RP—HPLC測定不同儲藏溫度的余甘子精粉中單寧酸沒食子酸的含量變化

任嬌　陳平　王芬　周國麗　范源

摘要：目的測定余甘子精粉在不同溫度儲藏下沒食子酸、單寧酸活性成分的含量變化，分析余甘子精粉中活性成分最適宜的儲存溫度。方法將余甘子精粉分別置于30℃、5℃、-20℃環(huán)境下避光保存，利用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）進行沒食子酸、單寧酸含量測定。結(jié)果隨儲存溫度的升高，余甘子精粉中沒食子酸和單寧酸的含量從-20～5℃有所升高，從5℃～30℃之間都明顯的下降。結(jié)論余甘子精粉中沒食子酸和單寧酸在不同溫度儲存下含量不同，5℃時含量達到最高，可為余甘子精粉的儲存及養(yǎng)護提供一定參考。

關(guān)鍵詞：余甘子精粉；沒食子酸；單寧酸；反相高效液相色譜

中圖分類號：R284文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2016）10-0069-03

Determination of Tannins and Gallic Acid Content in Emblica Powder

at Different Storage Temperatures by RP-HPLC

REN Jiao1， CHEN Ping1， WANG Fen1， ZHOU Guoli1， FAN Yuan2

（1. Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650500， Yunnan；

2. The First Affiliated Hospital of Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650500， Ynnan）

【Abstract】Objective： To determine the content change of gallic acid and tannic acid activity in emblica powder stored at different temperatures and to analyze best storage temperature for active ingredients in emblica powder. Methods： Emblica powder was kept in dark place in 30℃， 5℃ and -20℃ of environment and RP-HPLC was used to determine gallic acid and tannic acid content. Results： With the increase of storage temperature， the gallic acid and tannic acid content in emblica powder increased from -20 to 5℃ to some extent and significantly decreased from 5℃ to 30℃. Conclusion： The gallic acid and tannic acid content in emblica powder is different at different storage temperatures. When stored at 5℃， its content is highest. The study can provide certain reference for the storage and conservation of emblica powder.

【Key words】emblica powder， gallic acid， tannic acid， RP-HPLC

余甘子（Fructus Phyllanthi）是大戟科（Euphorbiaceae）、葉下珠屬（Phyllanthus）植物余甘子（Phyllanthus emblica L.）的果實。又名油甘子、滇橄欖、橄欖子、庵摩勒、久如拉、麻頂幫，氣微、味甘、酸、澀，性涼。它在中國、印度、伊朗、阿富汗等17個國家的藥物體系和我國中藥、藏藥、蒙藥、傣藥、維吾爾民族藥等傳統(tǒng)藥物體系中應用極廣。余甘子整株植物作為藥食兩用的植物，各個器官應用廣泛，共涉及42種藥用或保健功能[1]。作為一味重要的傳統(tǒng)民族藥，已被載入多版《中華人民共和國藥典》[2]（以下簡稱《中國藥典》）。

余甘子精粉是采用噴霧干燥技術(shù)，通過提取余甘子果實的有效成分而得到的一種速溶粉。余甘子精粉呈土黃色或淺黃色，含有豐富的維生素C、E多種氨基酸，富含鞣質(zhì)、有機酸、酚類，還含有相當數(shù)量的能清除自由基的超氧化物歧化酶（SOD），其中每克含量高達482.14單位[2]。且無明顯的毒副作用[3-4]。具有清熱涼血、消食健胃、生津止渴、抗衰老、防癌癥等多種保健與治療的作用而廣泛應用。

目前對余甘子精粉質(zhì)量的控制多集中在黃酮和多糖類成分。酚類化合物是其藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)之一[5-7]，其中沒食子酸、單寧酸為傳統(tǒng)中藥的常見酚類成分之一。

余甘子精粉在不同溫度儲存中活性成分易發(fā)生褐變對其產(chǎn)品的穩(wěn)定性均有較大的影響。為提高余甘子精粉的利用，本實驗采用反相高效液相色譜法測定在不溫度儲存條件下，余甘子精粉中單寧酸和沒食子酸的含量[8]確定最適宜儲存的溫度。

2材料與方法

2.1實驗試劑滇橄欖精粉樣品（龍潤集團有限責任公司）；單寧酸對照品和沒食子酸對照品（索萊寶生物科技有限公司）；50%甲醇；0.2%磷酸（色譜純）；甲醇（色譜純）。

2.2儀器Agilent HP1100高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；Agilent C18柱；電子天平CP114（奧豪斯儀器上海有限公司制造）；HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市正基儀器有限公司）；溫度計；回流裝置；抽濾器。

2.3HPLC的色譜條件

2.3.1 單寧酸的測定條件Agilent C18色譜柱；流動相 水：甲醇（20%：80%）；溫度25℃；流速：0.5 mL/min；波長275 nm；進樣量2 uL；時間：10 min。

2.3.2沒食子酸的測定條件Agilent C18色譜柱；流動相 0.2%磷酸：甲醇（95%：5%）；溫度25℃；流速1 mL/min；波長273 nm；進樣量10 uL；時間15 min。

2.4對照品溶液的制備

2.4.1 單寧酸對照品溶液的制備精密稱取0.00044 g單寧酸對照品，置于10 mL容量瓶中，用7 mL乙醇、2.9 mL水和0.1 mL丙酮的混合液定容，即得。

2.4.2沒食子酸對照品溶液的制備精密稱取0.0025 g沒食子酸對照品，置于10 mL容量瓶中，用50%甲醇定容，即得。

2.5樣品溶液的制備

2.5.1單寧酸酸樣品溶液的制備取適量余甘子精粉，過60目篩，精密稱定3份5 g余甘子精粉，分別置于密封袋里，放在30℃、5℃、-20℃環(huán)境下避光保存72 h，置具塞錐形瓶中，按料液比1：30加入60%乙醇濃度，稱重，提取溫度85℃、回流提取時間1.5 h[9]，再次稱重，冷卻至室溫，用60%乙醇溶液補足失重，搖勻，真空抽濾一次，測量濾液體積，取2 mL續(xù)濾液用（0.45 um）微孔慮膜過濾，即得所需供試品。

2.5.2沒食子酸樣品溶液的制備取適量余甘子精粉，過60目篩，精密稱定3份5 g余甘子精粉，分別置于密封袋里，放在30℃、5℃、-20℃環(huán)境下避光保存72 h，置具塞錐形瓶中，精密加入250 mL的50%甲醇溶液，稱重，回流提取1 h[10]，冷卻至室溫，再次稱重，用50%甲醇溶液補足失重，搖勻，真空抽濾一次，測量濾液體積，取2 mL續(xù)濾液用（0.45 um）微孔慮膜過濾，即得所需供試品。

2.6標準曲線的制備單寧酸標準曲線的制備 精密稱取對照品2.58 ug，置于10 mL容量瓶中，用乙醇、水、丙酮體積比為69.9、29.8、0.3%的溶液溶解并定容至刻度，搖勻，作為儲備液。按上述單寧酸色譜條件分別取2、4、6、8、10 uL不同體積進樣，以單寧酸的峰面積為縱坐標，以標準品的質(zhì)量為橫坐標，繪制標準曲線，其線性回歸方程y=5719.5x-1924.8，r=0.9974，結(jié)果表明：單寧酸峰面積值與質(zhì)量有良好的線性關(guān)系，線性范圍為0.516～2.58ug。

沒食子酸標準曲線的制備 精密稱取對照品2.5 mg，置于25 mL容量瓶中，用50%的甲醇溶解定容至刻度，搖勻作為儲備液。分別精密吸取0.1、0.5、1、2、4 mL于10 mL容量瓶中，50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即配制成濃度為1、5、10、20、40 ug/mL的標準溶液。按上述色譜條件進樣20 uL，以沒食子酸的峰面積為縱坐標，標準品的濃度為橫坐標，繪制標準曲線，其線性回歸方程y=114.7x+2.4554，r=0.9999，結(jié)果表明：沒食子酸峰面積值與濃度有良好的線性關(guān)系，線性范圍為1～10 ug/mL。

3實驗結(jié)果見表1-3及圖1-2。

4結(jié)論

以上實驗數(shù)據(jù)可以看出：不同溫度儲存下余甘子精粉中的單寧酸、沒食子酸活性成分會發(fā)生變化，其中較高溫易促使單寧酸、沒食子酸等活性物質(zhì)含量下降，當儲存溫度在5℃時單寧酸、沒食子酸的含量最高。

近年來世界衛(wèi)生組織已將余甘子指定為世界廣泛種植的3種保健植物之一[11-13]。我國目前余甘子精粉產(chǎn)量較大，應用廣。如果不注重儲存的溫度，可導致余甘子的褐變，影響到余甘子產(chǎn)品的質(zhì)量。本實驗利用反相高效液相色譜法對其不同溫度儲存下的含量測定，研究并分析余甘子精粉適宜的儲存溫度，可以較好的保證其質(zhì)量，為余甘子精粉的儲存及養(yǎng)護提供一定參考。

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