離子色譜法同時測定附子理中丸中9種無機陰離子含量

謝玉惠，龍興浩

(重慶市沙坪壩區陳家橋醫院藥劑科,重慶　401331)

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離子色譜法同時測定附子理中丸中9種無機陰離子含量

謝玉惠，龍興浩

(重慶市沙坪壩區陳家橋醫院藥劑科,重慶401331)

目的建立同時測定附子理中丸中9種無機陰離子(氟離子、甲酸根離子、氯離子、亞硝酸根離子、溴離子、硝酸根離子、硫酸根離子、草酸根離子和磷酸根離子)含量的離子色譜法。方法采用Ion Pac AS11-HC陰離子交換分析色譜柱，ASRS 300 (250 mm×4 mm)陰離子抑制型電導檢測器檢測，7～40 mmol·L-1氫氧化鉀溶液梯度淋洗20 min，平衡5 min，流速為1.0 mL·min-1，柱溫為35 ℃，進樣量為20 μL。結果9種無機陰離子達到良好分離，0.1～10 mg·L-1的線性關系良好，相關系數為0.999 0～0.999 8，精密度的RSD為0.5%～1.7%，重復性的RSD為0.8%～2.7%，穩定性的RSD為1.1%～2.9%，平均加樣回收率為89.18%～106.81%間，RSD為0.51%～2.73%(n=6)，檢測限為0.004～0.023 mg·L-1，定量限為0.015～0.018 mg·L-1。結論該方法快速簡單，選擇性好，靈敏度高，適用于附子理中丸中9種無機陰離子的含量測定。

附子理中湯;陰離子;硝酸鹽類;亞硝酸鹽類;氯化物;溴化物;氟化物;色譜法,離子交換

附子理中丸是中醫臨床治療脾陽虛證患者的常用復方[1]，主要由附子(制)、黨參、白術(炒)、干姜、甘草等組成的常用中成藥[2]。該藥具有溫中健脾等功效，用于治療脾胃虛寒、烷腹冷痛、嘔吐腹瀉、手足不溫等癥狀[3]。該方來源于宋代《太平惠民和劑局方》，并收載于《中國藥典》(2010年)[4-5]。目前，該藥質量控制的研究主要有高效液相色譜法或高效液相串聯質譜法測定烏頭類生物堿等有效成分[3,6]、氣相色譜串聯質譜測定附子理中丸中的化學成分[7]，薄層掃描法鑒定附子理中丸的單味藥材[8]、火焰原子吸收法或石墨爐原子吸收法測定無機元素的含量[9]和附子理中丸指紋圖譜[10]等。但是對于附子理中丸中陰陽離子含量的測定尚未報道。根據現代藥理研究表明，復方中藥功效的發揮是多種活性成分共同作用的結果，中成藥的有效成分不僅包括有機成分也包括無機成分[11]，而無機成分中包括無機元素和陰陽離子。為了全面控制附子理中丸的質量和療效，本文研究附子理中丸的陰離子含量。

離子色譜法是目前認為分析無機陰離子有效的色譜方法。該方法具有分析速度快、檢測靈敏度高和穩定性好等優點[12]，廣泛應用于環境、醫藥、食品等各個領域[13-14]，是測定多種無機陰離子重要分析方法，因此本文應用離子色譜法測定附子理中丸中的無機陰離子含量。

1　儀器與材料

1.1儀器ICS-2100型離子色譜儀，AS40自動進樣器，ASRS 300(4 mm)抑制器(美國Dionex公司)；Sartorius-BT25S電子天平(德國賽多利斯儀器有限公司)；KQ-300DE超聲儀(昆山市儀器有限公司)；TGL-16高速離心機(江蘇省金壇正基儀器有限公司)；Milli-Q純水系統(美國Millipore公司)。

2　方法與結果

2.2樣品溶液將附子理中丸磨成粉末混合均勻，準確稱取50 mg樣品于50 mL離心管中，加去離子水30 mL，超聲提取(500 W，40 kHz)10 min，每隔3 min振蕩一次，使固相樣品完全分散或溶解，取出樣品放置室溫后，再加20 mL去離子水稀釋并充分搖勻后離心(6 000 r·min-1)5 min，吸取上清液至另一個50 mL離心管中，加入20 mg 石墨碳烯吸附雜質，渦旋5 min后用離心(6 000 r·min-1)5 min，提取上清液后用0.22 μm微孔濾膜過濾即得樣品溶液。

2.3色譜條件ICS-2100型離子色譜儀，戴安ASRS 300 4 mm陰離子抑制器，戴安公司Ion Pac AS11-HC陰離子交換分析柱(250 mm×4 mm，5 μm)和Ion Pac AG11-HC保護柱(50 mm×4 mm)；柱溫：35 ℃；抑制電流為75 mA，自循環抑制模式；檢測器：電導檢測器；檢測池溫度為30 ℃；流動相：氫氧化鉀溶液梯度洗脫(0～20 min，7～40 mmol·L-1；梯度淋洗，平衡5 min)；流速：1.0 mL·min-1；進樣體積：20 μL；混合標準品和樣品離子色譜圖如圖1所示。

A.標準品溶液

B.樣品溶液

圖1離子色譜圖

2.4方法學考察

2.4.1線性關系及其相關系數將線性范圍為0.1～10 mg·L-1的標準工作液在“2.3”色譜條件下依次進樣分析，以各離子的質量濃度X(mg·L-1)為橫坐標，峰面積Y(US)為縱坐標繪制標準曲線。結果顯示各離子的線性關系良好，相關系數為0.999 0～0.999 8，滿足檢測需要，具體結果見表1。

表1　回歸方程及相關系數

2.4.3加標回收率與精密度選擇某一批次的附子理中丸用于加標回收率試驗，將若干附子理中丸研磨成均勻的粉末，分別準確稱取18份于50 mL離心管中，每份約為50 mg，分別加入0.1、0.5、2.5 mL的100 mg·L-1混合對照品溶液各6份，混合均勻后加去離子水30 mL，超聲(500 W，40 kHz)提取10 min，每隔3 min振蕩一次，使固相樣品完全分散或溶解。取出樣品放置室溫后，再加20 mL去離子水稀釋并充分搖勻后離心(6 000 r·min-1)5 min，吸取上清液至另一個50 mL離心管中，加入20 mg 石墨碳烯凈化，渦旋5 min后用離心(6 000 r·min-1)5 min，提取上清液后用0.22 μm微孔濾膜過濾即得樣品溶液，具體結果見表2。結果表明各離子的回收率89.18%～106.81%，精密度0.51%～2.73%，滿足檢測分析的需要。

2.5樣品含量測定購買6個批次的樣品，按照“2.2”項的樣品溶液制備方法處理，在“2.3”項的色譜條件分析測定，用標準曲線法定量。結果顯示，附子理中丸中各離子的質量分數在1.59～4.28 mg·g-1，具體結果見表3。

表2　加標回收率與精密度試驗

表3　附子理中丸分析結果/mg·g-1

注：“-”未檢測出。

3　討論

[1]唐漢慶,張文通,盧阿娜,等．附子理中丸對脾陽虛證大鼠骨骼肌能荷影響的實驗研究[J]．中國藥師,2010,13(12):1691-1694．

[2]張盼盼,魏文躍,李岑,等．附子理中丸中烏頭堿類毒性成分的富集及檢測[J]．華西藥學雜志，2012,27(5):563-566．

[3]索志榮,徐敏,秦海燕,等.LC-MS測定附子理中丸中 3種雙酯型生物堿含量[J]．藥物分析雜志,2010,30(12):2279-2281．

[4]徐新華,李能,鄭俠,等.附子理中丸對正常及脾虛型潰瘍性結腸炎模型大鼠長期毒性研究[J].中國藥理與臨床,2012,28(2):15-17．

[5]國家藥典委員會．中國藥典(一部)[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010:792．

[6]鐘碧華,陸帥.HPLC 法測定附子理中丸中烏頭堿的含量[J].海峽藥學，2014,26(11):115-117．

[7]劉慧,蘇娟,楊茜,等.采用GC-MS及RRLC-Q-TOFMS法分析中藥復方附子理中丸的化學成分[J].中國天然藥物,2011,9(4):267-273．

[8]彭飛城,丁野,鄭金鳳,等．附子理中丸(濃縮丸)質量標準的建立[J]．中國藥師，2013，16(2)：256-258．

[9]張奇鳳，彭姍姍,倪敏,等．原子吸收法測定江西十種中成藥[J]．光譜學與光譜分析,1999，19(2):203．

[10] 任培培,孫國祥,孫麗娜.附子理中丸多波長融合 HPLC指紋圖譜研究[J]．藥物分析雜志,2009,29(3):411-414．

[11] 周偉娥，楊立佼,謝巍,等.離子色譜法同時測定感冒清熱顆粒中9種無機陰離子[J]．中國藥房,2015,26(18)：2546-2549．

[12] Pappoe MK,Naeeni MH,Lucy CA.Bromate peak distortion in ion chromatography in samples containing high chloride concentrations[J].Journal of Chromatography A，2016,1444:57-63.

[13] 魏益華,張金艷,戴廷燦,等.離子色譜法測定地溝油和食用油中氯離子含量[J]．食品科學，2011,32(12):213-215．

[14] Liu J,He Q,Yang L,et al.Determination of trace and ultra-trace level bromate in water by large volume sample injection with enrichment column for on-line preconcentration coupled with ion chromatography[J].Chinese Journal of Chromatography,2015,33(10):1110-1114.

Determination of 9 inorganic anions in Fuzi Lizhong Pills by ion chromatography

XIE Yuhui,LONG Xinghao

(DepartmentofPharmacy,ChenjiaqiaoHospitalofShapingbaDistrict,Chongqing401331,China)

ObjectiveTo establish the method for simultaneous determination of nine inorganic anions (fluoride,formate,chloride,nitrite,bromide,nitrate,sulfate,radical,oxalate and phosphate) in Fuzi Lizhong Pills by ion chromatography．MethodsNine inorganic anions were determined by anion exchange column Ion Pac AS11-HC (250 mm×4 mm),and eluted by gradient hydroxide potassium in 7～40 mmol·L-1.The test took 20 min to determine targets and took 5 min to balance column.And the test was identified by suppressed conductivity detector ASRS 300 (4 mm) in the rate of 1.0 mL·min-1,and determined at the column temperature of 35 ℃ and the sampling volume of 20 μL.ResultsGood resolution can be achieved among the above mentioned nine inorganic anions．The nine inorganic anions showed a good linear relationship in the range of 0.1～10 mg·L-1,and their linear correlations over the investigated concentration were in the range of 0.999 0～0.999 8,while RSDs of precision were 0.5%～1.7%,RSDs of repeatability 0.8%～2.7%,and RSDs of stability 1.1%～2.9%.The average recoveries were 89.18%～106.81% with relative standard deviation between 0.51% and 2.73%,respectively.ConclusionsThe ion chromatography method is fast,simple,well selective,and well sensitive for the assay and quality control of nine inorganic anions in Fuzi Lizhong Pills.

Fuzi lizhong decoction;Anions;Nitrates;Nitrites;Chlorides;Bromides s;Fluorides;Chromatography,ion exchange

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.08.019

2016-05-20，

2016-07-05)