不同產地六神曲麥芽低聚糖酶活力實驗比較研究△

王云庭，杜杰，金鋒，周旭，任玉珍，陳彥琳

(中國中藥公司，北京 102600)

不同產地六神曲麥芽低聚糖酶活力實驗比較研究△

王云庭，杜杰，金鋒，周旭，任玉珍，陳彥琳*

(中國中藥公司，北京102600)

目的：比較分析不同產地六神曲質量。方法：采用麥芽低聚糖酶活力為質量評價指標，比較不同產地六神曲生品、炒制品麥芽低聚糖酶活力，同時進行聚類分析。結果：六神曲各產地麥芽低聚糖酶活力有較大差異，其中生品六神曲中活力最高為廣西(509.25±7.30)U·g-1、最低為四川2(37.99±0.59)U·g-1，相同產地生品與炒制品比較中河北1生品(406.97±2.20)U·g-1，炒制后活力明顯下降(P<0.01)，為(97.19±3.99)U·g-1。結論：不同產地六神曲麥芽低聚糖酶活力均有差異，同一產地六神曲生品麥芽低聚糖酶活力大于炒制品，麥芽低聚糖酶活力可作為六神曲質量評價的指標，根據聚類分析可對不同產地六神曲質量進行分級分類。

六神曲；麥芽低聚糖酶活力；不同產地；聚類分析；質量標準

六神曲為辣蓼、青蒿、杏仁、赤小豆、蒼耳加入面粉、麥麩混合后，經發酵而成的曲劑。六神曲飲片的炮制規格有六神曲、炒六神曲、麩炒六神曲、焦六神曲和炒炭六神曲5種，其中六神曲生用具有健脾開胃，并有發散作用，常用于感冒食滯；炒焦后消食化積力強，以治食積泄瀉為主；麩炒后具有甘香氣，以醒脾和胃為主，用于食積不化，脘腹脹滿，不思飲食，腸鳴泄瀉等[1]。現代研究認為六神曲主要成分含有酵母菌、揮發油、維生素B族、麥角固醇、苷類、淀粉酶和蛋白酶[2]，但產生藥效的物質基礎還未明確。目前評價六神曲質量除外觀性狀外，面對不同產地不同工藝的質量差異較大的六神曲，選取何種成分作為檢測指標來評價六神曲質量優劣還需進一步研究明確[3]。以往的六神曲研究主要測定的是α-淀粉酶，其主要作用是僅水解淀粉分子鏈中的α-1，4-葡萄糖苷鍵，將淀粉鏈切斷成為短鏈糊精、寡糖和少量麥芽糖和葡萄糖，使淀粉黏度迅速下降，達到“液化”目的[4]。要使淀粉全部降解為微生物可以應用的單糖，還需γ-淀粉酶、麥芽低聚糖酶等多種酶類才能完成[5]。麥芽低聚糖酶為淀粉酶的一種[6]，其酶解產生的麥芽低聚糖具有抑制腸道有害菌生長的作用，本文通過檢測不同產地六神曲麥芽低聚糖酶的活力，分析麥芽低聚糖酶活力是否可作為六神曲質量評價指標，為六神曲質量評價研究提供參考。

1 實驗材料

1.1試驗材料

原藥材：分別購買(市售為辣蓼、青蒿、杏仁等藥加入面粉或麩皮混和后，經發酵而成的曲劑)不同產地生產廠家的六神曲生品、炒制品共15份，樣品來源及相關信息見表1。

表1 六神曲樣品信息

試劑：葡萄糖、氫氧化鈉(批號：150528)、苯酚(批號：150327)、無水亞硫酸(批號：150410)、四水合酒石酸甲鈉(批號：150409)、3，5-二硝基水楊酸(批號：141201)購自國藥集團化學試劑有限公司。可溶性淀粉(天津光復精細化工研究所，批號：120807)。混合磷酸鹽(北京試劑，批號：20150210)。

1.2試驗儀器

紫外-可見分光光度計(尤尼柯上海儀器有限公司)；3-16L臺式高速離心機(SIGMA公司，德國)；電子分析天平(梅特勒-托利多XS205，美國)；數顯恒溫水浴鍋HH-4(國華電器有限公司)

2 麥芽低聚糖酶活力測定方法[7]

2.1粗酶液制備

六神曲粉碎，過篩，取40目粉末10g，置三角瓶中，加100mL蒸餾水，置40℃恒溫水浴中保溫浸提2h，4000r/min離心20min，取上清液，即為酶液，置于具塞錐形瓶中保存，用于麥芽低聚糖酶活性的測定。

2.2標準曲線的制備

取6支25mL具塞刻度試管，編號，各加入2mg·L-1葡萄糖溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，再用蒸餾水定容至2mL，搖勻后各試管再加入DNS試劑1.5mL，置沸水浴中煮沸5min。取出后流水冷卻至室溫。以0號為空白對照，在波長540nm處比色測定，以標準葡萄糖溶液質量濃度做橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，結果，在0.1-0.5mg/mL范圍內，吸光度(Y)與葡萄糖溶液質量濃度(X)的線性關系良好，回歸方程為Y=2.0075X-0.0187(R2=0.9994)。

2.3酶活力測定

按照文獻方法，取2%的可溶性淀粉水溶液5mL，先加入PH6.4的磷酸緩沖液1mL混勻，在40℃水浴中預熱5min，再加入麥芽低聚糖酶提取液0.5mL，搖勻，在此溫度下反應30min，后加入2%的氫氧化鈉溶液0.5mL終止反應。空白管加入2%的氫氧化鈉溶液0.5mL后，補加0.5mL酶液。吸取上述反應液、空白液各0.2mL分別置于比色管中，各加入1.8mL蒸餾水、1.5mLDNS試劑，沸水浴顯色5min，加蒸餾水稀釋至7mL搖勻。按照與制備標準曲線相同的方法在540nm下比色測定吸光度A。

麥芽低聚糖酶活性為在上述條件下，作用于可溶性淀粉每小時產生1mg麥芽三糖的酶量定義為一個酶活力單位(麥芽低聚糖以麥芽三糖為主)。

麥芽低聚糖酶活性(u/g)=110×OD×V×n/K×W×(1-X)]OD—吸光度，V—浸提酶液體積(mL)，n—酶液稀釋倍數，W—六神曲重量(g)，X—六神曲水分含量(%)，K—葡萄糖標準曲線斜率，110—常數。

3 不同產地六神曲質量特征比較結果

3.1不同產地六神曲生品、炒制品麥芽低聚糖酶活力的測定比較

將該15份樣品進行酶液提取并測定酶活力，結果見表2、3。

表2 各地六神曲生品麥芽低聚糖酶活力

表3 各地六神曲炒制品麥芽低聚糖酶活力

從表2可看出，各地六神曲生品酶活力大小由高至低，為廣西、河北1、四川3、北京2、河北2、北京1、四川1、河北3、陜西、四川2；從表3可看出，各地六神曲炒制品酶活力大小由高至低，為四川3、北京1、北京2、四川1、河北1。

3.2不同產地六神曲生品、炒制品麥芽低聚糖酶活力聚類分析

將各地六神曲淀粉酶活力數據導入SPSS軟件進行系統聚類分析，結果見圖1、2。

圖1 不同產地六神曲生品麥芽低聚糖酶活力聚類分析

圖2 不同產地六神曲炒制品麥芽低聚糖酶活力聚類分析

根據六神曲生品酶活力聚類分析后按酶活力由大到小可分為5類：一類為廣西；二類為四川3、河北1、北京2；三類為河北2；四類為四川1、河北3、陜西、北京1；五類為四川2。根據六神曲炒制品酶活力聚類分析后按酶活力由大到小可分為2類：一類為北京1、北京2、四川3；二類為四川1、河北1。

4 討論

六神曲生品和炒制品藥效作用不同，生用具有健脾開胃，炒焦后消食化積力強，本實驗中選取上述四川1、四川3、北京1、北京2、河北1產地的生品、炒制品進行組內比較，除北京1外，各個產地的生品麥芽低聚糖酶活力都較炒制品高，說明相同產地生品麥芽低聚糖酶活力顯著大于炒制品，可將麥芽低聚糖酶活力為指標，作為分析六神曲生品、炒制品工藝研究的評價方法，通過這一指標也可為研究不同產地六神曲的藥效作用提供依據，但其內在物質基礎及藥效的變化，有待進一步研究[8]。

目前六神曲處方來源為衛生部藥品標準(中藥成方制劑)第19冊、地方中藥材標準、炮制規范等，六神曲生產工藝標準較多，不同產地所用標準不同，生產過程中受不同產地氣候、環境等多種因素影響，導致其外觀性狀有較大差異，通過本實驗樣品可看出不同產地生產的六神曲性狀特征各有不同，形狀多為方形塊狀，少數顆粒狀或粉狀；生品顏色多為土黃色、黃白色，炒制品多為黃褐色或黃色；質地和斷面特征也都存在差異。所以以傳統氣味、外觀等感觀判斷六神曲質量有很強的主觀性，難以量化評價六神曲質量優劣[9]。醫學上采用淀粉酶等制劑在臨床上治療消化系統疾病，六神曲中酶含量高低可作為判斷質量好壞的指標，本文以麥芽低聚糖酶的活力為六神曲質量評價指標，對不同產地六神曲比較分析，麥芽低聚糖酶的活力檢測可作為六神曲質量評價的一種方法和指標。此外通過聚類分析對不同產地六神曲質量進行分類，該統計方法也可作為評價質量等級的一種依據。

[1] 雷載權.中藥學[M].上海：上海科學技術出版社，1995.172.

[2] 練晶軍.六神曲質量特征及發酵變化研究[D].北京：北京中醫藥大學，2011.

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[4] 中國食品添加劑和配料協會.食品添加劑手冊 第3版：中國輕工業出版社，2012：236.

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[6] 李勇.碳水化合物加工技術[M].北京：化學工業出版社，2004：31-35.

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[8] 劉玉杰.中藥炒焦物質基礎及其質量評價研究思考與實踐[J].中國中藥雜志，2014，39(2)：338-342.

[9] 付新.中藥六神曲的研究進展[J].決策與信息，2015，(9)：162.

AComparativeStudyofLiushenquMaltooligosaccharidesActivityTest

WANGYunting,DUJie，JINFeng，ZHOUXu，RENYuzhen，CHENYanlin*

(ChinaNationalTraditionalChineseMedicineCorp.，Beijing100195，China)

Objective：To compare and analyze the Liushenqu quality of different origin.Methods：Using malt oligosaccharide enzyme activity for the quality evaluation，different origin Liushenqu raw products，fried products maltooligosaccharides enzyme activity compared，and the data were applied by cluster analysis.Results：The maltooligosaccharides enzyme activities of Liushenqu origins were quite different，in which raw products in Guangxi vitality Liushenqu was the highest (509.25±7.30) U·g-1the lowest in Sichuan2(37.99±0.59) U·g-1.From the same origin，the enzyme activity of raw product of Hebei1(406.97±2.20) U·g-1was significantly higher than that of fried product (97.19±3.99U) ·g-1.Conclusion：Liushenqu maltooligosaccharide enzyme activity of different origins were different，the same origin raw products Liushenqu maltooligosaccharide enzyme activity greater than fried products.maltooligosaccharide enzyme activity could be used to evaluate the quality of Liushenqu.

shenqu;maltooligosaccharides enzyme activity;different origin;cluster analysis;quality standard

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.7.003

2016-03-29)

國家中醫藥管理局中醫藥行業科研專項中藥類項目“六神曲等7種中藥發酵技術及規范化應用研究”(項目編號201507004-03)

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陳彥琳，副主任中藥師，研究方向：中藥炮制工藝與中藥飲片質量控制，Tel：(010)61252955，E-mail：154439647@qq.com