趕黃草對雄性大鼠正常性功能的影響*

劉明華，黃群蓮，劉中飛，稅丕先

（1西南醫科大學藥學院生藥教研室；四川瀘州646000，2西南醫科大學附屬醫院藥劑科）

趕黃草對雄性大鼠正常性功能的影響*

劉明華1，黃群蓮2，劉中飛1，稅丕先1

（1西南醫科大學藥學院生藥教研室；四川瀘州646000，2西南醫科大學附屬醫院藥劑科）

目的：研究趕黃草（Penthorum Chinense Pursh）對雄性大鼠正常性功能的影響。方法：將大鼠隨機分為空白對照組、陽性對照萬艾可（枸櫞酸西地那非片，15 mg/kg）組和趕黃草三個劑量組（0.5g生藥/kg、1.0 g生藥/kg、2.0 g生藥/kg），連續灌胃28 d，測定趕黃草對大鼠交配能力、性器官重量、陰莖勃起功能、正常雄性大鼠精子的影響。結果：趕黃草各劑量組對大鼠交配能力、性器官指數、陰莖勃起功能、精子存活率等無明顯影響，與空白對照組比較，差異無顯著性（P＞0．05）。結論：趕黃草對雄性大鼠正常性功能無明顯影響，作為新食品原料應用是安全的。

趕黃草；性功能；交配能力

趕黃草（Penthorum Chinense Pursh）學名扯根菜，又名水楊柳、水澤蘭，為虎耳草科（saxifraganceae）扯根菜屬扯根菜的地上部分，是四川瀘州古藺出產的一種苗家藥材。始載于明代《救荒本草》，現載于《中藥大辭典》、《全國中草藥匯編》、《四川中藥志》、《湖南藥物志》、《內蒙古植物藥志》等。民間以全草入藥，性溫，味甘，無毒，具有清熱解毒、活血散瘀、利水消腫、退黃、平肝的功效，可治經閉、水腫、血崩、帶下、跌打損傷[3-4]。現代研究表明[3，4]趕黃草內含多種有效成份均對肝損傷具保護作用，并對甲肝、乙肝、慢性活動性肝炎具有一定的治療作用，但民間流傳趕黃草有減弱男性性功能的副作用。本研究探討趕黃草對雄性大鼠正常性功能的影響，為趕黃草在新食品原料的開發應用，以及民間流傳的科學與否提供實驗依據。

1 實驗材料

1.1 受試品

趕黃草，采自四川瀘州古藺縣，經西南醫科大學生藥教研室稅丕先教授鑒定。按《中國藥典》2010版有關最細粉的規范要求將趕黃草粉碎為125 μm＜粒徑＜150 μm的中藥最細粉。實驗時稱取1 kg趕黃草粉，加蒸餾水10 L，加熱至80～90℃，浸泡提取30～60 min，過濾，收集浸泡提取液，殘渣加蒸餾水10L，加熱至80～90℃浸泡提取30～60 min，過濾，合并浸泡提取液，將浸泡提取液在60～70℃減壓濃縮至0.5 L即可。水提濃縮液的濃度為2.0 g（趕黃草粉）/mL。

1.2 樣品的配制

趕黃草在臨床上用法用量為口服，一次2 g，每日三次，若按成人60 kg計算，其臨床日用量為0.1 g生藥/kg。本實驗受試品趕黃草低、中、高劑量分別設置為臨床日用量的5、10、20倍，即0.5g生藥/kg、1.0 g生藥/kg、2.0 g生藥/kg。大鼠灌胃體積設為0.5 mL/ 100g體重，則配制方法如下：

低劑量組：取水提濃縮液[2.0 g（趕黃草粉）/ mL]100 mL，加入1 900 mL雙蒸水，濃度為0.1g（趕黃草粉）/mL，按0.5 mL/100g體重灌胃，則灌胃劑量為0.5 g生藥/kg，為臨床日用量的5倍；

中劑量組：取水提濃縮液[2.0 g（趕黃草粉）/ mL]100 mL，加入900 mL雙蒸水，濃度為0.2 g（趕黃草粉）/mL，按0.5 mL/100g體重灌胃，則灌胃劑量為1.0 g生藥/kg，為臨床日用量的10倍；

高劑量組：取水提濃縮液[2.0 g（趕黃草粉）/ mL]100 mL，加入400 mL雙蒸水，濃度為0.4 g（趕黃草粉）/mL，按0.5 mL/100g體重灌胃，則灌胃劑量為2.0 g生藥/kg，為臨床日用量的20倍；

萬艾可（枸櫞酸西地那非片）為陽性對照，100 mg/片，美國輝瑞制藥有限公司生產，批號20140708。臨用時將其壓成粉末并用生理鹽水配成濃度為1.5 mg/mL的溶液。按1 mL/100g體重灌胃，則灌胃劑量為15 mg/kg。

1.3 實驗動物

SD大鼠，體重（180±20）g，雌雄各半，購自西南醫科大學實驗動物中心，生產許可證號：SCXK（川）2013-17，使用許可證號：SCXK（川）2013-065。

1.4 實驗環境

實驗在西南醫科大學SPF級實驗中心進行，動物為籠養（籠具容積為20 cm×39 cm×54 cm），每籠飼養同性別動物5只。基礎飼料為實驗鼠全價顆粒飼料，各組動物常規喂飼，自由飲水。籠底墊料為刨花木屑，使用前經消毒烘干；籠具經消毒后使用。平均每隔2日更換一次墊料。溫度：空調恒溫，約22～25℃。

2 實驗方法

2.1 對正常雄性大鼠交配能力的影響

SD大鼠30只，雄性，體重（180±20）g，按體質量序隨機分為4組：空白對照組（生理鹽水）、陽性對照組（萬艾可15 mg/kg）及趕黃草低、中、高3個劑量組（0.5 g生藥/kg、1.0 g生藥/kg、2.0 g生藥/kg）。每日灌胃1次，連續給藥28 d。

2.1.1 雌性大鼠的準備

取30只雌性大鼠，體質量（180±20）g，腹腔注射3%戊巴比妥鈉溶液，0.14 mL／100 g麻醉，行雙側卵巢摘除術，術后連續3 d肌肉注射青霉素2萬U／kg，術后2周分組實驗。實驗前48 h皮下注射苯甲酸雌二醇20只，交配前4 h皮下注射黃體酮500 ug/只。

2.1.2 交配實驗觀察方法

將雄性大鼠單獨放人籠中使其適應環境5 min，然后放人1只雌鼠，開始記錄下列數據：①自雌鼠投入至雄鼠第1次捕捉雌鼠的時間（捕捉潛伏期）；②20 min內雄鼠捕捉雌鼠或爬背的動作次數（捕捉次數）；③雄鼠自爬背成功后出現舔陰莖的時間（射精潛伏期）；④20 min內雄鼠捕捉雌鼠或爬背成功后出現舔陰莖的次數（射精次數）。

2.1.3 對性器官重量的影響

實驗結束后，用T-100型電子天平（感量0.1 g）稱取小鼠體重（g），處死動物，剖腹取睪丸和附睪，去盡筋膜，濾紙吸干臟器表面血污，用賽多利斯BS200S-WE1型電子天平（感量0.001 g）稱睪丸和附睪重量（mg），計睪丸（附睪）指數。

脾（胸腺）指數=脾（胸腺）重量（mg）／體重（g）

2.2 對大鼠陰莖勃起功能的影響

灌胃第28 d，末次灌胃后1 h，將4 mA電流強度刺激大鼠陰莖頭部。記錄刺激開始至陰莖勃起時間（勃起潛伏期）和陰莖勃起持續時間。

2.3 對正常雄性大鼠精子的影響

灌胃第28 d，取大鼠左側附睪，在附睪尾縱向劃一個小口，置于3 mL RPMI-1640培養基（含10%左右的動物血清）內孵育15 min，制備精子懸液。取少量精子懸液用培養基稀釋50倍，加到血球計數板上，在27℃～30℃條件下用高倍鏡隨機觀察200個精子的活動狀態（活動的精子：活動良好、呈直線或曲線游動；不活動的精子：活動遲緩，原地打轉或不活動），并統計精子存活率（活動的精子數×100%／200）。

2.4 統計方法

采用SPSS19.0統計軟件，計量資料均采用（x± s）表示，多個樣本均數比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法，P＜0.05為有統計學意義。

3 實驗結果

3.1 一般情況

試驗周期內，空白對照組動物行為活動如常，一般情況良好。實驗組動物灌胃趕黃草后，一般情況良好，除個別時間點某個動物體重、食量有所減少之外，在灌胃后大鼠活動無明顯異常改變。與空白對照組比較，趕黃草低、中、高劑量組和陽性對照組雄性大鼠灌胃給藥前后體重差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 大鼠體重的變化（x±s）

3.2 對正常雄性大鼠交配能力的影響

陽性對照組雄性大鼠捕捉潛伏期明顯縮短，射精潛伏期明顯延長，捕捉次數和射精次數明顯增加，與空白對照比較，P＜0.05，提示萬艾可能提高雄性大鼠的交配能力。實驗組動物灌胃趕黃草后，交配能力正常，與空白對照組比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 對大鼠交配能力的影響（x±s）

3.3 對雄性大鼠性器官的影響

陽性對照組和趕黃草低、中、高劑量組睪丸指數和附睪指數正常，與空白對照組比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），見表3。

表3 對性器官重量的影響（x±s）

3.4 對大鼠陰莖勃起功能的影響

將4 mA電流強度刺激大鼠陰莖頭部，陽性對照組陰莖勃起潛伏期縮短，勃起時間延長，與空白對照比較，P＜0.05，提示萬艾可能增強大鼠的勃起功能。實驗組動物灌胃趕黃草后，陰莖勃起功能正常，與空白對照組比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表4。

3.5 對正常雄性大鼠精子的影響

陽性對照組和趕黃草低、中、高劑量組大鼠精子存活率正常，與空白對照組比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表5。

表5 各組大鼠的精子存活率（x±s）

4 討論

性功能指動物性活動的能力，是衡量雄性動物生殖機能強弱的主要指標[5-6]。雄性性活動包括求偶反射、陰莖勃起、爬跨、插入、射精等幾個環節，其中陰莖勃起是產生正常性活動的基礎。陰莖勃起過程表現為在性刺激引導下，海綿體內小動脈和海綿竇壁內的平滑肌松弛，流人海綿體的血流增加，海綿體內壓升高，壓迫白膜下靜脈叢和穿支靜脈后使海綿體流出靜脈血減少，勃起發生。在此過程中，普遍認為非膽堿能、非腎上腺素能神經末梢的激活和釋放NO增加促進小動脈和海綿體平滑肌舒張是導致陰莖勃起的主要機制[7]。

雄性性活動受多種因素的影響，如神經機制、體液因素、情緒、年齡、疾病等，機理又十分復雜。因此，要評判性能力，僅僅依靠某一個指標很難作出準確判斷[8-9]。雄性大鼠性行為的發生依賴于雌性大鼠的性誘感，也即雌性大鼠的發情狀態直接影響雄鼠的性行為，因而我們選擇了交配能力這一主要指標來觀察大鼠性能力的影響。但由于雌鼠對雌、孕激素的敏感性，雄鼠對新環境的適應性、對新的性伴侶的容納性，是否也存在類似心理因素等問題，使得這一指標也難以準確地反映其性能力。因而我們同時選擇了捕捉次數、射精次數、勃起潛伏期和射精潛伏期等觀察指標[10]。勃起潛伏期和射精潛伏期可以反映雄鼠對陰莖刺激的性反應速度和性活動能力狀況，也即性興奮的程度和性興奮持續的時間。將這三組指標結合起來觀察，基本上可以較為準確地判斷雄鼠的性能力狀況。

本實驗發現陽性對照萬艾可明顯縮短雄性大鼠捕捉潛伏期，延長射精潛伏期，增加捕捉次數和射精次數，與空白對照比較，P＜0.05，提示萬艾可能提高雄性大鼠的交配能力，說明本研究方法可靠。但趕黃草連續灌胃28 d，三個劑量組分別相當于臨床應用量（0.1 g生藥/kg）的5倍、10倍和20倍，動物行為活動如常，一般情況良好。實驗各組動物交配能力、性器官指數、陰莖勃起功能、精子存活率等無明顯促進或抑制作用，與空白對照組比較未見明顯差異（P＞0.05）。因此，趕黃草對雄性大鼠正常性功能無明顯影響，作為新食品原料，應用是安全的。

1.郭艷，曾凡駿，劉敏，等．趕黃草有效成分及生物活性研究進展[J].職業衛生與病傷，2016，31（1）：41-43.

2.付明，魏麟、余娟，等．扯根菜的化學成分研究[J]．中國藥學雜志，2013，48（22）:1911-1914.

3.石曉，卓菊．趕黃草總黃酮抗大鼠酒精性肝纖維化作用的實驗研究[J]．中藥材，2015，38（7）：1485-1487.

4.Ikura Y,Caldwell SH.Lipid droplet-associated proteins in alcoholic liver disease:a potential linkage with hepatocellular damage[J].International Journal of CLin-icaland Experimental Pathology,2015;8（8）:8699-8708.

5.楊建成，吳高峰，馮穎，等．牛磺酸對不同齡雄性大鼠性功能的影響[J].中國計劃生育學雜志,2008，151（5）：285-287.

6.邵祥龍，羅瓊，秦芹，等．山茱萸多糖對雄性大鼠性功能損傷的影響[J].中國中藥雜志，2010，35（6）：772-77

7.王濟，白明華，劉保興，等．疏肝益陽膠囊對動脈性勃起功能障礙大鼠性功能及性腺質量的作用[J].安徽中醫學院學報，2013，32（2）：54-56.

8.Goswami Sk,Gangadarappa Sk,Vishwanath M,et al. Antioxidant potential and abiLity of phloroglucinol to decrease formation of advanced glycation end products increase efficacy of siLdenafiL in diabetes-induced sexual dysfunction of rats.[J].Sex Med,2016 Jan 28.pii:S2050-1161（15）00003-3.[Epub ahead of print]

9.劉建榮，周安方．興靈湯對正常雄性大鼠性能力的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2006，12（3）：54-55.

10.范源，劉竹煥，陳少紅，等．生力膠囊對大鼠性功能的影響[J].中華男科學雜志,2007，13（7）：660-663.

（2016-05-24收稿）

Effect of Penthorum Chinense Pursh on sexual function of male rats

Liu Minghua1，Huang Qunliang2，Liu Zhongfei1，Shui Pixian1*1Department of Pharmacognosy School of Pharmacy,Departmenf of Pharmacy the Affiliated Hospital of Southwest Medical University,Luzhou,Sichuan Province,646000,China

Objective：To study the effect of pursh on sexual function of male rats.Methods：The rats were randomly divided into no treatment control group,Viagra（sildenafil citrate tablets,15 mg/Kg）positive control group,and three dosage groups of pursh of（0.5 g crude drug/Kg,1 g crude drug/Kg,and 2 g crude drug/Kg）. All treatment had lasted for a consecutive 28 days,and the mating ability,the weight of sexual organs,penile erectile function and the quality of sperms were compared among groups.Results：Each dosage group of pursh had no significant effect on the mating ability,organ index,penile erectile function,and sperm survival rate compared to the control group（P＞0.05）.Conclusion：Pursh has no obvious effect on the sexual function in male rats and therefore is safe for long-term use.

Penthorum Chinense Pursh;Sexual function;Mating ability

R285.5

A

10.3969/j.issn.1000-2669.2016.06.014

*四川省科技廳資助項目（2014ZC0052，2014JC0147），瀘州市科技局（2013LZLY-K66）

劉明華（1972-），男，教授

通迅作者：稅丕先（1967-），男，教授，碩導，E-mail:spx06702@163.com