輔助性T細胞亞型與慢性乙型肝炎的關系

李鈴，古雪，梅怡晗，梅小平

(1.川北醫學院，四川 南充　637000；2.首都醫科大學，北京　100069)

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輔助性T細胞亞型與慢性乙型肝炎的關系

李鈴1，古雪1，梅怡晗2，梅小平1

(1.川北醫學院，四川 南充637000；2.首都醫科大學，北京100069)

輔助性T細胞(helper t cell，Th細胞)在適應性免疫反應中起關鍵性作用，不僅能調節CTL的免疫應答效應而且還能刺激B細胞產生抗體。最早被發現的兩種Th細胞，根據其分泌的細胞因子的不同分別命名為Th1和Th2。最近研究又發現了Thl7、Treg、Th22、Th9和Tfh的存在，它們由特異性的轉錄因子、趨化因子誘導、刺激產生，并且分泌不同的細胞因子，從而參與炎癥、腫瘤、自身免疫反應等過程。在慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)的發病機制中，乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)介導的免疫應答是導致肝細胞損傷以及炎癥慢性化的關鍵因素，Th細胞在整個過程中起重要的作用。不同亞型的Th細胞被激活可能致機體產生不同的免疫反應，從而導致HBV感染后的不同臨床表現與轉歸，因此清楚各亞群Th細胞在HBV感染、轉化等過程中所主導的作用，將會為尋找慢性乙型肝炎發生、發展、轉歸、治療方法及效果提供思路。

輔助性T細胞；細胞因子；慢性乙型肝炎

1　Th1型細胞與CHB

Mosmann等[1]與Romagnani[2]相繼于1986、1991年在小鼠和人體內發現了Th1、Th2兩個Th細胞亞群，及這兩個亞型細胞分泌著不同的細胞因子，進而拉開了對CT4+T細胞亞群免疫學研究的帷幕。目前的研究認為Th1型細胞的分化需要IL-12的存在[3]，有的研究也發現IFN-γ也可以促進Th1型細胞的分化[4]，在這些復雜的過程中，還需要多種細胞因子、趨化因子和共刺激分子的協助。除此之外，T-bet(T-box expressed in T cells)作為Th1的特征性轉錄因子[5]，可以通過IL-2依賴的 信號傳導與轉錄激活子-1(signal transducer and activator of transcription-1，STAT1)或IFN-γ依賴的STAT4信號途徑，分泌IFN-γ、IL-12起到自我增強的作用外，另外還可以分泌IL-2、TNF-α等多種細胞因子參與免疫反應。通過分泌IFN-γ、IL-12可以直接增強細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)作用，也可以通過作用于巨噬細胞或者NK細胞，間接增強CTL的作用[6]；還可以作用于產生IgG型B細胞以及分泌IFN-γ的CD4+T細胞等。Jiang等[7]研究者表明在HBV急性感染期和慢性期Th1都比正常對照組升高，但以急性期升高明顯，主要表現為IFN-γ、IL-2、和TNF-α等細胞因子水平的升高。由此說明Thl細胞因子與肝臟炎癥活動和損傷相關，能增強細胞免疫作用，有利于病毒的清除，但同時增加了肝臟的炎癥反應，加重肝組織的損傷，使HBV感染趨于急性化。

2　Th2型細胞與CHB

Th2型細胞與Th1型細胞同時被發現，Th2型細胞的主要轉錄因子GATA-3[8]，與T-bet是相互拮抗的，這兩種轉錄因子在不同的細胞微環境中促使原始T細胞分別向Th2和Th1兩個不同的方向分化。IL-4是誘導Th2型細胞分化的重要細胞因子，在這個過程中需要誘導、激活STAT6信號途徑[9-10]。另外，在有些體內試驗也證實Th2的分化也可以沒有IL-4的誘導[11]，但不管是否需要IL-4的誘導，Th2型細胞的分化都必須有GATA3的存在。另外，IL-2也可以通過激活STAT5信號途徑誘導Th2細胞分化[12-13]。通過上訴途徑，Th2表達的主要細胞因子有 IL-4、5、6、10、13等。IL-4通過刺激B細胞產生IgG和IgE[14]； IL4和IL-13可誘導激活巨噬細胞[15]，IL-13還可以直接作用于上皮細胞以及平滑肌細胞[16]；IL-5可募集嗜酸性粒細胞[17]。因此，Th2型細胞主要是通過分泌各種細胞因子在細胞外病原體、寄生蟲感染，以及在哮喘、過敏性炎癥等疾病中起作用。張樹林等[18]研究報道，在慢性HBV感染穩定期，患者體內Th2呈優勢應答，直接表現為IL-4、IL-6和IL-10等升高。通過分泌上述細胞因子，CHB患者體內的Th2型細胞主要是誘導體液免疫反應以清除細胞外病原體，防止細胞內感染的擴散，減輕細胞損傷，同時分泌IL-4抑制Th0向Th1方向分化，從而抑制細胞免疫，使CTL細胞活性減弱，肝細胞損傷減輕，HBV感染趨向慢性化。

3　Th17細胞與CHB

繼Th1、Th2之后發現的又一新型Th細胞亞群——輔助性17細胞 (T helper 17，Th17)。Harrington等[19]于2005年在小鼠體內發現Thl7細胞，研究證明Th17的分化需要β轉化生長因子(transforming growth factor β，TGF-β)的存在，而IL-21、IL-6起重要的協同作用[20-22]。另外值得一提的是，活化的樹突狀細胞、巨噬細胞分泌IL-23，IL-23不能促使CD4+T細胞向Th17細胞分化,其主要作用是維持Th17細胞穩定分化，促進Th17細胞增殖[23]。魏斐菲等[24]通過敲除小鼠的孤獨核受體γt(orphan nuclear receptor gammat，RORγt)基因后，用TGF-β和IL-6不能誘導出Th17細胞的實驗,證明了RORγt(在人體主要是RORc)是控制Th17細胞分化的關鍵轉錄因子[25-26]。STAT3信號途徑也是Th17形成所必不可缺的[27]。激活Th17細胞后，其分泌的獨特的細胞因子家族包括IL-17A、IL-17F亞家族[28]，它們能募集、活化中性粒細胞，從而發揮免疫學效應，Th17還能分泌IL-21、IL-22及IL-6等細胞因子，激活單核巨噬細胞、皮細胞、內皮細胞、成纖維細胞等，導致慢性炎癥的形成或持續存在[29-30]。大量研究表明，在CHB患者體內Th17細胞主要是誘導固有免疫應答、激活中性粒細胞、產生炎癥反應等作用，表現為IL-17、Th17細胞均升高，并且隨著炎癥程度的加重而升高越明顯，說明Th17可能是造成肝臟炎癥、肝細胞損傷的獨立危險因素之一[31-33]。相關研究還證實了，在CHB患者體內Th17細胞主要是通過分泌的IL-17誘導IL-8介導肝臟中性粒細胞的招募，導致肝臟損傷[34]。

4　Treg細胞與CHB

1995年Sakaguchi等[35]發現成年鼠中約10%的外周血CD4+T細胞表達IL-2受體α鏈CD25，去除這群細胞則會引起小鼠自發產生多種自身免疫性疾病，而回輸該細胞則阻止疾病的發生。因此將這群細胞命名為CD4+CD25+調節性T細胞(Treg細胞)，于是就提出了又一種CD4+T細胞新亞群。根據Treg細胞來源和穩定性的不同分為：一類是直接來源于胸腺的天然調節性T細胞(nTreg)，被認為是穩定的亞群；另一種是適應性調節性T細胞(aTreg或iTreg)，由TGF-β誘導產生，如Th3、Tr1、CD8 Treg、NKT細胞等，這類細胞的穩定性相對較差。叉狀頭轉錄因子3(forkhead box p3,Foxp3)為Treg的特異性轉錄因子，在一定程度上還反應了Treg的水平和活性[36]。在原始T細胞，TGF-β既可以誘導Foxp3又可以誘導RORγt，但以前者占優勢，在缺乏IL-6時抑制RORγt的作用，促進Foxp3刺激Treg 細胞的形成[37]，分泌IL-4、IL-10、TGF-β等細胞因子，從而影響Treg與Th17的動態平衡[38]。Treg在外周血中通過與其他細胞的相互作用，或分泌抑制型的細胞因子，如IL-10和TGF-β，抑制其他T細胞的功能，參與自身免疫性疾病、移植免疫、腫瘤等多種免疫性疾病，主要表現為持續的免疫耐受。研究表明高HBV載量病人外周Treg增多，可能是長時間高濃度的抗原刺激T細胞，能誘導Treg細胞產生[39]。CHB患者體內CD4+CD25+Treg比例升高，Foxp3 mRNA表達顯著增高[40]，使得Treg細胞處于活動增強狀態，一方面抑制CD4+T細胞和CD8+T細胞功能，抑制免疫功能，減輕HBV對機體組織的免疫損傷，另一方面也導致病毒持續存在，引起乙肝慢性化。

5　Th1、Th2型細胞與CHB

Th0沿Thl或Th2方向分化，主要取決于細胞因子內環境、抗原結構、抗原提呈細胞水平與功能等多種因素，正常狀態下機體內Th1/Th2兩個細胞亞群相互制約，維持動態平衡狀態，正如上文所描述。Th1型細胞因子主要是在起細胞免疫調控作用，清除病毒，使感染趨于急性化。Th2型細胞主要是誘導體液免疫反應以清除細胞外病原體，防止細胞內感染的擴散，減輕細胞損傷，同時有抑制Th0向Th1方向分化的作用，從而抑制細胞免疫，使感染趨向慢性化[40]。Thl/Th2的失衡是機體不能有效清除病毒和病毒感染細胞的重要因素之一。在HBV感染慢性化階段，Th1/Th2平衡狀態發生“漂移”[41]，通過對HBV轉基因小鼠的研究發現，體內的HBeAg能耗竭體內的Thl細胞，使小鼠體內表現為Th2類型,抑制Th1型細胞因子分泌,促進Th2型細胞因子分泌,并且使體內存在的CD8+T細胞出現了功能和數量的變化[42-43]，從而有利于形成對HBV感染的免疫耐受。HBsAg還可誘導產生大量的IL-1O，IL-1O會抑制Thl細胞分化，使HBV 感染趨于慢性化。總而言之，在CHB患者體內Th細胞表現為Th1型免疫低下而Th2型免疫亢進。

6　Th17、Treg細胞與CHB

Th17和Treg細胞均起源于原始T細胞，TGF-β是它們共同而又必須的信號分子。正常情況下TGF-β促進Treg的產生，加入IL-6后抑制了Foxp3的表達，將抑制Treg細胞誘導Th17的分化[44]，而IL-6作為T淋巴細胞本身的自分泌因子具有正反饋調控Th17作用[45]。Treg細胞在IL-6和IL-21的刺激下也能產生IL-17，而Th-17在IL-12、IL-4的作用下能向Treg細胞方向轉化。Th17和Treg在一定條件下又能相互轉化，Laurence等[46]研究發現IL-2能通過STAT5路徑抑制Th17的分化，促進Treg細胞產生，而Treg細胞又能抑制T細胞(主要是Th1)產生IFN-γ和IL-2發揮負反饋調節作用。Treg細胞還可以通過分泌CD39與Th17細胞結合后能抑制三磷酸腺苷水解，抑制IL-17產生；同時，CD39也能使CD127表達增多從而使INF-γ和IL-17產生增多[47-48]，其作用可能與細胞所處的微環境有關。總之，Th17和Treg細胞及其分泌的細胞因子構成一個調節網絡，Th17通過分泌炎癥性細胞因子促進免疫反應，Treg通過分泌抑制性細胞因子抑制反應,它們之間的相互作用十分復雜，但具體機制仍不清楚，而Treg/Th17的失衡與疾病的發生有關[49-51]。HBV感染后慢性化機制也與Treg/Th17的失衡密切相關，Feng等[33]的研究結果是：CHB患者體內的Th17與Treg細胞與健康對照組相比都明顯升高，而Chen等[52]通過同樣的研究方法得出：與健康對照組相比CHB患者體內Treg降低，Th17升高，但兩人都得出了一個共同的結果：Treg/Th17明顯降低，因此對Treg /Th17與HBV感染關系的研究將有助于進一步了解慢性乙型肝炎發病的免疫學機制，Treg/Th17平衡對HBV感染相關肝病的發展方向和治療結果具有重要的指向作用。

總之，Th細胞在不同細胞因子環境中可分化為Thl、Th2、Treg、Thl7等多種亞群，在一定條件下各細胞亞群之間可以互相轉化，從而使健康機體的免疫效應和免疫抑制處于平衡狀態，Thl/Th2、Thl7/Treg平衡狀態對炎癥、自身免疫性疾病等的發生、發展中起重要指向性作用，如圖1所述。

7　展望

慢性乙型肝炎發病的免疫機制十分復雜，免疫耐受是乙型肝炎慢性化的根本原因，機體產生有效的免疫應答是清除HBV感染的關鍵。因此，通過各種免疫調節策略打破慢性HBV感染時的免疫耐受狀態，使機體免疫重建，可為徹底清除HBV提供新的思路。但目前用于治療慢性乙型肝炎的藥物中僅干擾素有免疫調節作用，其它免疫治療策略還處于探索階段，有待進一步優化和評估。所以，通過認識慢性乙型肝炎患者體內不同階段Th細胞亞型的免疫狀態及它們之間的相互關系，對分析疾病發生、發展狀況和提供正確的治療措施都是有必要的。盡管近年來該領域進展很快，但至今仍未完全闡明其機理，仍有待于進一步研究。

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(學術編輯：劉鳳君)

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.04.048綜述

2015-11-09

李鈴(1990-)，女，碩士研究生。E-mail：709477494@qq.com

梅小平，E-mail：1124377569@qq.com

網絡出版時間：2016-8-217∶48網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20160802.1748.096.html

1005-3697(2016)04-0618-04

R512.6

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