治療奶牛子宮內(nèi)膜炎中藥泡騰栓的篩選及研制

潘秋亮,趙樹臣,侯振中

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院動(dòng)物普通疾病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,黑龍江哈爾濱150030)

治療奶牛子宮內(nèi)膜炎中藥泡騰栓的篩選及研制

潘秋亮,趙樹臣,侯振中

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院動(dòng)物普通疾病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,黑龍江哈爾濱150030)

為治療奶牛子宮內(nèi)膜炎篩選合適的中藥組方,制備成中藥泡騰栓,試驗(yàn)采用正交方法和試管二倍稀釋法,選取蒲公英、當(dāng)歸、川芎等11味中藥提取物顆粒,對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎主要致病菌進(jìn)行抑菌試驗(yàn),篩選合適的中藥組方并確定組方的抑菌效果;采用正交試驗(yàn)篩選泡騰栓基質(zhì)最佳配比,制備成中藥泡騰栓劑,并確定中藥泡騰栓劑的抑菌效果.結(jié)果表明:篩選的中藥組方對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎主要致病菌有明顯的抑制作用;泡騰栓優(yōu)選配比為PEG-6000 1.40 g,碳酸氫鈉0.26 g,檸檬酸0.24 g,吐溫-80 0.03 g,主藥含量0.404 g,中藥泡騰栓質(zhì)量檢查符合中國藥典的規(guī)定,并且對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎主要致病菌的抑制效果和原藥相近.制備的中藥泡騰栓符合臨床用藥標(biāo)準(zhǔn),可初步用于臨床中試來治療奶牛子宮內(nèi)膜炎.

奶牛;子宮內(nèi)膜炎;中藥;泡騰栓

奶牛子宮內(nèi)膜炎是奶牛產(chǎn)后常發(fā)病,是造成奶牛不孕癥的主要原因之一.一直以來,治療子宮內(nèi)膜炎的藥物以化學(xué)藥物和抗生素為主,但是隨著細(xì)菌耐藥性和藥物殘留等問題的不斷出現(xiàn),中藥逐漸成為治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的一種理想藥物.根據(jù)中獸醫(yī)理論,選擇合適的中藥組方不僅能保證良好的治療效果,而且可以在一定程度上解決藥物殘留和耐藥菌株等問題.將合適的中藥組方制成的泡騰栓,在子宮內(nèi)環(huán)境作用下產(chǎn)生大量持續(xù)性的泡沫,使得中藥成分可以深入到子宮黏膜的皺褶內(nèi),與細(xì)菌感染之處充分接觸,更大程度的發(fā)揮藥物作用,以取得更好的治療效果.

1　材料

1.1供試細(xì)菌厭氧菌(擬桿菌)、大腸桿菌、鏈球菌、化膿菌,從黑龍江省哈爾濱某奶牛場(chǎng)患有子宮內(nèi)膜炎的奶牛分離.

1.2主要儀器恒溫培養(yǎng)箱,厭氧罐,紫外可見分光光度計(jì),恒溫水浴鍋,藥篩(80目),栓劑模具,栓劑崩解儀等.

1.3主要試劑培養(yǎng)基有營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、厭氧瓊脂培養(yǎng)基等;中藥為蒲公英、當(dāng)歸、川芎、雙花等11味中藥提取物顆粒,購自哈爾濱祖國醫(yī)藥研究所;檸檬酸、碳酸氫鈉、聚乙二醇PEG-6000、吐溫-80等均為分析純.

2　方法

2.1中藥組方的篩選

2.1.1供試菌液將供試細(xì)菌分別接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基和硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基,按照需氧和厭氧的不同菌種培養(yǎng)條件,于37℃溫箱內(nèi)分別培養(yǎng)18～20 h后,用紫外分光光度計(jì)在625 nm波長下進(jìn)行比色,調(diào)整吸光度為0.08～0.1,即含細(xì)菌數(shù)約為1X108～2X108個(gè)/mL,備用.

2.1.2中藥的制備設(shè)計(jì)2水平,11因素的L12(211)正交表,并根據(jù)中藥提取物顆粒和中藥飲片的比例準(zhǔn)確稱量中藥提取物顆粒形成12組試驗(yàn)組方,加入適量滅菌蒸餾水使中藥組方溶解,制成含藥量為2 g/mL的藥液,備用.

2.1.3中藥抑菌正交法篩選試驗(yàn)根據(jù)文獻(xiàn),按照中獸醫(yī)辨證論治的原則,選取蒲公英、當(dāng)歸、雙花等清熱解毒、活血化瘀、去腐生肌、提高免疫力和子宮收縮力等11味中草藥,根據(jù)L12(211)正交表,進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn),確定中藥組方.

抑菌試驗(yàn)參照馬振亞介紹的中草藥抗菌作用試驗(yàn)方法-改進(jìn)的試管二倍連續(xù)稀釋法進(jìn)行[1].

2.1.4中藥組方的確立與體外抑菌效果觀察按照L12(211)正交表,根據(jù)正交原理,采用直觀分析法,以抑菌強(qiáng)弱確定組方.體外抑菌試驗(yàn)方法同2.1.3.

2.2中藥泡騰栓的制備

2.2.1泡騰栓酸堿源和基質(zhì)的前期處理將檸檬酸和碳酸氫鈉置于105℃的鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)分別干燥2 h和1 h,取出冷卻,分別研細(xì),過80目篩備用;將PEG-6000置于65℃的恒溫箱中熔融,均勻混入碳酸氫鈉,冷卻后研細(xì),過80目篩備用.

2.2.2泡騰栓基質(zhì)的篩選采用4因素-3水平L9(34)正交試驗(yàn)(表1),以pH值、泡沫量、泡沫持續(xù)時(shí)間、起泡時(shí)間等為參考指標(biāo),篩選泡騰栓的最佳基質(zhì)配比.用熱熔法制備泡騰栓,并進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)[2].

表1　基質(zhì)用量水平

2.2.3中藥泡騰栓中藥量的確定根據(jù)預(yù)試驗(yàn)和文獻(xiàn)資料,選取主藥和基質(zhì)的比例確定為1∶4,每粒泡騰栓含藥0.404 g.

2.2.4含藥泡騰栓的制備準(zhǔn)確稱量主藥研細(xì)過80目篩,備用;將吐溫-80加入融化的含有碳酸氫鈉的PEG-6000中混勻;將檸檬酸和主藥混入熔融的PEG-6000中充分?jǐn)嚢杈鶆?趁熱均勻倒入栓劑模具中,置于-20℃的冰箱中冷卻,切去多余部分,脫模即得.

2.2.5中藥泡騰栓的質(zhì)量檢查與體外抑菌效果觀察對(duì)中藥泡騰栓的外觀、重量差異、融變時(shí)限、變形溫度、pH值、起泡時(shí)間、泡沫量和泡沫持續(xù)時(shí)間等指標(biāo)進(jìn)行檢查和測(cè)定[2-3].將中藥泡騰栓制成含藥2 g/mL的藥液,抑菌試驗(yàn)方法同2.1.3.

3　結(jié)果

3.1治療奶牛子宮內(nèi)膜炎中藥組方的篩選

3.1.1二倍稀釋法中藥體外抑菌L12(211)正交結(jié)果見表2.

根據(jù)極差R所示,表2中因子A、D、F、G、I、J對(duì)4種細(xì)菌的某1種或幾種都有較強(qiáng)的抑菌作用,可作為組方的主要成分;因子E、H、K對(duì)4種細(xì)菌的抑菌呈現(xiàn)較強(qiáng)的負(fù)面作用,排除在組方之外;因子B、C對(duì)4種細(xì)菌的抑菌作用沒什么明顯影響,可參考應(yīng)用.根據(jù)中獸醫(yī)理論,在主要抗菌藥物的基礎(chǔ)上,應(yīng)增加一些活血化瘀、增加子宮收縮力的中藥,故選取A、B、C、D、F、G、I、J 8種藥物作為治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的中藥組方.

表2　L12(211)正交法中藥抑菌結(jié)果

3.1.2中藥組方抑菌作用試驗(yàn)結(jié)果見表3.

表3　中藥組方對(duì)4種菌的抑菌結(jié)果

結(jié)果顯示,中藥組方對(duì)大腸桿菌的最低抑菌濃度為500 mg/mL,對(duì)鏈球菌的最低抑菌濃度為500 mg/mL,對(duì)化膿菌的最低抑菌濃度為250 mg/ mL,對(duì)擬桿菌的最低抑菌濃度為125 mg/mL.

3.2中藥泡騰栓的制備

3.2.1泡騰栓基質(zhì)篩選結(jié)果見表4.

對(duì)表4進(jìn)行極差分析:各因子對(duì)pH值的影響主次為B>C>A>D,最優(yōu)方案為A1、B1、C3、D3;各因子對(duì)泡沫量的影響主次為B>A>C=D,最優(yōu)方案為A2、B3、C3、D3;各因子對(duì)泡沫持續(xù)時(shí)間的影響主次為A>B>D>C,最優(yōu)方案為A3、B1、C1、D2.綜合考慮因子A、B、C、D分別對(duì)3個(gè)指標(biāo)的影響,得出泡騰栓輔料的最優(yōu)方案為:A3、B1、C3、D3,即泡騰栓基質(zhì)的最優(yōu)處方為:PEG-6000 1.40 g,碳酸氫鈉0.26 g,檸檬酸0.24 g,吐溫-80 0.03 g.按此處方加入處方量的中藥制備中藥泡騰栓.

表4　基質(zhì)篩選正交分析結(jié)果

3.2.2中藥泡騰栓的質(zhì)量檢查結(jié)果

3.2.2.1外觀深褐色栓劑,外形和色澤均勻,表面光滑,無裂縫,不起霜,將栓劑橫向、縱向切開,基質(zhì)分散均勻,無分層現(xiàn)象,具備一定硬度.保存時(shí)無酸敗變質(zhì)或變形.

3.2.2.2重量差異測(cè)定結(jié)果見表5.

表5　泡騰栓的重量差異

結(jié)果顯示,中藥泡騰栓劑的重量差異符合中國藥典(2010版)的規(guī)定.

3.2.2.3融變時(shí)限、變形溫度和pH值測(cè)定結(jié)果見表6.

表6　融變時(shí)限、變形溫度和pH值測(cè)定

結(jié)果顯示,中藥泡騰栓的融變時(shí)限為12 min,符合藥典規(guī)定.變形溫度為39℃,接近體溫,可在體溫與子宮內(nèi)液體的作用下熔解.pH值呈弱酸性,可減少對(duì)機(jī)體刺激.

3.2.2.4起泡時(shí)間、泡沫量和泡沫持續(xù)時(shí)間的測(cè)定結(jié)果見表7.

表7　起泡時(shí)間、泡沫量和泡沫持續(xù)時(shí)間的測(cè)定值

結(jié)果表明,中藥泡騰栓在子宮內(nèi)迅速產(chǎn)生大量泡沫,并且能夠持續(xù)較長時(shí)間.

3.2.3泡騰栓抑菌試驗(yàn)結(jié)果見表8.

表8　泡騰栓對(duì)4種菌的抑菌結(jié)果

結(jié)果顯示,中藥泡騰栓對(duì)大腸桿菌的最低抑菌濃度為500 mg/mL,對(duì)鏈球菌的最低抑菌濃度為500 mg/mL,對(duì)化膿菌的最低抑菌濃度為1 000 mg/mL,最低抑菌濃度為250 mg/mL.

4　討論

4.1中藥組方的篩選中獸醫(yī)學(xué)認(rèn)為,子宮內(nèi)膜炎是一種"血瘀證",治療多以活血化瘀、清熱解毒、抑菌消炎為原則[4].中藥可活血祛瘀,改善子宮內(nèi)血液循環(huán),調(diào)節(jié)子宮新陳代謝;中藥亦可抑菌消炎、增強(qiáng)機(jī)體免疫.當(dāng)歸、川芎等中藥活血化瘀、去腐生肌藥效顯著,蒲公英、苦參、黃芩等具有較好的清熱解毒、清熱燥濕的抑菌消炎作用.經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析,將其篩選為治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的中藥組方.

4.2中藥泡騰栓的制備加入發(fā)泡劑,使得泡騰栓產(chǎn)生泡騰作用,藥物得以加速釋放,而且有利于藥物分布和滲入黏膜皺褶[5].試驗(yàn)采用中藥提取物顆粒,保證了在制備過程中發(fā)泡劑不會(huì)由于水分過多而發(fā)生泡騰反應(yīng).采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法篩選發(fā)泡劑和表面活性劑含量,使泡騰劑發(fā)揮最佳效果,并且提供對(duì)子宮刺激性小的弱酸性環(huán)境;表面活性劑可以使泡騰栓劑的吸收和藥物釋放速度加快,促進(jìn)藥物在黏膜內(nèi)的吸收,增加藥物的生物利用度[6].采用PEG-6000包裹法[7],有效地將酸源和二氧化碳源隔離開,解決了泡騰栓中發(fā)泡劑防治失效的問題.

將原藥和中藥泡騰栓分別對(duì)4種細(xì)菌的抑制效果進(jìn)行觀察,結(jié)果發(fā)現(xiàn),中藥泡騰栓對(duì)大腸桿菌和鏈球菌的最低抑制濃度和原藥相同,分別均為500 mg/mL和500 mg/mL,對(duì)化膿菌和擬桿菌的最低抑菌濃度有所升高,分別為500 mg/mL和250 mg/mL.因此,原藥做成泡騰栓后對(duì)其抑菌效果影響很小.經(jīng)檢驗(yàn),制備的中藥泡騰栓符合臨床用藥標(biāo)準(zhǔn),可初步用于臨床上治療奶牛子宮內(nèi)膜炎.

[1]馬振亞.中藥抗病毒抗菌作用研究[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2005:10-13.

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[M].2010版二部.

[3]鄒力家,張秀珍,張淑萍,等.滴炎凈泡騰栓的研制[J].山東醫(yī)藥工業(yè),1987(3):15.

[4]王洪海,王國卿,郭夢(mèng)堯,等.中草藥治療奶牛子宮內(nèi)膜炎研究進(jìn)展[J].中國獸醫(yī)雜志,2010,46(8):64-66.

[5]董磊,李超英.新型栓劑的研究進(jìn)展[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2008,24(3):346-353.

[6]王媛,徐寶財(cái).表面活性劑在制藥工業(yè)中的應(yīng)用[J].精細(xì)化工,2003,20(10):597-600.

[7]俞加林,劉莉,孫湘莉,等.清開靈泡騰片制備工藝的研究[J].中成藥,2001,23(8):559.

S858.23

B

0529-6005(2016)06-0111-03

2014-12-23

黑龍江省應(yīng)用技術(shù)研究與開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(GZ13B0-05);東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物普通疾病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題

潘秋亮(1991-),男,碩士,研究方向?yàn)閯?dòng)物生殖生理和生殖毒理,E-mail:931106477@qq.com

趙樹臣,E-mail:zscrichard@163.com;侯振中,E-mail: houzz_1963@163.com