大黃對慢性便秘模型大鼠結腸血管活性腸肽水平及腸動力影響研究

杜麗娟，占煜，吳至久，孔鵬飛，趙兵，陳泰宇，唐學貴

(1.川北醫學院附屬醫院肛腸科，四川 南充　637000;2.成都中醫藥大學，四川 成都　610072; 3.成都市第一人民醫院，四川 成都　610071)

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大黃對慢性便秘模型大鼠結腸血管活性腸肽水平及腸動力影響研究

杜麗娟1,2，占煜3，吳至久1，孔鵬飛1，趙兵1，陳泰宇1，唐學貴1

(1.川北醫學院附屬醫院肛腸科，四川 南充637000;2.成都中醫藥大學，四川 成都610072; 3.成都市第一人民醫院，四川 成都610071)

目的：采用洛哌丁胺灌胃建立便秘大鼠模型，觀察大黃對便秘模型大鼠血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)水平的影響。方法：健康 Wistar大鼠18只，隨機分為3組，空白組、模型組、大黃組。模型組及大黃組采用配制好的含洛哌丁胺(1.5 mg·kg-1·d-1)混懸液2 mL灌胃7 d。模型建立后，大黃組以大黃(5 mg/kg)混懸液2 mL灌胃。檢測結腸傳輸，ELISA檢測AQP3含量。結果：(1)造模后大鼠的體重增加、結腸存留糞便增多、糞便含水量降低、腸道傳輸時間延長(P<0.05)；(2)大黃干預組大鼠大便量、糞便含水量增加(P<0.05)；(3)大黃干預便秘大鼠，其結腸傳輸時間縮短，VIP水平明顯低于模型組(P<0.05)。結論：大黃可加快腸道傳輸，可能與降低大鼠結腸中VIP水平，促進腸蠕動有關。

大黃；血管活性腸肽；便秘

【Abstract】Objective：To observe the effect of Rhubarb on the vasoactive intestinal peptide (VIP)in colon tissues in the Lopersmide-induced constipated rats.Methods：18 healthy Wistar rats were randomly divided into 3 groups,the control group,model group and rhubarb group.Model group and rhubarb group were prepared with the fittest dosage of Lopersmide(1.5 mg·kg-1·d-1)mixed suspension 2 mL lavage 7 d.After model establishment,rhubarb group with rhubarb (5 mg/kg)mixed suspension 2 mL lavage.Detection of colonic transmission,ELISA detection of AQP3 content.Results：(1)After building the model,the rats’ weight gain,the colon feces increase,waste water content reduce and the transmission time of the intestinal tract prolonged(P<0.05);2)The feces and the waste water content of rats in rhubarb group were increased obviously(P<0.05).(3)Rhubarb intervention in rats with constipation,the colonic transit time was shortened,VIP level was significantly lower than the model group (P<0.05).Conclusion：Rhubarb can accelerate intestinal transmission,may be related to reducing the level of VIP in the colon of rats,and promoting the intestinal peristalsis.

【Key words】Rhubarb;Vasoavtive intestinal peptide;Constipation

慢性便秘(chronic constipation，CC)是最常見的胃腸道運動障礙性疾病。臨床上表現為大便次數減少，排便間隔時間延長、便意消失及排便困難為主要癥狀，但其確切的病因病機尚未完全明確。目前一系列研究[1-3]表明，一些胃腸激素如血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)、生長抑素、胃泌素等分泌異常與其發病密切相關，其中VIP為抑制性神經遞質，可舒張平滑肌，抑制腸敏感性。大黃作為治療便秘的常用藥物，具有瀉下通便的作用。為了進一步探討大黃藥物作用機制，本研究采用洛哌丁胺灌胃制備便秘大鼠模型，使用中藥大黃進行干預，通過觀察大鼠腸動力及結腸組織中VIP含量的變化，為大黃對調節胃腸運動和水液調節提供理論基礎。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1動物清潔級成年雄性Wistar大鼠18只，體重(230±20)g，由川北醫學院動物實驗中心提供，動物合格證號：SCXK(川)2013-18。動物在川北醫學院SPF級實驗動物中心飼養，飼養條件為II級，光照周期12 h/12 h，室溫20～22 ℃，相對濕度45%～60%，自由進食、飲水。

1.1.2藥物及試劑生大黃50 g，購于川北醫學院附屬醫院中藥房，經藥學院鑒定為正品掌葉大黃。鹽酸洛哌丁胺膠囊(西安楊森制藥公司，批號140709510)，ELISA試劑盒(武漢華美公司，CSB-E08355r)。

1.1.3儀器酶標儀(Thermo Fisher Scientific公司)，5430R低溫高速離心機(Eppendorf公司)。

1.2方法

1.2.1動物分組大鼠18只，隨機分為空白組、模型組、大黃組，每組6只。

1.2.2便秘大鼠模型建立便秘大鼠模型建立參考黃小麗等[4]的造模方法進行改進，以洛哌丁胺(1.5 mg·kg-1·d-1)與生理鹽水配置成2 mL溶液給予大鼠灌胃，2次/d，共7 d。大鼠出現精神狀態差，活動量減少，體重增加，大便粒型小、干硬等表現時，為模型復制成功。

1.2.3給藥方法大黃組在造模成功后給予生大黃粉(5 mg/kg)混懸液2 mL灌胃1次，空白組和模型組正常飼養。

1.2.4指標檢測(1)一般行為學觀察：觀察動物一般行為表現，包括活動量、皮毛光澤度、體質量及排便情況；(2)炭末推進實驗及糞便含水量測定：采用活性炭灌胃法觀察腸道傳輸功能。每組大鼠禁食 40 min后，經口灌入 100 g/L活性炭混懸液 2 mL，等待40 min后立即處死大鼠，取結腸內糞便稱其濕重，糞便 37 ℃ 恒溫干燥箱，稱其干重，計算糞便含水率。糞便含水率 = (濕重-干重)/濕重×100%。摘除從幽門到直腸末端的全部腸道。將腸管拉直后測量腸管的長度，即幽門至肛門的長度。松弛狀態下測量腸道全長，以及活性炭懸液前端(腸內容物呈漆黑處)到幽門的距離與腸道全長的百分比；(3)ELISA法檢測結腸組織中VIP水平：操作嚴格按說明書進行，每樣本均作復孔檢測,取均值為最終結果,以試劑盒各自標準品繪制標準曲線,依曲線計算各樣本中VIP含量。

1.3統計學分析

2　結果

2.1各組大鼠實驗期間一般情況比較

造模期間，模型組有1只大鼠灌胃后發生嗆咳死亡。造模前，各組大鼠皮毛光澤色白，背毛光澤，反應靈敏，進食、飲水正常，大便正常；造模后動物逐漸出現飲食減少，體重增加，毛色干枯，反應遲鈍，大便顆粒干燥。自大黃治療用藥起，大便逐漸正常，大便量、糞便含水量增加。

2.2各組大鼠炭末推進率比較

3組間大鼠炭末推進率總的說來有差異(F=10.186，P=0.002)。模型組大鼠炭末推進率低于空白組大鼠，差異有統計學意義(P<0.05)；大黃組炭末推進率高于模型組大鼠，差異有統計學意義(P<0.05)(表1)。

表1　各組炭末推進率比較±s)

*P<0.05，與空白組比較；﹟P<0.05，與模型組比較。

2.3各組大鼠結腸組織VIP含量結果

3組間大鼠結腸組織中VIP含量總的來說有差異(F=11.481，P=0.001)。模型組大鼠VIP含量低于空白組，但差異無統計學意義(P>0.05)，提示洛哌丁胺造模7 d，大鼠近端結腸VIP水平無顯著變化；大黃組大鼠結腸VIP水平與模型組比較明顯降低，差異有統計學意義(P<0.05)(表2)。

表2　各組VIP表達含量比較

*P<0.05，與模型組比較。

3　討論

便秘是常見的胃腸道癥狀，表現為排便次數減少糞便干硬和(或)困難，病程在 6個月以上稱為CC。CC的病因包括功能性、器質疾病和藥物等。本實驗通過洛哌丁胺給予大鼠灌胃復制便秘大鼠模型。在第3天有近半出現糞?？s短、干硬，其余亦少見稀便，至第7天上述變化更為明顯，結合大鼠癥狀、體質量變化、結腸糞便量以及糞便含水量、腸傳輸減慢等可初步判定洛哌丁胺誘導便秘的復制成功。其建立的大鼠便秘模型的復制周期較短，癥狀持續時間較長，能夠較好地模擬人類CC的病理生理特點。

VIP是由28個氨基酸組成的直鏈肽，屬于胰高血糖素-胰泌素家族，因具有血管活性作用而命名，其廣泛分布于中樞神經系統、心血管、胰腺及全部胃腸道中，VIP濃度在胃腸道中以十二指腸和結腸最高[5-8]。VIP是參與調節腸蠕動的重要腸神經遞質，具有抑制胃腸運動，延長胃排空時間，抑制腸道環形肌收縮，對腸壁內神經叢的抗應激及穩定作用，促進腸分泌和抑制腸吸收等作用[9-12]。國內使用傳統瀉下中藥(如大黃、番瀉葉等)治療CC患者，面臨諸多質疑，認為長期使用會加重便秘，為發展傳統瀉下中藥，使其能夠更好地應用于臨床，故本研究采用大黃進行干預。結果發現當給予便秘大鼠灌服大黃5 h，糞便中含水量升至70%以上，較模型組明顯升高。同時，大黃可下調結腸VIP水平，與腸傳輸功能變化具有較好一致性，提示VIP與大黃促進腸蠕動有關。

綜上所述，大黃治療大鼠便秘的作用機制可能是：通過降低抑制性腸神經遞質VIP含量，增加胃腸黏膜分泌活動，促進腸蠕動，加快腸道傳輸，從而達到治療便秘的目的。

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(學術編輯：任明揚)

Effect of rhubarb on the vasoactive intestinal peptide and motility in colon tissues of rats with chronic constipation

DU Li-juan1,2，ZHAN Yu3，WU Zhi-jiu1，KONG Peng-fei1，ZHAO Bin1，CHEN Tai-yu1，TANG Xue-gui1

(1.Department of Anorectal,Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College，Nanchong 637000;2.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610072;3.Chengdu First people’s Hospital,Chengdu 610071,Sichuan,China)

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.04.06論著

國家自然科學基金項目(81273663)；四川省教育廳青年基金項目(11ZB184)；川北醫學院科研發展計劃項目(CBY12-A-ZP02)

2016-04-06

杜麗娟(1981-)，女，博士研究生。E-mail: 3429287@qq.com

占煜，E-mail: 277546066@qq.com

網絡出版時間：2016-8-217∶48網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20160802.1748.010.html

1005-3697(2016)04-0470-03

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