異硫氰酸熒光素-牛血清蛋白-Pb2+“開關”型熒光探針測定尿液中胰蛋白酶

劉長青， 廖秀芬， 陶慧林*， 孫 超， 徐 杰

(1.青海省有色地質礦產勘查局地質礦產勘查院測試中心,青海西寧 810006；2.桂林理工大學化學與生物工程學院,廣西桂林 541004)

胰蛋白酶在脊椎動物中起消化作用，還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體，是特異性最強的蛋白酶[1,2]，而且是決定蛋白質的氨基酸排列不可缺少的工具。此外，胰蛋白酶的測定對于研究胰腺的外分泌功能起著至關重要的作用[3]。在正常人的尿液中基本不含胰蛋白酶，但是在患有急性胰腺炎的病人的尿液中，胰蛋白酶的含量卻很高(平均含量 84.4 μg/mL)[4]。因此，建立測定尿液中胰蛋酶的方法在臨床診斷中具有重要意義。

目前，測定胰蛋白酶的方法主要有比色法[5,6]、色譜法[7]、電化學法[8]、熒光分析法[9,10]、化學發光法[11]、酶聯免疫法[12]等。本文提出了利用異硫氰酸熒光素(FITC)-牛血清白蛋白(BSA)-Pb2+熒光探針測定胰蛋白酶的方法。實驗表明，在表面活性劑十二烷基苯磺酸鈉(DBS)存在下，FITC-BSA-Pb2+發出較強的熒光，此時探針處于“打開”狀態。而當加入胰蛋白酶后，FITC-BSA-Pb2+的熒光強度發生了相應的猝滅，探針被“關閉”。利用胰蛋白酶的濃度與FITC-BSA-Pb2+探針的熒光猝滅程度的線性關系，建立了一種測定尿液中胰蛋白酶的新方法。該方法靈敏度高，檢出限低，線性范圍寬，操作簡單，對環境要求低。已經成功應用于實際樣品的檢測。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

RF-5301PC型熒光光度計(日本，島津公司)；TU-1901型雙光束紫外-可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；……