作用，其表達水平可以作為判斷胃癌患者復發及預后的重要指標。本研究發現，ACTL6A幾乎完全表達于細胞核，這與過去報道的發揮染色質重塑的作用密切相關，結合臨床病理分析發現其高表達與胃癌浸潤深度、淋巴結轉移等惡性參數相關。我們推測，ACTL6A在細胞核內起著致癌基因轉錄調控的功能，但其具體功能和機制有待進一步實驗證明。

綜上所述，ACTL6A高表達于胃癌組織，高水平ACTL6A與胃癌惡性臨床病理特征及患者不良預后密切相關。ACTL6A表達可作為判斷胃癌患者術后復發和不良預后的重要指標，對其作用及機制的深入研究將有助于提高胃癌診治水平和發現新的治療靶點。

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湖北省武漢市衛計委臨床醫學科研項目(WZ13Z03)。

鐘敏鈺(E-mail： 93901226@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.34.011

R735.2

B

1002-266X(2016)34-0030-03

2016-03-23)