熒光法研究苯胺藍(lán)與人血清白蛋白的相互作用

董文娟， 侯曉莉， 董 川*

(山西大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程研究中心，山西太原 030006)

人血清白蛋白(HSA)是人體血漿中含量最豐富的蛋白質(zhì)，占血漿總蛋白的60%，是維持血液膠體滲透壓的主要成分和運(yùn)輸內(nèi)源性及外源性物質(zhì)的重要載體[1],能與許多內(nèi)源及外源性化合物結(jié)合起到轉(zhuǎn)運(yùn)的作用。蛋白質(zhì)中存在著酪氨酸和色氨酸殘基，它們本身可發(fā)射熒光，這種內(nèi)源熒光的猝滅過程是研究蛋白質(zhì)和其他物質(zhì)相互作用的重要方法。例如人們通過研究染料分子與蛋白質(zhì)相互作用后的熒光特性變化，從而獲得有關(guān)蛋白質(zhì)大分子結(jié)構(gòu)和性能的相關(guān)信息。水溶性苯胺藍(lán)(AnB)是一種重要的三苯甲烷酸性染料，被廣泛的用于羊毛、蠶絲及羊毛混紡的染色，且它的染色技術(shù)在植物、動(dòng)物和環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域都展現(xiàn)出很好的應(yīng)用潛力[2]。同時(shí)它還曾用作酸堿指示劑、生物染色劑用于神經(jīng)組織、細(xì)胞、結(jié)締組織的染色[3]。已有研究報(bào)道了利用水溶性苯胺藍(lán)的吸光光度法來測(cè)定人血清白蛋白[4 - 6]，還未見用熒光法來研究苯胺藍(lán)與蛋白質(zhì)相互作用的報(bào)道。

本文采用熒光光譜法研究AnB與HSA的相互作用機(jī)制,研究二者相互作用的結(jié)合位點(diǎn)、結(jié)合常數(shù)，以及溫度對(duì)結(jié)合常數(shù)的影響,并從熱力學(xué)角度探討它們之間的主要作用力類型。這對(duì)于闡明AnB與HSA相互作用機(jī)理，以及AnB對(duì)活體生物組織染色時(shí)的作用機(jī)制具有一定的意義。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

CARY Eclipse熒光分光光度計(jì)(美國，VARIAN)(自帶恒溫裝置)；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；……