酶聯免疫吸附分析檢測鰭藻毒素DTX1和DTX2

劉 麗， 劉 磊， 趙 芮， 韋 寧， 楊 琳，劉仁沿， 梁玉波*， 孫 茜

(1.大連海洋大學水產與生命學院，遼寧大連116023；2.國家海洋環境監測中心，遼寧大連116023)

大田軟海綿酸(Okadaic Acid，OA)及其天然衍生物鰭藻毒素(Dinophysistoxins，DTXs)是腹瀉性貝毒(Diarrhetic Shellfish Poisoning，DSP)的致腹瀉性成分。這些毒素是以OA為骨架結構的天然同系物[1]，其化學結構見圖1。此類毒素可以通過食物鏈的傳遞，在貝類體內累積。食用者誤食了染毒貝類后，會出現腹瀉、嘔吐等中毒癥狀。此類毒素還能促進細胞凋亡和腫瘤的形成[2,3]。OA和DTXS是分布范圍最廣、發病率最高的海洋生物毒素之一，眾多的沿海國家或地區都已發現和檢出了這類毒素[4]。歐盟規定雙殼貝類中OA及其等價物毒素的安全劑量為160 μg/kg貝肉[5]。

圖1 OA和DTXs 毒素的化學結構Fig.1 Structures of okadaic acid and dinophysistoxins OA:R1=CH3,R2=H;DTX1:R1=CH3,R2=CH3;DTX2:R1=H,R2=CH3.

目前，針對DSP的檢測方法主要有小鼠生物法[6]、液-質聯用(LC-MS/MS)法[7]、磷酸酶活性抑制檢測法[8]和酶聯免疫吸附分析法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA)[9]等。ELISA法是利用抗體抗原的特異性結合，通過加入酶標記或熒光標記的二抗，經底物顯色，用酶標儀測定的免疫化學方法，操作簡單方便，不需要復雜的儀器設備，檢測時間短，分析速度快，適于大量樣本的快速篩查。目前，國外已有可用于藻類和貝類樣品中OA和DTX1檢測的酶聯免疫分析商品化試劑盒，國內對此類毒素試劑盒的開發也有研究報道，但只是針對OA的檢測[10 - 12]，而對DTXs檢測尚未見研究報道。本課題組曾制備了抗OA的單克隆抗體[13]，并建立了相應的ELISA檢測方法。本文利用抗OA的單克隆重抗體，研究測試了該抗體對標準品OA、DTX1和DTX2的競爭抑制反應，并嘗試利用該抗體建立檢測DTX1和DTX2的酶聯免疫實驗方法，以期為我國DTX1和DTX2的快速檢測奠定技術基礎。……