腎茶對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠的抗炎作用研究

陳珠　楊彩霞　倪婉曄　毛曉健　趙榮華

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腎茶對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠的抗炎作用研究

陳珠楊彩霞倪婉曄毛曉健趙榮華

目的觀察腎茶水煎劑對大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的抗炎作用。 方法采用微晶型尿酸鈉分別誘導(dǎo)大鼠急性踝關(guān)節(jié)腫脹和急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型，以苯溴馬隆為陽性對照，觀察腎茶水煎劑對大鼠腫脹度的影響，并測定大鼠血清尿酸值(serum uric acid, SUA)及黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase, XOD)活性，ELISA試劑盒檢測血清白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1，IL-1β)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平。 結(jié)果模型組關(guān)節(jié)腫脹度、IL-1β及IL-8水平明顯高于正常對照組(P<0.05)，腎茶水煎劑高、中、低劑量能不同程度抑制大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度，降低血清IL-1β、IL-8水平(P<0.05)；TNF-α水平與模型組比較無顯著性差異。同時腎茶水煎劑可顯著降低大鼠血清SUA水平及XOD活性(P<0.05或P<0.01)。 結(jié)論腎茶水煎劑對大鼠急性踝關(guān)節(jié)腫脹和急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎有很好的控制作用，可能與其抑制尿酸生成、利尿以促進(jìn)尿酸排泄、抑制炎癥細(xì)胞因子IL-1β、IL-8表達(dá)有關(guān)。

腎茶；急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎；抗炎

腎茶為唇形科植物腎茶Clerodendranthusspicatus(thunb.) C. Y. Wu ex H. W. Li的全草，具有清熱、利尿、排石作用，主要用于急慢性腎炎、膀胱炎、尿路結(jié)石和膽結(jié)石等[1],產(chǎn)于廣東、海南、廣西、云南、臺灣等地。腎茶全草含黃酮類、三萜類、甾醇類、揮發(fā)油、多酚酸類及其它成分(有機(jī)酸、多糖、肌醇等)[2]；其中黃酮在抗炎、降尿酸和保護(hù)腎臟方面均起主要作用；在尿酸鈉所致炎癥模型中，有機(jī)酸起主要抗炎作用；大量研究表明[3],腎茶水提物所得的肌醇有使尿液堿化及增加尿酸排泄量而達(dá)到排石的作用；同時腎茶50%乙醇提取物也顯示出相對較高的降尿酸的效果，可能與其含有豐富的多酚有關(guān)。

痛風(fēng)是一種由于嘌呤代謝紊亂產(chǎn)生過多尿酸或(及)尿酸排泄減少，并在體內(nèi)蓄積沉淀所致的一組代謝性疾病，臨床主要表現(xiàn)為一系列綜合征，例如：高尿酸血癥、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)石、痛風(fēng)腎病、尿酸性結(jié)石，均屬尿酸鹽所致的不同臨床表現(xiàn)。中醫(yī)將其歸屬于“痹證” “尿濁” “厲節(jié)”等范疇，多與現(xiàn)代人飲食無度、酗酒和高嘌呤飲食、家族遺傳史及肥胖、創(chuàng)傷和手術(shù)及一些藥物的誘發(fā)有關(guān)。目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對痛風(fēng)的治療，雖然能有效控制痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎及降尿酸，但毒副作用較大，易復(fù)發(fā)。因而，尋找療效獨(dú)特、綠色安全的中藥是治療痛風(fēng)的必然趨勢。本文基于對腎茶的藥效研究，按照Mc Carty DJ[4]經(jīng)典造模方法采用微晶型尿酸鈉(monosodium urate,MSU)誘導(dǎo)大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型，初步探索其對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥效學(xué)作用，以期為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料和方法

1.1藥物和試劑

腎茶植株購自云南西雙版納州，經(jīng)云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院俞捷副教授鑒定為唇形科植物腎茶Clerodendranthusspicatus(thunb.) C.Y.Wu ex H.W.Li。陽性對照藥為苯溴馬隆(江蘇省昆山龍燈瑞迪制藥有限公司，生產(chǎn)批號：1403305，規(guī)格：50 mg/片)，實(shí)驗(yàn)時取藥片研碎，用蒸餾水配成實(shí)驗(yàn)所需濃度；尿酸鈉(Sigma公司，生產(chǎn)批號：U2875-5g)；大鼠白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)試劑盒均購自聯(lián)科生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號：70-E-EK301B2、70-E-EK3822；白細(xì)胞介素-8(IL-8)、黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase, XOD)測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，生產(chǎn)批號：H008、A002；尿酸(serum uric acid, SUA)測定試劑盒購自中生北控生物科技股份有限公司，生產(chǎn)批號：000020110。

1.2實(shí)驗(yàn)動物

雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量(180±20)g，由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號：SCXK(滇)2011-0004；實(shí)驗(yàn)大鼠飼料由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號：SCXK(滇)2011-0005。實(shí)驗(yàn)動物購買后在實(shí)驗(yàn)室條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.3腎茶水煎劑的制備

腎茶全草適量，加8倍量蒸餾水浸泡30 分鐘，然后煎煮30分鐘(以煮沸時算起)，過濾，殘渣再加水煮30分鐘左右。最后收集合并濾液，加熱蒸發(fā)濃縮至濃度為6.0 g/kg，臨用時稀釋成3.0 g/kg、1.5 g/kg，分別作為高、中、低劑量組使用濃度，放入4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4分組與給藥

60只大鼠隨機(jī)分6組，分別為正常對照組、模型組、陽性藥組(苯溴馬隆組)、腎茶組(高、中、低劑量)，每組10只；陽性對照組給予苯溴馬隆4.2 mg/kg，腎茶組高劑量6.0 g/kg、中劑量3.0 g/kg、低劑量1.5 g/kg，正常組及模型組給予等體積蒸餾水；其中腎茶高、中、低劑量組于造模前10天開始連續(xù)灌胃給藥，灌胃體積為10 mL/kg，陽性對照組苯溴馬隆于造模前2天灌胃給藥，每天灌胃給藥1次。

表1　腎茶水煎劑對MSU致大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎足踝關(guān)節(jié)周徑的影響±s, n=10)

注： 與正常對照組比較，aP<0.01；與模型組比較，bP<0.05，cP<0.01。

1.5造模方法

造模當(dāng)天，將模型組、苯溴馬隆組、腎茶高、中、低劑量組按照Mc Carty DJ[4]經(jīng)典方法開始造模。以酒精局部消毒，用1 mL滅菌注射針于受試大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)背側(cè)從45°方向插入脛骨肌腱內(nèi)側(cè)，將0.2 mL尿酸鈉溶液注入到踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)進(jìn)行造模；正常對照組給予0.2 mL無菌生理鹽水，以關(guān)節(jié)囊對側(cè)鼓起為注入標(biāo)準(zhǔn)。

1.6檢測指標(biāo)

1.6.1踝關(guān)節(jié)腫脹度的測定 每組大鼠分別于造模后2、4、8、12、24、48、72小時，采用傅線法測量右側(cè)踝關(guān)節(jié)同一部位周徑，每只測3次，取平均值。

1.6.2血樣分析 于造模后72小時，大鼠眼內(nèi)眥靜脈取血，4000 rpm，離心10 分鐘，分離血清，按ELISA法檢測試劑盒操作說明書，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定血清中IL-1β、IL-8、TNF-α含量。

1.7統(tǒng)計學(xué)處理

2　結(jié)果

2.1腎茶水煎劑對大鼠踝關(guān)節(jié)周徑的影響

與正常對照組相比，模型組大鼠注射MSU 2小時后關(guān)節(jié)及足趾開始出現(xiàn)紅腫和功能障礙，發(fā)生率100%。踝關(guān)節(jié)腫脹程度在4小時表現(xiàn)明顯，8～12小時達(dá)高峰期，在48小時后開始逐步消退。與模型組比較，苯溴馬隆組、腎茶高、中、低劑量組在各個時間段均能不同程度降低大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹程度，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見表1。

2.2腎茶水煎劑對大鼠血清尿酸、黃嘌呤氧化酶的影響

經(jīng)尿酸鈉溶液注射后，模型組較正常對照組血尿酸濃度顯著升高(P<0.01)，提示急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎造模成功。同時，模型組較正常對照組大鼠黃嘌呤氧化酶活性顯著增加(P<0.01)。與模型組比較，腎茶高、中劑量組和苯溴馬隆組均能顯著降低血尿酸水平(P<0.05或P<0.01)，腎茶高劑量和苯溴馬隆組能顯著降低黃嘌呤氧化酶活性(P<0.05)。見表2。

表2　腎茶水煎液對MSU致大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型血尿酸、黃嘌呤氧化酶的影響±s, n=10)

注： 與正常對照組比較，aP<0.01；與模型組比較，bP<0.05，cP<0.01。

2.3腎茶水煎劑對大鼠血清IL-1β、IL-8、TNF-α含量的影響

與正常對照組相比，模型組大鼠造模后血清中IL-1β、IL-8和TNF-α含量均有明顯升高(P<0.01)；與模型組相比，腎茶高、中、低劑量組和苯溴馬隆組能不同程度地降低血清中IL-1β含量(P<0.05或P<0.01)；腎茶高劑量組能顯著降低大鼠血清中IL-8含量(P<0.05)；各給藥組大鼠血清中TNF-α的含量變化無統(tǒng)計學(xué)差異。見表3。

表3　腎茶水煎液對MSU致大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型IL-1、IL-8、TNF-α含量的影響

表3　腎茶水煎液對MSU致大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型IL-1、IL-8、TNF-α含量的影響

組別劑量(g/kg)IL-1β(pg/mL)IL-8(pg/mL)TNF-α(pg/mL)正常對照組—338.25±11.5819.46±2.89187.80±28.12模型組—387.73±6.13b27.16±0.38b363.20±66.21b苯溴馬隆0.0042346.29±11.79d17.69±3.79d258.15±58.03腎茶高劑量6.0367.15±5.97c18.30±6.80c302.12±40.47a腎茶中劑量3.0368.41±0.62c24.62±2.95380.39±74.73b腎茶低劑量1.5361.79±14.57c26.72±1.16385.10±29.39b

注： 與正常對照組比較，aP<0.05，bP<0.01；與模型組比較，cP<0.05，dP<0.01。

3　討論

痛風(fēng)最典型的臨床癥狀是突發(fā)性足趾關(guān)節(jié)的紅、腫、劇烈疼痛等一系列急性關(guān)節(jié)炎表現(xiàn)。痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的核心是中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥，增強(qiáng)的中性粒細(xì)胞—內(nèi)皮細(xì)胞黏連是急性痛風(fēng)產(chǎn)生的本質(zhì)，炎性細(xì)胞因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-8(IL-8)、腫瘤壞死因子(TNF-α)等在急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的免疫和病理過程中起了重要作用[5]。黃嘌呤氧化酶活性的升高有利于嘌呤類向尿酸生成轉(zhuǎn)化。金沈銳等[6]研究表明，雌雄小鼠或同性小鼠之間，血尿酸正常值差異較大，尤以雌鼠個體之間血尿酸值波動較明顯，故本實(shí)驗(yàn)僅選用雄鼠，且造模所用藥物為尿酸鈉晶體，可致大量炎性細(xì)胞浸潤，以尿酸濁毒流行于脈絡(luò)為主，通過排石即可排除尿酸鹽結(jié)晶，以達(dá)到祛邪外出而正安的目的，臨床上可根據(jù)不同沉積部位、 病程， 選擇不同排石療法[7]。 現(xiàn)代研究證實(shí)了腎茶在抗炎、利尿、抑菌、健腎、抗高血糖、降壓、抗腫瘤、提高機(jī)體免疫力等多方面均有廣闊的發(fā)展前景。其中關(guān)于腎茶抗炎、排石利尿的報道較為集中，也是本文研究腎茶治療痛風(fēng)的重要原因。

腎茶作為一種保健茶，主要以單方泡飲為主。本實(shí)驗(yàn)主要探討腎茶水煎劑對大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型的影響，因尿酸鹽晶體可直接刺激滑膜及其周圍軟骨組織中單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β、TNF-α繼而誘導(dǎo)趨化因子IL-8的產(chǎn)生，抗TNF-α能明顯抑制內(nèi)皮細(xì)胞的激活和中性粒細(xì)胞的募集，從而抑制炎癥反應(yīng)，降低急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)組織局部IL-1β和TNF-α水平，可能終止炎性細(xì)胞因子的惡性循環(huán)，是急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎有效治療的作用靶點(diǎn)[8]。黃嘌呤氧化酶活性的降低可有效抑制嘌呤類轉(zhuǎn)化成尿酸，進(jìn)而減少尿酸的生成途徑。陽性藥選用苯溴馬隆，主要通過抑制腎小管對尿酸的重吸收而增加尿酸的排泄從而發(fā)揮降尿酸的作用。在踝關(guān)節(jié)腔及足趾皮下注射尿酸鈉晶體造模后，大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹程度明顯增加，腎茶水煎劑高、中、低劑量組能不同程度抑制急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度；腎茶高、中劑量能顯著降低急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清尿酸值，可能與其利尿促進(jìn)尿酸的排泄有關(guān)。同時，腎茶高劑量能明顯降低黃嘌呤氧化酶的含量，效果與陽性藥苯溴馬隆比較無統(tǒng)計學(xué)差異。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腎茶的抗急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎作用可能與其降低血清IL-1β、IL-8、TNF-α含量，抑制尿酸生成及增加尿酸排泄有關(guān)。

[1]南京中醫(yī)藥大學(xué). 中藥大辭典[M]. 上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社, 2006: 3081-3082.

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[4]陳奇. 中藥藥效研究思路于方法[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社, 2005: 651-660.

[5]李迎春, 徐建華. 急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制及研究進(jìn)展[J]. 安徽醫(yī)學(xué), 2013, 34(1): 96-98.

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(本文編輯： 韓虹娟)

Anti-inflammation effect ofClerodendranthusspicatuson rats with acute gouty arthritis

CHENZhu,YANGCai-xia,NIWan-ye,etal.

YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine，Kunming650500，China

Correspondingauthor：MAOXiao-jian，E-mail：1224346204@qq.com

ObjectiveTo observe the anti-inflammation effect ofClerodendranthusspicatuson rats with acute gouty arthritis(AGA). MethodsExcept the normal group, the others were given ankle injection with sodium urate crystal solution to induce the acute gouty arthritis model. The positive group were used the Benzbromarone, the influence of the aqueous extract ofClerodendranthusspicatuson rats ankle swelling, the level of serum uric acid and the activities of xanthine oxidase in the serum was observed. ELISA was used to detect serum IL-1β, IL-8 and TNF-α. ResultsCompared with normal group, the level of IL-1β and IL-8 was higher of AGA model group(P<0.05,P<0.01). High, middle and low dose of the aqueous extract of Clerodendranthus spicatus could significantly inhibit ankle swelling and reduce serum IL-1β and IL-8 leve1 at different degrees, reduce the level of serum uric acid (SUA) and the activities of xanthine oxidase (XOD) in the serum. Compared with the model group, the difference was significant (P<0.05). ConclusionThe aqueous extract ofClerodendranthusspicatushas obvious curative effect on acute gouty arthritis in rats. The therapeutic effect of AGA is related to decreasing in the levels of IL-1β、IL-8 in the serum．It can effectively inhibit the activities of xanthine oxidase, and decrease the formation of uric acid and promote the excretion of uric acid.

Clerodendranthusspicatus；Acute gouty arthritis；Anti-inflammation

云南省高校南藥協(xié)同創(chuàng)新項目(30270101400)

650500昆明，云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院

陳珠(1989- )，女，2014級在讀碩士研究生。研究方向：臨床中藥學(xué)。E-mail：1225493904@qq.com

毛曉健(1967- )，女，碩士，教授，碩士生導(dǎo)師。研究方向：臨床中藥學(xué)、中藥藥理。E-mail：1224346204@qq.com

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2016.09.005

2016-04-11)