多方法組合分析脲誘導的淀粉液化芽孢桿菌α -淀粉酶去折疊和重折疊過程的構象轉化

楊文慧， 冀 旭， 邊六交*

(西北大學生命科學學院,陜西西安 710069)

作為從分子水平上闡明生命奧秘的中心課題之一，蛋白質分子的去折疊和重折疊過程一直受到生物化學、生物物理學和結構生物學等領域研究者的高度關注。目前普遍認為完全的去折疊或重折疊過程往往不是一步就能達到的[1 - 5]，而是存在一個或多個穩定的部分折疊中間態[6,7]，它們對研究蛋白質分子的功能、自構、折疊和集聚等都具有重要意義[8 - 10]。

研究蛋白分子去折疊和重折疊過程時，常用細胞色素C、卵清溶菌酶[11,12]等分子量較小、結構比較緊湊的蛋白質以及牛碳酸酐酶B[13,14]作為模型蛋白分子。本實驗室曾分別研究和比較了由變性劑誘導的結構更為復雜的豬胃蛋白酶[15]和牛血清白蛋白[16]分子的去折疊過程，并對這兩種蛋白折疊中間態的分布和過渡進行了研究[17]；也對鹽酸胍誘導的分子量較大但結構又不過于復雜的淀粉液化芽孢桿菌α-淀粉酶分子的去折疊過程進行了研究[18]。在該研究基礎上，本文利用變性和非變性電泳、體積排阻色譜、內源熒光發射光譜、熒光相圖、熒光猝滅以及活性測定等組合分析方法研究了變性劑脲誘導的淀粉液化芽孢桿菌α-淀粉酶分子的去/重折疊過程，并與一般常用的分子量較小的蛋白分子的去/重折疊過程進行比較,為以后研究分子量更大、結構更為復雜的蛋白質分子的去/重折疊過程奠定基礎。

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

F-4500型熒光光譜儀、U-3310型紫外-可見分光光度計(日本，日立公司)；……