Roche Cobas 501生化分析儀血清肌酐分析測量范圍的驗證

陳永傳,崔亞利，李　艷，任颯爽

(1.北京善方醫院檢驗科　100027；2.北京豐臺醫院檢驗科　100071)

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Roche Cobas 501生化分析儀血清肌酐分析測量范圍的驗證

陳永傳1,崔亞利2△，李艷1，任颯爽1

(1.北京善方醫院檢驗科100027；2.北京豐臺醫院檢驗科100071)

目的通過對血清肌酐分析測量范圍(AMR)的驗證，探討臨床實驗室如何按照國際標準要求進行生化分析儀定量檢測項目分析測量范圍的驗證，保證檢驗結果準確、可靠。方法采用酶法在Roche Cobas 501生化分析儀上檢測7個濃度水平美國病理學家協會(CAP)線性范圍能力測試樣品，這7個樣品靶值涵蓋廠家說明書標示肌酐分析測量范圍低、中、高值，每個樣品檢測兩次取其均值，計算其與靶值的偏倚。另外參照美國臨床和實驗室標準協會(CLSI )指南文件 EP6-P 的要求，收集含高值肌酐的新鮮患者血清，按一定比例混合、離心，計算混合物的濃度并將之作為高值樣品(H)，與經同樣處理獲得的低值樣品(L)分別按 5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的關系配制，形成系列樣品，在Roche Cobas 501 生化分析儀上對各樣品的肌酐進行檢測，每個樣品檢測4次，數據進行回歸分析。結果7個水平的CAP樣品與靶值的偏倚均小于北京善方醫院檢驗科設定的允許誤差±7.5%[(1/2×TE)%]。新鮮患者混合血清樣品回歸方程為Y=0.988 6X+16.614，b=0.988 6，介于0.97～1.03，截距a與0經t檢驗，ta0.05，說明截距與 0 無明顯差異，回歸直線事實上通過0點。結論廠家說明書標示的血清肌酐分析測量范圍驗證通過，實驗室可以采用。

肌酐；定量檢測；分析測量范圍；驗證

分析測量范圍(AMR)是指一種方法不需要經過任何稀釋、濃縮或者其他非常規檢測步驟的預處理，直接測量標本得到分析值的范圍[1]。AMR在試劑說明書上一般都會標示，但由于溫、濕度等實驗條件不同，每個臨床實驗室都應該對廠家說明書標示的AMR進行驗證，如有不符，應及時調整[2]。美國《臨床實驗室修正法案最終法規》、 ISO 15189 醫學實驗室認可標準、美國病理學家協會(CAP)的認可標準[1-4]，均要求實驗室對引進或改變的檢測系統做性能驗證后方可應用于常規工作，而性能驗證中的一個重要指標就是對定量檢測系統的AMR進行驗證[5]。本文以血清肌酐為例，報告北京善方醫院檢驗科對在Roche Cobas 501生化分析儀上定量檢測項目進行的AMR驗證。

1　材料與方法

1.1AMR驗證材料CAP線性范圍能力測試樣品LN2-B 2013，共7個水平(LN-28、LN-29、LN-30、LN-31、LN-32、LN-33、LN-34)。另外，收集高濃度肌酐的患者新鮮血清，要求外觀澄清，無溶血、脂血，濃度接近或超過廠家提供的分析測量范圍上限，將幾份血清混和離心，形成高值樣品(H)；另外收集低濃度肌酐的患者新鮮血清，同上處理形成低值樣品(L)。

1.2儀器與試劑Roche Cobas 501生化分析儀。校準品：Roche原裝配套CFAS。質控品：Roche原裝配套生化多項質控品，兩個水平。試劑：Roche原裝配套肌酐試劑，試劑盒標明其分析測量范圍為5～2 700 μmol/L。

1.3驗證方法定標通過，檢測質控在控后，進行AMR驗證品的檢測，將7個水平的CAP驗證品各檢測兩次，取其均值，計算其與靶值的偏倚[6]。將收集的患者新鮮血清混合樣品 H 和 L分別按 5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的關系各自配制，形成系列樣品。將系列樣品1 d內做2次測定，第1次從低濃度到高濃度，每個樣品做2次重復測定；第2次從高濃度到低濃度，每個樣品做2次重復測定。每個樣品共檢測4次。記錄結果，將結果進行統計分析。具體計算方法參照 EP6-P文件[7]。采用平均斜率來確定高值樣品應含有的待測物的值，然后依照試驗樣品配制稀釋關系，推算出不同樣品中應具有的待測物的值[8]。這些值成為分析測量范圍的預期值(X)，每一樣品的檢測均值減去低值樣品的檢測均值為實測值(Y)。

1.4統計學處理用SPSS 20.0統計軟件進行方差分析、線性回歸分析以及t檢驗，計量資料用Duncan檢驗判定組間差異。以P<0.05為差異有統計學意義。

2　結　　果

2.1CAP AMR驗證物檢測結果選取CAP 7個驗證物對肌酐的測量范圍進行驗證，結果如表1。每個驗證物測量的均值與已知的靶值間差異均無統計學意義(P>0.05)。

表1　　CAP 樣品AMR驗證物檢測結果

2.2CAP驗證物的均值與靶值間相關性分析驗證物的均值與靶值間相關性顯著，這反映兩者的測量具有較好的一致性(圖1)。

7個水平的CAP AMR驗證物的檢測值與靶值的偏倚均在可接受范圍±7.5%[(1/2×TE)%]，驗證物濃度范圍覆蓋廠家說明書標示的血清肌酐分析測量范圍(5～2 700 μmol/L)，驗證通過，廠家說明書標示的AMR本實驗室可以采用(圖2)。

2.3患者新鮮血清混合樣品驗證物結果以X表示各樣品的預期值，Y表示各樣品的實測值，利用SPSS 20.0統計軟件得出回歸方程Y=0.988 6X+16.614，r2=0.999 7(圖3)。斜率b=0.988 6，接近1(介于0.97～1.03)；截距a與0經t檢驗，ta=1.250 3，t0.05=1.734，ta0.05，差異無統計學意義，說明截距與0無明顯差異，回歸直線事實上通過0點。 據此，可以計算得出Roche Cobas 501生化分析儀肌酐分析測量范圍為4.25～2 739.18 μmol/L，覆蓋廠家提供的分析測量范圍5～2 700 μmol/L，驗證通過，廠家說明書標示的AMR本實驗室可以采用。

圖1　　CAP樣品均值與靶值的相關性分析

圖2　　CAP樣品AMR驗證物檢測偏倚圖(%)

圖3　　　　　患者新鮮血清混合樣品肌酐分析測量范圍驗證散點圖

3　討　　論

AMR驗證是臨床實驗室質量管理中的重要環節，每個臨床實驗室都應對廠家聲明的AMR進行驗證，如有不符，應及時調整。因為當檢測值超出AMR，被測物質的檢測值與實際濃度可能不存在線性關系，測量結果不可靠。對于患者標本而言，只有當檢測值落在AMR(或者可以通過稀釋、濃縮標本使檢測值落在AMR)時，其結果才能報告。當檢測值在AMR之外，其結果應報告為“小于”或者“大于”AMR限制閾[1]。用于AMR驗證的物質應具有合適的基質，北京善方醫院檢驗科選用CAP線性范圍能力測試樣品和患者新鮮血清混合樣品，盡量減少基質效應影響。用于AMR驗證的物質必須覆蓋低、中、高各濃度，至少需要4個以上驗證品，驗證過程應形成文件[9-11]。

當開始應用一種新方法時，就有必要對該方法進行AMR驗證，如果某種方法是全點定標(3點以上)，則之后無需再進行AMR驗證，但如果是一點或者兩點定標，則此后至少每6個月應再驗證一次[1]。當不可獲得CAP或其他權威機構驗證標本時，實驗室可使用患者新鮮血清混合樣品進行AMR驗證，如上文所述，所使用驗證品不同時驗證過程也不盡相同。

每個實驗室都應規定可接受的質量指標，對于CAP標本 AMR驗證的可接受偏倚，參照CAP能力驗證線性評估的允許偏倚，本室采用1/2×美國臨床實驗室改進修正法案規定的允許總誤差。對于患者新鮮血清混合樣品AMR驗證的可接受質量指標，可參照行業標準或相關文獻設定[12]。

本研究中CAP驗證品以及患者新鮮血清混合驗證品測量值與靶值(或預期值)間無明顯差異，具有較好的相關性，且偏倚范圍、差異都在可接受范圍內。這反映廠家說明書標示的血清肌酐在Roche Cobas 501生化分析儀上的分析測量范圍驗證通過，廠家說明書標示的AMR本實驗室可以采用。

[1]邱方，張世忠，馮濤.COBAS E601電化學發光檢測系統測定β-HCG的分析測量范圍和臨床可報告范圍的驗證[J].臨床檢驗雜志，2008，26(5):384-385.

[2]魏昊，叢玉隆，中國實驗室國家認可委員會技術委員會醫學分委會．醫學實驗室質量管理與認可指南[M]．北京：中國計量出版社，2004：59-75．

[3]Department of Health,Human Services,Centers for Medicare & Medicaid Services.Clinical laboratory improvement amendments of 1988:final rule[S].Fed Register,2003:3704-3710.

[4]畢波，呂元.定量檢測方法學性能驗證的系統設計[J].中華檢驗醫學雜志，2007，30(2):143-145．

[5]李林海，李瑩，石玉玲,等．羅氏 Cobas c501 檢測系統尿素分析測量范圍的驗證及評價[J].生物技術通訊，2010，21(4)：568-570.

[6]畢波，呂元.定量檢測系統的方法學性能驗證實驗結果的評價[J].中華檢驗醫學雜志， 2007，30(12)：1332-1335.

[7]NCCLS． Evaluation of the linearity of quantative analytical methods．Proposed guideline(second edition)：EP6-P2[S].Wayne，PA，USA：NCCLS，2002:1-55．

[8]馮仁豐．臨床檢驗質量管理技術基礎[M].2版.上海：上海科學技術文獻出版社，2007:138-162．

[9]朱薇，王麗娜，王靜，等．同型半胱氨酸檢測試劑與廠家聲明的一致性驗證[J]．中國衛生檢驗雜志，2016，26(1)：41-42．

[10]蘭克濤，陳娟，趙自云，等．兩種方法檢測血清糖類抗原125性能驗證與臨床應用評價[J]．中華醫院感染學雜志，2015，25(19)：4365-4367．

[11]李熙建，王鵬，鄧述琴，等．自建檢測系統與目標檢測系統檢測結果一致性的方法探討[J]．檢驗醫學，2008，23(6)：655-659．

[12]李林海，李瑩，石玉玲,等．羅氏 Cobas c501 檢測系統總膽紅素分析測量范圍的驗證及評價[J].國際檢驗醫學雜志，2011，32(4)：491-492.

Verification of analytical measurement range of serum creatinine detected by Roche Cobas 501 Biochemistry Analyzer

CHENYongchuan1,CUIYali2△,LIYan1,RENSashuang1

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,BeijingSanfineHospital,Beijing100027,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,BeijingFengtaiHospital,Beijing100071,China)

ObjectiveTo investigate how the clinical laboratory conducting the verification of analytical measurement range(AMR) of quantitative items detected by the biochemical analyzer according to the requirements of the international standards by verifying the serum creatinine AMR for ensuring the accuracy and reliability of detection results.MethodsThe enzyme method was adopted to detect the 7-concentration levels test specimens of CAP linear range proficiency test on the Roche Cobas 501 biochemical analyzer.These 7 specimens target values covered the low,middle and high values of creatinine AMR marked by the manufacturer′s instructions.Each specimen was detected twice and the mean value was taken,then the bias between the mean value and target value was calculated.In addition,referring to the requirements of CLSI guiding document EP6-P,the patients′ fresh serum containing high value creatinine was collected,then mixed with certain proportion and centrifuged.The mixture concentration was calculated and served as the high value specimen(H),and the low value specimen was obtained by the same treatment.Then the high and low value specimens were dispensed with the relations of 5L,4L+1H,3L+2H,2L+3H,1L+4H and 5H and formed the series specimens.The creatinine levels in each specimen was detected on the Roche Cobas 501 biochemical analyzer,each specimen was detected 4 times.The obtained data were performed the regression analysis.ResultsThe bias of 7-level CAP specimen and target value was less than the allowable error ±7.5%[(1/2×TE)%] set by the clinical laboratory of the Beijing Sanfine Hopsital.The regression equation of fresh mixed serums from patients wasY=0.988 6X+16.614,b=0.988 6,between 0.97-1.03,intercept a and 0,ta0.05,which showed no significant difference between intercept and 0,the regression line was through 0 point in fact.ConclusionThe verification of creatinine AMR marked by the manufacturer′ s instructions is passed,which can be adopted by the clinical laboratory.

creatinine;quantitative measurement;analytical measurement range;verification

陳永傳，男，主管技師，主要從事臨床生化研究。△

，E-mail:chenyc717@126.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.027

A

1673-4130(2016)16-2275-03

2016-04-01

2016-06-18)