實(shí)驗(yàn)獼猴細(xì)菌性痢疾的治療

王　宏,韋秋獎(jiǎng),陳智崗,江海天

(1.云南中科靈長(zhǎng)類生物醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,云南昆明650550;2.昆明亞靈生物科技有限公司,云南昆明650550)

實(shí)驗(yàn)獼猴細(xì)菌性痢疾的治療

王宏1,2,韋秋獎(jiǎng)2,陳智崗1,江海天2

(1.云南中科靈長(zhǎng)類生物醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,云南昆明650550;2.昆明亞靈生物科技有限公司,云南昆明650550)

細(xì)菌性痢疾是獼猴常見(jiàn)的一種消化道傳染病,具有很強(qiáng)的傳染性,發(fā)病快,病程短,死亡率高,若不及時(shí)采取有效的治療措施,患病獼猴將很快死亡,嚴(yán)重影響了實(shí)驗(yàn)獼猴的品質(zhì).本文通過(guò)對(duì)細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定、結(jié)合藥敏試驗(yàn)并采取積極有效的治療措施,結(jié)果表明,頭孢他啶和左氧氟沙星治療細(xì)菌性痢疾效果最佳,治愈率達(dá)到100%,諾氟沙星和環(huán)丙沙星也有一定的療效,治愈率分別達(dá)到88.89%和77.78%.本文研究對(duì)實(shí)驗(yàn)獼猴的生產(chǎn)培育具有重要的生產(chǎn)意義和科學(xué)價(jià)值.

恒河猴;志賀菌;痢疾;治療

獼猴(Macaca mulatta)作為重要的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之一,在生物醫(yī)學(xué)研究中具有極其重要的作用,隨著生命科學(xué)的快速發(fā)展,科研活動(dòng)中對(duì)實(shí)驗(yàn)獼猴的品質(zhì)要求愈來(lái)愈高.細(xì)菌性痢疾是獼猴最常見(jiàn)的一種消化道傳染病,是志賀菌屬(痢疾桿菌)引起的腸道傳染病,該病傳播迅速,病程短,死亡率高,易復(fù)發(fā),若不及時(shí)采取有效的治療措施,患病獼猴將很快死亡,嚴(yán)重影響了實(shí)驗(yàn)獼猴的品質(zhì),尤其在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,獼猴突發(fā)細(xì)菌性痢疾,將直接影響試驗(yàn)結(jié)果.因此,建立有效檢測(cè)獼猴細(xì)菌性痢疾的方法,并采取積極有效的治療措施,具有重要的生產(chǎn)意義和科學(xué)價(jià)值.

1　材料與方法

1.1患病獼猴臨床癥狀及病理表現(xiàn)獼猴細(xì)菌性痢疾臨床癥狀為腹瀉,糞便呈膿血黏液狀,精神和食欲差,患病中后期脫水現(xiàn)象明顯,皮膚松弛、彈性差,眼睛深陷.患病獼猴剖檢可發(fā)現(xiàn)病變主要在盲腸和結(jié)腸上,腸壁增厚、水腫、出血,有的出現(xiàn)潰瘍病灶(見(jiàn)中插彩版圖1A);有的腸黏膜脫落,腸內(nèi)充滿暗紅色膠胨樣內(nèi)容物(見(jiàn)中插彩版圖1B),腸系膜淋巴結(jié)充血和水腫.鏡檢發(fā)現(xiàn)患有痢疾的獼猴腸壁內(nèi)腔白細(xì)胞增多(見(jiàn)中插彩版圖1C),尤其是嗜中性粒細(xì)胞增多明顯,伴有脫落的上皮細(xì)胞.

1.2診斷試劑

1.2.1志賀菌多價(jià)診斷血清蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司生產(chǎn).

1.2.2藥敏紙片北京天壇藥物生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn).

1.2.3沙門菌-志賀菌瓊脂培養(yǎng)基(S.S.瓊脂培養(yǎng)基)杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn).

1.2.4三糖鐵瓊脂(TSI)杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn).

1.3診斷方法細(xì)菌的分離培養(yǎng)及鑒定.獲取表現(xiàn)為消化道疾病患病獼猴的新鮮糞便262份,分區(qū)劃線法在S.S.瓊脂培養(yǎng)基上接種,37℃培養(yǎng)24 h,志賀菌在S.S.培養(yǎng)基上形成無(wú)色透明、圓形、扁平或微凸起,光滑濕潤(rùn),邊緣整齊,直徑約2 mm的菌落.在生物安全柜內(nèi)用接種針挑取2～3個(gè)上述可疑菌落接種TSI培養(yǎng)基,置37℃培養(yǎng)18～ 24 h,可見(jiàn)斜面不產(chǎn)酸,底層產(chǎn)酸不產(chǎn)氣.取一片潔凈的載玻片,滴一小滴志賀菌多價(jià)診斷血清于載玻片上,用接種環(huán)取TSI培養(yǎng)基上可疑菌落和診斷血清混合,并以生理鹽水作為對(duì)照,攪拌均勻后判定結(jié)果,如果在1 min內(nèi)呈現(xiàn)明顯凝集者為陽(yáng)性,呈均勻混濁者為陰性.

1.4藥敏試驗(yàn)用棉拭子沾取混合志賀菌的菌液,均勻涂布在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上,然后用鑷子夾取藥敏紙片按2 cm距離放置在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上后輕壓,藥敏紙片包括諾氟沙星、阿莫西林、青霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、頭孢他啶、慶大霉素、頭孢唑啉和氨芐西林,將標(biāo)簽貼好后于37℃培養(yǎng)18～24 h,最后用直尺測(cè)量每一種抗生素圓盤的直徑,根據(jù)說(shuō)明書判斷抗生素敏感性.

1.5治療方案

1.5.1對(duì)患有細(xì)菌性痢疾,且脫水明顯的病猴,采用補(bǔ)液、抗生素治療為主.一般利用5%葡萄糖氯化鈉+抗生素,0.9%生理鹽水+維生素C靜脈滴注.

1.5.2對(duì)患有細(xì)菌性痢疾,處于早期且脫水不明顯的病猴,采取抗生素治療及輔助療法相結(jié)合.靜脈輸注0.9%生理鹽水+抗生素,肌肉注射維生素C注射液.

1.5.3對(duì)少數(shù)反復(fù)發(fā)病,且采取治療的患病獼猴將慢慢轉(zhuǎn)變成慢性腸炎,此類病猴需經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間的食物調(diào)理,并結(jié)合糞便培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn),視病情輕重采取適當(dāng)?shù)闹委煷胧?

2　結(jié)果

2.1糞便培養(yǎng)及鑒定結(jié)果通過(guò)對(duì)262份表現(xiàn)為消化道疾病患病猴的糞便樣本進(jìn)行分離培養(yǎng)及鑒定,檢測(cè)出患有志賀菌痢疾的病猴有38只,檢出率為14.5%.

2.2藥敏試驗(yàn)結(jié)果通過(guò)藥敏試驗(yàn),對(duì)志賀菌菌株顯示敏感的藥物有諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星和頭孢他啶,其中頭孢他啶對(duì)志賀菌菌株最敏感(敏感率為92.11%);中度敏感藥物有慶大霉素和頭孢唑啉;不敏感藥物有氨芐西林、阿莫西林和青霉素,具體結(jié)果見(jiàn)表1.

表1　志賀菌菌株藥敏試驗(yàn)

2.3治療效果根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果,對(duì)患有細(xì)菌性痢疾的病猴采用敏感藥物予以治療,結(jié)果表明,頭孢他啶和左氧氟沙星治療效果最佳,治愈率可以達(dá)到100%,治療時(shí)間持續(xù)5 d即可達(dá)到滿意效果;而諾氟沙星和環(huán)丙沙星也有一定的療效,治愈率分別達(dá)到88.89%和77.78%,治療時(shí)間需持續(xù)7 d左右.對(duì)患有志賀菌痢疾的38只病猴進(jìn)行治療分析,總治愈率達(dá)到92.11%(見(jiàn)表2).

表2　敏感抗生素的治療

3　討論

細(xì)菌性痢疾是獼猴最普遍的一種腸道疾病之一,傳播途徑從口腔進(jìn)入消化道,人類帶菌者是主要的傳播源,通過(guò)蒼蠅或蚊子等傳染給健康的獼猴,致使獼猴發(fā)病,還可造成重復(fù)感染或再感染而反復(fù)多次導(dǎo)致獼猴發(fā)病.實(shí)驗(yàn)獼猴在繁育過(guò)程中,細(xì)菌性痢疾的感染率很高,在過(guò)分擁擠和衛(wèi)生狀況差的情況下,獼猴痢疾發(fā)病率高達(dá)100%,死亡率達(dá)60%以上[1-3],因此對(duì)患病帶菌猴的診斷除早期治療以及消滅傳染源外,還應(yīng)采取切斷傳播途徑等綜合措施.對(duì)患病動(dòng)物進(jìn)行嚴(yán)格的隔離和消毒處理,防止疾病交叉感染,應(yīng)每天上午和下午對(duì)籠舍、地面、糞便等飼養(yǎng)環(huán)境進(jìn)行人工噴霧消毒,消毒處理應(yīng)持續(xù)2個(gè)星期;與此同時(shí),還應(yīng)對(duì)食物(青料、水果、膨化飼料等)徹底做好清潔衛(wèi)生以及防蠅防鼠等工作,飲用水也應(yīng)適當(dāng)投放漂白粉消毒.

通過(guò)藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,對(duì)志賀菌敏感的藥物有諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星和頭孢他啶,中度敏感的藥物有慶大霉素、頭孢唑林,而不敏感藥物有氨芐西林、阿莫西林和青霉素.唐東紅等[4]的藥敏試驗(yàn)表明,頭孢唑啉藥物對(duì)志賀菌敏感,而慶大霉素、青霉素對(duì)志賀菌不敏感.楊智勇等[5]研究發(fā)現(xiàn),環(huán)丙沙星對(duì)拉膿血便的猴子無(wú)效,而氧氟沙星對(duì)治療獼猴痢疾療效一般.這些不一致的研究結(jié)果,可能與不同的養(yǎng)殖場(chǎng)選擇不同的抗生素且長(zhǎng)期使用有關(guān).同時(shí),Goossens等[6]的研究表明,細(xì)菌暴露于抗生素的時(shí)間越長(zhǎng),其獲得耐藥性的機(jī)會(huì)就越大,趙克雷等[7]的研究也表明了耐藥基因的水平傳播和抗生素環(huán)境的選擇壓使不耐藥菌株被淘汰,從而產(chǎn)生越來(lái)越多的耐藥菌株.本文通過(guò)藥敏試驗(yàn),對(duì)患有細(xì)菌性痢疾的病猴采用對(duì)志賀菌敏感的抗生素治療,總治愈率達(dá)到92.11%,略低于唐東紅等[4]97.9%的治愈率,因此,在治療獼猴細(xì)菌性痢疾時(shí),臨床用藥結(jié)合藥敏試驗(yàn)結(jié)果來(lái)進(jìn)行藥物選擇,意義重大.本研究結(jié)果為規(guī)模化實(shí)驗(yàn)獼猴養(yǎng)殖場(chǎng)防治細(xì)菌性痢疾提供了科學(xué)依據(jù).

細(xì)菌性痢疾一般宜采取抗菌、消炎、補(bǔ)液和糾正酸堿平衡等方法給予治療,每天應(yīng)多次仔細(xì)觀察猴群的糞便、精神狀態(tài)、采食情況,一旦發(fā)現(xiàn)病猴,馬上隔離并及時(shí)采用適當(dāng)?shù)目股仂o脈輸注治療,同時(shí),消化道疾病增加維生素C的補(bǔ)充,能有效加速腸道疾病的愈合且能提高患病獼猴的免疫力,將會(huì)大大提高患病獼猴的治愈率.

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[2]Sansonetti P I.Shigella plays dangerous games[J].ASM News,1999,65(9):612-617.

[3]Philpott D J,Edgeworth J D,Sansonetti P J.The pathogenesis of Shigella flexneri infection:lessons from in vitro and in vivo stud?ies[J].Philosophical Transactions of the Royal Society of London,2000,355(1397):575-586.

[4]唐東紅,孫曉梅,匡德宣,等.實(shí)驗(yàn)恒河猴猴群暴發(fā)細(xì)菌性痢疾的治療及控制[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)雜志,2002,12(4): 229-231.

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[7]趙克雷,李旭鑫,帕哈爾定,等.圈養(yǎng)林麝膿腫病病原菌分離鑒定及藥敏分析[J].四川動(dòng)物,2011,30(4):522-526.

Bacillary dysentery treatment of laboratory macaques

WANG Hong1,2,WEI Qiu-jiang2,CHEN Zhi-gang1,JIANG Hai-tian2
(1.Yunnan Key Laboratory of Primate Biomedical Research,Kunming 650550,China; 2.Kunming Biomed International,Kunming 650550,China)

Bacillary dysentery is one of the common digestive tract infectious diseases of rhesus monkey,which has a strong in?fectivity,fast morbidity,short disease course,and high mortality.Macaques will soon die without timely effective treatment mea?sures,and bacillary dysentery seriously affects the quality of experimental macaques.In this study,using the separation,culturing and identification of bacteria,combining with the antibiotics sensitive experiment and taking effective treatment measures,we showed that Ceftazidime and Levofloxacin were the best efficiency treatment,and treatment rate was 100%,Norfloxacin and Cipro?floxacin were definitly efficiency,and treatment rate are 88.89%and 77.78%,respectively.

Rhesus monkey;Shigella;Dysentery;Treatment

WANG Hong

S858.9

A

0529-6005(2016)06-0097-02

2015-12-10

云南省技術(shù)創(chuàng)新人才項(xiàng)目(2014HB090);昆明市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014-04-A-S-02-3074);云南省技術(shù)創(chuàng)新項(xiàng)目(2015XA33)

王宏(1975-),男,副研究員,碩士,研究方向?yàn)閷?shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)與人類疾病動(dòng)物模型研究,E-mail:wangh@kbimed.com