腫瘤壞死因子α、超敏C反應蛋白在新生兒缺氧缺血性腦病中的變化及臨床意義

尚云，石計朋，楊衛紅，馬慧敏，郭喜霞，唐成和

(新鄉醫學院第一附屬醫院，a.新生兒科,b.耳鼻喉科,c.兒內科，河南 新鄉　453100)

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◇臨床醫學◇

腫瘤壞死因子α、超敏C反應蛋白在新生兒缺氧缺血性腦病中的變化及臨床意義

尚云a，石計朋a，楊衛紅a，馬慧敏b，郭喜霞c，唐成和a

(新鄉醫學院第一附屬醫院，a.新生兒科,b.耳鼻喉科,c.兒內科，河南 新鄉453100)

目的檢測血清中腫瘤壞死因子α (TNF-α)，超敏C反應蛋白(HsCRP)在新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)中變化及意義，探討其相關性。方法選取臨床確診的74例HIE患兒(其中輕度31例，中度26例，重度17例；預后良好32例，預后不良42例)為觀察組，74例正常健康新生兒為對照組，于生后48 h應用酶聯免疫吸附(ELISA)及放射免疫分析法檢測兩組新生兒血清TNF-α及HsCRP表達水平。結果與對照組比較，觀察組中TNF-α及HsCRP表達水平均顯著增高，TNF-α結果[(17.20±1.26 )vs( 97.00±5.97) ng·L-1](P<0.05)；HsCRP結果[(0.51±0.18)vs(11.93±1.91) mg·L-1](P<0.05)；輕度、中度、重度HIE中TNF-α及HsCRP表達隨著病情程度加重逐漸增高，組間兩兩比較，差異有統計學意義，TNF-α結果[輕度HIE組(31.37±3.28)vs中度HIE組(52.59±5.19)vs重度HIE組(102.65±7.81) ng·L-1](P<0.05)；HsCRP結果[輕度HIE組(4.63±0.69)vs中度HIE組(7.56±1.19)vs重度HIE組(12.92±3.25) mg·L-1](P<0.05)；預后良好、預后不良HIE中TNF-α及HsCRP表達預后不良患兒HIE組較預后良好增高，TNF-α結果[預后良好HIE組(44.32±4.84)vs預后不良HIE組(90.23±7.37) ng·L-1](P<0.05)；HsCRP結果[預后良好HIE組(5.99±0.99)vs預后不良HIE組(9.71±2.14) mg·L-1](P<0.05)。結論隨著病情程度加重及預后不良程度加重，TNF-α及HsCRP表達水平逐漸增高，提示TNF-α及HsCRP可能參與了HIE的病理生理過程，動態監測二者變化趨勢將有助于HIE的病情程度判斷及預后評估。

缺氧缺血,腦；腫瘤壞死因子α;C反應蛋白質;嬰兒,新生

新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)在圍產期神經系統疾病中占有重要位置，每年約有30萬殘疾兒童出現，成為危害我國兒童生活質量的重大問題，且在臨床上部分新生兒因為及時的復蘇而恢復正常，并未診斷為HIE，然而后期隨訪發現這些出生時需復蘇而未發展成HIE的所謂正常嬰兒均存在智商低下，部分有認識障礙等后遺癥，因此，HIE仍是全球關注的課題[1]。目前HIE的發病機制尚不十分明確，但多項研究已證明炎性反應、細胞因子釋放等在其發病機制中起重要作用[2-3]，同時發現腫瘤壞子因子α(TNF-α)及超敏C反應蛋白(HsCRP)是HIE發生發展中關鍵的細胞因子及炎性蛋白之一，對于TNF-α及HsCRP與HIE疾病的輕重研究較多，較少見兩指標與HIE疾病預后的關系，故本研究通過檢測TNF-α及HsCRP在不同程度、不同預后的HIE中的變化，探討兩者與HIE的程度及預后的相關性，為臨床早期診斷、判斷病情及評價預后提供理論依據，進而減少腦損傷后遺癥、改善預后。

1　資料與方法

1.1臨床資料收集2011年2月到2013年2月新鄉醫學院第一附屬醫院兒科臨床確診的HIE患兒74例為觀察組，根據病情嚴重程度，將其分為輕度組(31例)，中度組(26例)，重組度(17例)，HIE病例均依據中華醫學會兒科學分會新生兒學組HIE臨床診斷標準和分度標準[4]，根據預后情況[5]，將其分為預后良好組(32例)，預后不良組(42例)，觀察組中男性42例，女性32例，均為足月兒，胎齡(39.6±2.7)周，體質量(3 591±619)g，同時選擇新鄉醫學院第一附屬醫院同期分娩的74例正常健康足月新生兒為對照組，其中男性44例，女性30例，胎齡(39.5±2.9)周，體質量(3 418±524)g，對照組均無窒息、感染、羊水、胎盤異常及宮內窘迫病史，觀察組無合并其它疾病，兩組新生兒母親均無感染，無孕期合并癥，新生兒性別、胎齡、出生體質量、分娩方式等方面差異無統計學意義(P>0.05)，本研究經新鄉醫學院第一附屬醫院醫學倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

1.2方法及結果判定樣本采集：對照組及觀察組均分別于生后48 h采集其外周靜脈血3 mL，室溫下以3 000 r·min-1速度離心10 min，收集血清，放置于-20 ℃冰箱保存待用。試劑及標本的檢測：TNF-α及HsCRP免疫試劑盒購置LIFEKEY BioMeditech公司。采用酶聯免疫吸附(ELISA)及放射免疫分析方法(RIA)檢測，嚴格按照說明書步驟進行。

2　結果

2.1兩組血清中TNF-α及HsCRP檢測結果比較對照組和觀察組TNF-α分別為(17.20±1.26)、(97.00±5.97) ng·L-1，t=3.626；對照組和觀察組HsCRP分別為(0.51±0.18)、(11.93±1.91) mg·L-1；兩組比較差異有統計學意義(t=5.126,P<0.001),提示HIE觀察組血清中TNF-α、HsCRP表達均較正常健康對照組增強,見圖1。

圖1　兩組血清中TNF-α、HsCRP檢測結果比較

2.2不同疾病程度HIE中TNF-α及HsCRP檢測結果比較輕、中、重度HIE組TNF-α分別為(31.37±3.28)、(52.59±5.19)、(102.65±7.81) ng·L-1； 輕、中、重度HIE組HsCRP分別為(4.63±0.69)、(7.56±1.19)、(12.92±3.25) mg·L-1；輕、中、重度HIE中TNF-α及HsCRP表達水平隨著病情程度加重增高，組間兩兩比較：輕度HIE組與中度HIE組TNF-α比較q=4.34，中度HIE組與重度HIE組TNF-α比較q=4.86，輕度HIE組與重度HIE組TNF-α比較q=6.68；輕度HIE組與中度HIE組HsCRP比較q=4.61，中度HIE組與重度HIE組HsCRP比較q=4.97，輕度HIE組與重度HIE組HsCRP比較q=6.37，差異有統計學意義(P<0.05)，見圖2。

圖2　輕、中、重度組血清中TNF-α、HsCRP檢測結果比較

2.3預后良好組及預后不良組血清中TNF-α、HsCRP檢測結果比較預后良好HIE組和預后不良HIE組的TNF-α分別為：(44.32±4.84)、(90.23±7.37) ng·L-1，t=3.433；預后良好HIE組和預后不良HIE組的HsCRP分別為：(5.99±0.99)、(9.71±2.14) mg·L-1,t=2.396，預后良好HIE組及預后不良HIE組中TNF-α及HsCRP表達水平隨著預后不良程度加重增高，其中預后不良HIE組表達較高，差異均有統計學意義(P<0.05)，見圖3。

3　討論

HIE是指圍產期缺氧窒息，導致腦的缺氧缺血性損害[6]。包括特征性的神經病理及病理生理改變，并在臨床上出現一系列腦病的表現，如新生兒驚厥[7]，是新生兒腦病的最常見的原因之一[8]，占新生兒腦病的50%～80%[9]，部分病例可留有不同程度神經系統后遺癥[10]，是導致新生兒死亡和嬰幼兒神經系統功能障礙的主要原因之一[11-12]。隨著新生兒窒息復蘇及重癥監護技術的提高，HIE的死亡率逐漸下降，然而其遠期不同程度的神經發育問題仍居高不降，故對于早期診斷及治療，預防神經系統后遺癥尤為重要[13-14]。大量研究證明免疫系統尤其是炎性細胞因子與HIE的發生密切相關，腦缺血再灌注后，腦組織局部過度炎性反應是造成腦損傷的重要原因，而細胞因子在這個病理過程中起著非常重要的作用，TNF-α是炎性反應中主要因子之一[15]，腦脊液檢測顯示TNF-α在腦損傷早期即可產生，且其含量與神經損傷的嚴重程度程正相關。研究證實TNF-α可誘導其它細胞因子如IL-6，IL-8和炎性介質如血栓素A2產生，增強中性粒細胞及單核細胞的黏附作用，促進內皮細胞粘附分子產生及過度炎性反應，增加血管通透性，促使腦水腫，誘導腦細胞調亡，加重腦缺血-再灌注損傷。本研究顯示急性期 HIE 組患兒血清TNF-α水平高于正常新生兒，且隨著 HIE 病情的加重，TNF-α水平有顯著性上升，與王團美等[16]報道一致，但本研究還顯示，HIE中TNF-α水平隨預后不良程度增加而升高，說明血清細胞因子TNF-α參與了新生兒HIE 腦損傷的過程，隨著HIE病情及預后不良加重，細胞因子水平顯著上升。

圖3　預后良好及不良HIE組血清中TNF-α、HsCRP檢測結果比較

CRP是20世紀30年代Tillett 和 Francis 首次發現,因其能與肺炎雙球菌細胞壁C多糖發生沉淀反應而得命。血清CRP是一種敏感的急性時相反應蛋白[17],在胎兒時期,主要由肝細胞合成,且不能通過胎盤。新生兒期，CRP以微量形式存在于血清中,正常成人血清CRP含量亦較低,約99%人數小于8 mg·L-1，在炎性反應或應激狀態下,血清CRP在數小時內急劇升高數十倍甚至上百倍[18]。個體病情緩解后,血清CRP又迅速降低。血清CRP常作為判斷細菌感染的早期指標，它是機體重要防御物質。臨床實驗室采用高敏感的檢測技術，測定出的低濃度CRP，稱為高敏感或HsCRP[19]，因其有高靈敏度及準確度的優點，窒息引發腦缺氧缺血損傷后，HsCRP的改變對于HIE有重要臨床意義。本研究檢測了HsCRP在不同程度及預后不同HIE組中，發生后48 h HIE組HsCRP血清中濃度高于正常新生兒組，HIE損傷程度越重，HsCRP濃度越高，預后越差HIE患兒HsCRP濃度越高，提示HsCRP參與了與HIE有關的炎性免疫反應，可以通過HsCRP數值變化了解患兒神經系統是否損傷及損傷程度和炎性狀態，預測患兒預后情況。

TNF-α、HsCRP與HIE病程、預后密切相關，可以作為HIE的早期診斷、病情評估以及判斷預后的重要指標之一，對于存在窒息缺氧患兒在臨床癥狀未出現之前可通過其二者的變化對患兒提前做出診斷，并采取相應治療措施，預防神經系統并發癥，提高人口素質。

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Changes and clinical significance of tumor necrosis factor-α and high-sensitivity C-reactive protein in neonates with hypoxic-ischemic encephalopathy

SHANG Yun,SI Jipeng,YANG Weihong,et al

(TheFirstAffiliatedHospitalofXinxiangMedicalUniversity,Xinxiang,Henan453100,China)

ObjectiveTo investigate the potential roles of tumor necrosis factorα (TNF-α) and highsensitivity Creactive protein (HsCRP) in the progression and prognosis of neonatal hypoxicischemic encephalopathy(HIE).MethodsThis study was a clinical experimental study.Totally 74 cases of neonates with HIE diagnosed in the First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University From February 2011 to February 2013 were enrolled as observation group (mild 31 cases,moderate 26 cases,severe 17 cases;32 cases with good prognosis,42 poor prognosis),and another 74 cases of normal healthy neonates were selected as control group.The levels of TNF-α and HsCRP in all samples were measured 48 hours after being born by enzymelinked immunosorbent assay (ELISA) and radio immunoassay (RIA) method.ResultsThe data revealed significant upregulation of the serum levels of TNF-α and HsCRP in patients with HIE.The increase in the levels of these inflammatory mediators correlated with the severity of the disease and also had a positive correlation with the prognosis of the disease.Serum levels of TNF-α and HsCRP in HIE group were significantly higher than those in normal control group.TNF-α levels were 17.20±1.26vs97.00±5.97 ng·L-1(P<0.05)；HsCRP levels were 0.51±0.18vs11.93±1.91 mg·L-1(P<0.05).Serum levels of TNF-α and HsCRP in the moderate and severe patient groups were significantly higher compared with those in the mild group(P<0.05).Furthermore,there was a significant upregulation of the cytokines in the severe group compared with those in the moderate group(P<0.05).The differences among 3 groups were also significant ,and they were the highest with severe HIE,TNF-α levels(mild group 31.37±3.28vsmoderate group 52.59±5.19vssevere group 102.65±7.81 ng·L-1,P<0.05);HsCRP levels(mild group 4.63±0.69vsmoderate group 7.56±1.19vssevere group 12.92±3.25 mg·L-1,P<0.05).Comparison of the serum levels of TNF-α and HsCRP in patients with different prognoses.The levels of TNF-α,in patients with either a poor or good prognosis were further analyzed.Significant upregulation of the levels of TNF-α (90.23±7.37 ng·L-1) and HsCRP levels(9.71±2.14 mg·L-1,P<0.05) were observed in patients who had a poor prognosis compared with those in the patients who had a good prognosis,TNF-α (44.32±4.84 ng·L-1) and HsCRP (5.99±0.99 mg·L-1).ConclusionsWith the aggravation of the disease and poor prognosis aggravation,TNF-α and HsCRP expression increased,suggesting that TNF-α and HsCRP may be involved in the pathophysiological process of HIE,therefore,dynamic monitoring of both trends will help determine the severity of HIE and prognostic evaluation.

Hypoxia-ischemia,brain；Tumor necrosis factor-alpha;C-reactive protein;Infant,newborn

河南省衛生廳資助項目(200804053)

唐成和，男，教授，碩士生導師，研究方向：新生兒腦損傷，E-mail：xxshangyun@163.com

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.08.021

2016-04-18，

2016-06-30)