CD44v6在子宮內膜癌的表達及其臨床意義

張文淵　丁盛娣　黃筱纮

CD44v6在子宮內膜癌的表達及其臨床意義

張文淵丁盛娣黃筱纮

目的 探討CD44v6因子在子宮內膜癌中的陽性率及子宮內膜癌中CD44v6的表達與臨床各病理特征之間的相關性。方法 采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法（免疫組織化學S-P法）三步法操作染色檢測子宮內膜癌標本36例、不典型增生子宮內膜標本20例、正常增生期子宮內膜標本20例中CD44v6的表達，將子宮內膜癌組中CD44v6的陽性表達與患者的各臨床病理特征間進行統計學分析并分析其相關性。結果 CD44v6在子宮內膜癌組織中陽性率明顯高于對照組，CD44v6蛋白在子宮內膜癌中的陽性表達與手術病理分期、病理類型、組織學分級、子宮肌層侵襲深度之間無相關性（P＞0.05），但與有無淋巴結轉移間差異有統計學意義（P=0.042）。結論 CD44v6蛋白的高表達促進子宮內膜癌的發生發展，降低CD44v6表達可望成為子宮內膜癌治療新的靶位點。

子宮內膜癌 CD44v6 免疫組化

研究證實，腫瘤細胞外基質及基底膜降解是惡性腫瘤侵襲及轉移的關鍵環節。CD44v6因子參與細胞與細胞之間粘附以及細胞與胞外基質之間的特異性粘附過程，在惡性腫瘤的近距離侵襲、遠處轉移及種植等過程中有一定功能［1］。本研究采用免疫組化S-P法（鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法）三步法檢測子宮內膜癌組織、癌前期病變組織（不典型增生子宮內膜組織）、正常增生期子宮內膜組織中CD44v6蛋白的表達，探討其在子宮內膜癌發生發展過程中的臨床意義。

1　臨床資料

1.1標本來源及分組 選取2011年1月至2013年12月本院病理科存檔的子宮內膜癌組織標本36例，子宮內膜癌的臨床分期按 FIGO（2009）分期。以上病例臨床資料及病理資料均完整，術前未行放化療。另有20例非子宮內膜異位癥、非腫瘤患者子宮全切除或診斷性刮宮的不典型增生子宮內膜標本和20例正常增生期子宮內膜標本。

2　結果

2.1CD44v6蛋白在不同類型子宮內膜組織中的表達分析 CD44v6蛋白在子宮內膜癌組織中陽性率80.55%，子宮內膜不典型增生組織中陽性率55.00%，正常增生期子宮內膜組織中陽性率30.00%。CD44v6蛋白在子宮內膜癌組織及子宮內膜不典型增生組織中陽性率明顯高于正常組織。三組中兩兩比較結果顯示：子宮內膜癌組與子宮內膜不典型增生組比較，差異有統計學意義（χ2=4.114，P=0.043）；子宮內膜癌組與正常子宮內膜組比較，差異有顯著性（χ2=14.021，P＜0.01）。子宮內膜不典型增生組與正常子宮內膜組比較，差異無統計學意義（χ2=2.558，P=0.11）。見表1。

表1　組織中陽性表達率的比較（n）

2.2子內膜宮癌中CD44v6因子的陽性表達與各臨床病理特征之間的關系 見表2。

表2　子宮內膜癌中CD44v6的表達與各臨床病理特征之間的關系（n）

3　討論

人類CD44基因位于11號染色體短臂上，含有≥20個外顯子，根據外顯子的表達方式不同，將其命名為變異型CD44（CD44v）和標準型CD44（CD44s）［1］。目前對該因子研究相對較多較深入是CD44v6。CD44v6是一種與淋巴細胞活化和介導有關的粘附分子，直接參與淋巴細胞的激活過程，還是一種細胞表面跨膜糖蛋白，因此，在惡性腫瘤的近距離侵襲及遠距離轉移中有至關重要的作用［2］。

研究證實，腫瘤的轉移是由于惡性腫瘤細胞與細胞外基質之間的正常連接容易被破壞以及惡性腫瘤細胞之間同質粘附的降低，導致腫瘤細胞由原發部位向周圍組織、淋巴管、血管等部位釋放。其中一些腫瘤細胞上的粘附分子表達降低，使細胞與細胞之間的粘附減弱，腫瘤細胞從附著處脫離，通過多種細胞粘附的分子介導作用使腫瘤組織內皮細胞發生粘附及跨內皮細胞遷移，從而出現近距離浸潤甚至遠處轉移。另一些腫瘤細胞表達的粘附分子可促使腫瘤細胞與血管內皮上的膠原蛋白、纖連蛋白等結合，從而使腫瘤細胞與血管內皮細胞粘附，繼而形成血行轉移。CD44v6是含v6變異體的CD44拼接變異體，其配體為細胞外基質。CD44v6分子通過與腫瘤細胞外基質成分中的透明質酸、纖維蛋白、粘蛋白結合及膠原蛋白結合后可以改變腫瘤細胞外基質成分，導致細胞形態游走性改變，從而影響腫瘤細胞之間結合能力，減低腫瘤細胞與細胞外基質之間的結合粘附作用，間接增強了腫瘤細胞的運動能力，有助于腫瘤細胞獲得轉移潛能，從而促進腫瘤細胞的浸潤和轉移。另一方面，CD44v6可以和Ezrin蛋白相互作用。Ezrin蛋白是細胞骨架與細胞膜之間的連接蛋白，與細胞形態的維持、細胞運動、細胞粘附、生存及微絨毛的形成均有關。CD44v6與Ezrin蛋白的細胞漿（或膜）結合后，CD44v6通過與肌動蛋白細胞骨架連接，可以調整細胞形狀，促進細胞遷移，增加細胞的運動能力，進一步甚至可以影響微絲骨架的結構，從而誘導腫瘤細胞侵襲表型的發生，增加腫瘤細胞的近距離侵襲和遠距離轉移的能力［2］。CD44v6過度表達也可以激活Ezrin蛋白的功能，通過Ezrin蛋白的作用間接導致腫瘤細胞轉移能力增強［3］。有學者認為，CD44v6可以促進T細胞的活化及淋巴細胞歸巢功能，使表達CD44v6的腫瘤細胞與遠處的血管及淋巴結（或管）內相對應的配體結合，使遠處轉移腫瘤細胞更加穩定長久地寄生與生長［1］。

相關文獻表明，人類CD44v6的高表達與多種惡性腫瘤（如胃癌、胰腺癌、腸癌等胃腸道惡性腫瘤［4］、肺癌喉癌等呼吸系統惡性腫瘤［5］、乳腺癌［6］、卵巢癌［7］、子宮內膜癌［8］、宮頸癌［9］等）的發生、發展、侵襲和轉移密切相關。Basakran NS 等［10］均已研究證實了上述觀點，即CD44v6在多種惡性腫瘤的發生、發展，尤其是轉移過程中起促進作用。因此，CD44v6因此是目前比較公認的腫瘤轉移促進基因。本實驗研究了CD44v6在子宮內膜癌發生發展過程中的表達情況，結果顯示，CD44v6因子在正常子宮內膜組織中陽性率為30.00%，在不典型增生子宮內膜組織中陽性率為55.00%，在子宮內膜癌組織中陽性率為80.55%，隨著子宮內膜癌前病變細胞（子宮內膜不典型增生細胞）向子宮內膜癌細胞的轉化，CD44v6因子的陽性表達逐漸升高，由此提示：組織學尚正常的子宮內膜組織若CD44v6陽性存在癌變的可能，因而具有早期診斷價值，而且也是診斷預后的重要參考指標。因此，減少CD44v6的陽性表達，有可能成為在子宮內膜癌治療上新的靶位點。Samija等［11］將CD44v6基因轉入從小鼠身上提取的樹突狀細胞，進行腫瘤的預防及免疫治療，結果為可誘發抗腫瘤作用。

目前，關于CD44v6陽性率高低與子宮內膜癌的關系尚存在爭議，Sato S等［8］研究發現，CD44v6因子在子宮內膜癌組織中的陽性表達率顯著高于在正常子宮內膜組織中，但是CD44v6的陽性率與子宮內膜癌的其他臨床病理特征間無相關性。其他研究者如Soon Cheol Hong等［9］通過免疫組化對65例早期宮頸癌，76例子宮內膜組織，57例卵巢癌標本中CD44v6的陽性表達發現：CD44v6的陽性表達在宮頸癌中為92.3%，在不典型增生期子宮內膜中為6.7%，在增殖期子宮內膜中未檢測到，而在子宮內膜癌中為100%。而Ayhan等［12］則認為CD44v6表達與肌層浸潤深度、淋巴結轉移等不良預后因素呈負相關，無CD44v6表達或CD44v6陽性率較低患者反而有較高的復發率及較短的無瘤生存期，這一結論與前述觀點不同。但近年來的國內外研究大多支持以下觀點：CD44v6因子與子宮內膜癌的浸潤、轉移和預后相關，與子宮內膜癌組織學分級無相關性。甚至有學者認為可以通過檢測CD44v6作為一個更好的腫瘤轉移標志物，以預測腫瘤臨床預后及轉歸。

本研究結果顯示，CD44v6因子在子宮內膜癌組織中的陽性率明顯高于對照組，CD44v6因子的陽性表達與手術病理分期、侵襲子宮肌層深度、病理類型、組織學分級之間無相關性（P＞0.05）；CD44v6因子的陽性表達與子宮內膜癌有無淋巴結轉移間，差異有統計學意義（P＜0.05）。這一結論與大多數文獻報道的結果一致。但惡性腫瘤的侵襲和轉移受多種相關基因及相關因素的調控。至于CD44v6能否作為子宮內膜癌生物學特征及判斷預后的指標及治療的新靶位點，還有待于今后大樣本多中心的對照研究加以證實。

1 Yanamoto S，Yamada S， Takahashi H，et al.Expressi on of the cancer stem cell markers CD44v6 and ABCG2 in tongue cance：effect of neoadjuvant chemotherapy on local recurrence.Int J Oncol，2014，44（4）：1153～1162.

2 Boldrini E，Peres S V，Morini S，et al.Immunoexpression of Ezrin and CD44 in patients with osteosarcoma.J Pediatr Hematol Oncol，2010，32（6）：213～217.

3 Fehon R G，McClatchey A I，Bretscher A，et al.Organizing the cell cortex：the role of ERM proteins .Nat Rev Mol Cell Biol，2010，11（4）：276～287.

4 Wang H， Rana S， Giese N，et al.Tspan8， CD44v6 and alpha6beta4 are biomarkers of migrating pancreatic cancer-initiating cells.Int J Cancer，2013，133（2）：416～426.

5 Jiang H，ZhaoW，Shao W.Prognostic value of CD44v6 Expression in patients with non-small cell lung cancer： meta-Analysis. Tumour Biol，2014，35（8）：7383～7389.

6 Nandy SB， Gangwani L， Nahleh Z， et al. Recurrence and metastasis of breast cancer is influenced by ovarian hormone's effect on breast cancer stem cells . Future Oncol， 2015，11（6）：983～995.

7 Wang J， Xiao L， Luo CH， et al. CD44v6 promotes beta-catenin and TGF-beta expression， inducing aggression in ovarian cancer Cell. Mol Med Rep， 2015，11（5）：3505～3510.

8 Ayhan A，Tok EC，Bildiricil，et al.Over expression of CD44 Variant 6 in human endometrial cancer and its prognostic significance .Gynecol Oncol，2001，80（3）：355～358.

9 Soon Cheol Hong， Jae Yun Song， Jae Kwan Lee， et al. Significance of CD44v6 expression in gynecologic malignancies. Obstet Gynaecol，2006， 32（4）： 379～386.

10 Basakran NS. CD44 as a potential diagnostic tumor marker. Saudi Med J， 2015， 36（3）：273～279.

11 Samija I，Matesa N，Lukac J，et al.Galectin-3 and CD-44v6 as markers for preoperative diagnosis of thyroid cancer by RT-PCR .Diagn Mol Pathol，2011，20（4）：233～241.

12 Ayhan A，Tok EC，Bildiricil，et al.Over expression of CD44 Variant 6 in human endometrial cancer and its prognostic significance .Gynecol Oncol，2001，80（3）：355～358.

Purpose To investigate the expressions of CD44v6 in endometrial cancer tissues and the relationship with clinical pathological factors. Methods Expressions of CD44v6 were detected by immunohistochemical technology SP detection method in 36 patients with endometrial cancer，20 patients with Atypical endometrial hyperplasia and 20 normal endometrial tissue.The relationships between positive expression of CD44v6 in endometrial cancer tissues and clinical pathological factors were analyzed. Results Positive expression of CD44v6 in endometrial carcinoma was significantly higher than Control group， There is no correlation between expression of CD44v6 protin in endometrial carcinoma and clinical stage， myometrial invasion， histologic grade（P＞0.05），but with statistically significance （P＜0.05） between differences of lymph node metastasis. Conclusion The higher expression of CD44v6 play a role in the development of endometrial cancer and the prognosis analysis， the lower expression of CD44v6 is expected to become a new target site in treatment of endometrial cancer.

Endometrial cancer CD44v6 Immunohistochemistry

313000 浙江省湖州市中心醫院婦產科

1.2主要試劑 鼠抗人CD44v6單克隆抗體、免疫組化染色試劑盒（SP-9000即用型）、其他材料包括：中性樹膠、PBS緩沖液（pH=7.2～7.4）、檸檬酸鈉緩沖溶液（pH=6.0）、DAB顯色劑均購自福州邁新生物科技公司。

1.3方法 （1）標本采集與處理：所有實驗標本均經10%緩沖福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，連續切片4張，其中1張行HE染色，進行分類診斷，然后由3位資深病理醫師對以上實驗標本進行復查，病理診斷及臨床診斷均一致的標本作為研究樣本；1張用于免疫組化實驗，按照免疫組織化學S-P三步法操作染色；1張用于對照試驗；另1張備用。（2）實驗步驟：實驗步驟及結果判定嚴格按照試劑盒說明書進行。（3）實驗結果判斷：CD44v6在組織中的陽性表達主要定位于細胞膜，同時伴有不同程度的細胞漿染色，以細胞不染色為陰性細胞；以細胞被染成淡黃為弱陽性細胞；以細胞被染成黃色或棕黃色為陽性細胞。在光鏡下隨機觀察5個不同的視野，根據染色強度及染色范圍進行綜合評分，染色強度：棕褐色（計3分）、棕黃色（計2分）、淡黃色（計1分）、無色（計0分）。染色范圍：＞50 %（計3分）、20%～50 %（計2分）、5%～20 %（計1分）、＜5%（計0分）。累積計分0～1分為陰性（-）、2～3分為弱陽性（+）、4～5分為陽性（++）、6分為強陽性（+++）。

1.4統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。計數資料采用χ2檢驗或Fisher精確概率法。以P＜0.05為差異有統計學意義。