一例豬圓環病毒2型和大腸桿菌混合感染的診斷

杜海燕，韓俊偉（.河南新鄉市動物疫病預防控制中心，河南 新鄉 453000；.河南新鄉市動物衛生監督所，河南 新鄉 453000）

一例豬圓環病毒2型和大腸桿菌混合感染的診斷

杜海燕1，韓俊偉2
（1.河南新鄉市動物疫病預防控制中心，河南 新鄉 453000；2.河南新鄉市動物衛生監督所，河南 新鄉 453000）

豬圓環病毒病是由豬圓環病毒2型（PCV2）為主要病原引起仔豬多系統衰竭綜合癥，以體質下降、呼吸困難、腹瀉、消瘦等為主要特征，可導致豬群產生嚴重免疫抑制，從而繼發多種病原繼發感染，是當前中國豬群感染最普遍的傳染病之一。對某養豬戶送檢仔豬進行實驗室診斷，結合臨床癥狀確診為豬圓環病毒2型繼發大腸桿菌混合感染。

豬圓環病毒2型；大腸桿菌；混合感染

1　發病情況

該養殖戶共飼養生豬300余頭，品種為大約克，2016年1月份，豬群相繼發病，先后死亡60頭斷奶仔豬，死亡率達到20%（60/300）。目前仍有12頭豬在發病，病豬體溫升高到40.5～40.7 ℃，精神萎頓，眼瞼水腫，喜睡，耳部、胸腹部、臀部及四肢等均有暗紅色或紫紅色出血斑；咳嗽、打噴嚏；部分仔豬腹瀉，呼吸困難，后驅無力，瀕死前臥地不起，表現發抖等癥狀。豬群曾接種豬瘟和口蹄疫疫苗。

2　解剖病變

剖檢發現皮下有出血，全身淋巴結腫大，切面呈大理石樣病變；腸系膜出血，胃腸脹氣；肝臟腫大質脆；脾臟有少量出血點，邊緣呈齒狀丘疹；腎臟腫大有針尖樣出血點。肺有出血點且局部肉變；心臟內膜少許出血。

3　實驗室診斷

3.1細菌學診斷

3.1.1細菌分離培養

剖檢時分別用接種環無菌條件下取兩頭死亡豬的肝、脾、腎及淋巴結接種于鮮血瓊脂培養基，置于37 ℃培養箱中培養24 h，觀察在血液瓊脂培養基上長出乳白色、圓形、邊緣整齊、凸起、半透明、β溶血菌落，經染色鏡檢為革蘭氏陰性桿菌；后接種于麥康凱培養基上，37 ℃培養箱中培養，觀察在麥康凱培養基上長出粉紅色菌落，經生化試驗初步鑒定為大腸桿菌。

3.1.2藥敏試驗結果

取上述血液瓊脂培養基上所長細菌的純培養物，選擇常用的抗菌素進行藥物敏感試驗，結果見表1：

藥敏試驗結果

由藥敏試驗結果可知，在與其他幾種抗菌藥物比較后，發現分離出的大腸桿菌對大多數藥物有耐藥性，頭孢噻呋鈉對該致病菌抑制效果較為敏感，舒坦西林和重瀉一針靈等藥物相對也敏感，可以選擇頭孢噻呋鈉、舒坦西林和重瀉一針進行相應治療。

3.2PCV2病原核酸檢測

3.2.1DNA提取 分別取病豬的淋巴結、脾臟組織研磨，反復凍融3次，8 000 rpm離心10 min，取上清液采用離心柱提取法提取病料DNA樣本。

3.2.2PCR擴增 針對PCV2的特異性基因，合成一對引物：P1：AAGGGCTGGGTTATG GTATG/P2：CGCTGGAGAAGGAAAAATGG，預期擴增特異性核苷酸片段大小為353 bp，PCR反應體系：DNA模板5 μg，PCR Buffer 5 μl，MgCl23 μl，Taq酶1 μl，上下游引物各1 μl；PCR反應程序：94 ℃預變性5 min，94 ℃ 30 s，58 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，30個循環后，72 ℃延伸7 min。擴增產物經1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，結果見圖1。

圖1　DL2000分子質量標準；-：陰性對照；

由圖1可知，從送檢樣本的淋巴結和脾臟提取DNA，經PCR擴增后，檢出豬圓環病毒2型病毒352 bp特異性核酸片段，說明送檢豬感染豬圓環病毒2型，并且推斷豬群存在豬圓環病毒2型的感染。

4　防治建議

根據該養殖場豬群發病情況、剖檢變化、實驗室細菌學及分子生物學診斷可以確定該豬場發病主要是由豬圓環病毒2型和大腸桿菌病混合感染。豬圓環病毒2型在豬群中普遍存在，因侵害免疫系統使機體的免疫抑制，進而導致其他病原的繼發感染，促使死亡率升高。為防止病情進一步蔓延，應隔離病豬，將病死豬深埋無害化處理。豬群發病常常是由多種病原共同作用造成發病率和死亡率升高，本次發病為豬圓環病毒感染使機體抵抗力下降，另外加上冬季寒潮不斷侵襲，保暖措施不當造成仔豬應激反應，大腸桿菌趁機侵入機體，使病情更為嚴重。

建議對豬群進行緊急免疫接種，定期進行免疫效果監測，確保免疫效果。對于豬群出現圓環病毒2型感染目前沒有治療效果確切的藥物，可行的方法是服用抗生素減少細菌繼發感染，藥敏實驗發現大腸桿菌對大多數藥物的耐藥性較強，僅對重瀉一針靈、頭孢噻呋鈉和舒坦西林中度敏感，可以聯合或輪換選用敏感性藥物進行治療，防止濫用藥造成耐藥菌株的產生。加強仔豬的飼養管理，搞好環境衛生，強化預防消毒，定期對免疫抗體監測，改善豬舍飼養條件，減少豬群應激，采用全進全出飼養制度，引進豬只后做好隔離觀察，對養殖場顯得尤為重要。

（編輯：晏兵兵）

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1006-799X（2016）12-0042-02

杜海燕（1983-），女，河南獲嘉人，助理獸醫師，主要從事動物疫病診斷與防治工作。