復方氟苯尼考注射液在豬體內(nèi)的藥代動力學研究

張志娟,周丹,錢民怡,朱沛,李道穩(wěn),劉曉東,陳婷婷,湯樹生(中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院,北京海淀100193)

復方氟苯尼考注射液在豬體內(nèi)的藥代動力學研究

張志娟,周丹,錢民怡,朱沛,李道穩(wěn),劉曉東,陳婷婷,湯樹生
(中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院,北京海淀100193)

本文對自制氟苯尼考(FF)和氟尼辛葡甲胺(FM)復方制劑在豬體內(nèi)的藥代動力學進行了研究.試驗選用健康斷奶仔豬6頭(30±5 kg),采用三周期交叉設(shè)計,FF給藥劑量均為20 mg/kg體重,FM給藥劑量均為2 mg/kg體重(以氟尼辛計),同一頭豬不同給藥的時間間隔為2周,給藥途徑均為頸部肌肉注射.試驗結(jié)果顯示,自制復方制劑與兩種進口市售單方制劑在動物體內(nèi)的藥代過程基本一致,氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺相對生物利用度分別為99.89%和108.78%,表明本復方注射液中兩種藥物的藥效均與國外進口單方產(chǎn)品相當,一次給藥即可獲得兩種進口單方制劑同時給藥的良好療效,且具有方便臨床給藥、減少動物應激的顯著優(yōu)點.

豬;藥代動力學;氟苯尼考;氟尼辛葡甲胺

氟苯尼考(Florfenicol,FF)為新一代氯霉素類獸醫(yī)專用抗生素,具有抗菌譜廣、吸收良好、體內(nèi)分布廣、耐藥性發(fā)生率低、體內(nèi)殘留量較低的特點,對多種革蘭陽性菌和陰性菌及支原體等均有較強活性,是我國獸醫(yī)臨床用于治療畜禽呼吸道疾病的首選藥之一[1-3].然而,由于近年來畜禽呼吸道疾病大都呈多病原混合感染的趨勢,常伴有體溫升高、炎癥及肌肉疼痛等癥狀,而氟苯尼考單方制劑有效抑殺呼吸道病原菌后,無法清除死亡細菌釋放出的內(nèi)毒素,亦無抗炎鎮(zhèn)痛作用.因此,氟苯尼考單方制劑對當前畜禽呼吸道疾病的療效仍不夠理想[4].氟尼辛葡甲胺(Flunixin me?glumine,FM)是一種動物專用的非麻醉、非類固醇類的解熱消炎鎮(zhèn)痛藥物,通過抑制環(huán)氧酶而阻止前列腺素的合成,減少炎性病變介質(zhì)的繁殖來發(fā)揮抗炎作用,具有良好的抗炎鎮(zhèn)痛和抗內(nèi)毒素作用[5-7].因此,本實驗室研制了該復方注射液,并對其在豬體內(nèi)的藥物代謝動力學進行了研究.

1　材料與方法

1.1藥品與試劑氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺復方注射液(FF/FM復方注射液),FF 30%,FM 5.5%,本實驗室自制;Nuflor(氟苯尼考注射液),FF 30%,先靈葆雅(美國)動物保健公司;Finadyne(氟尼辛葡甲胺注射液),FM 5%,先靈葆雅(美國)動物保健公司; FF對照品,含量98%,中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;氟尼辛葡甲胺對照品,含量99%,中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;甲醇、乙腈,色譜級,美國Fisher chemical公司;甲酸,色譜級,美國Fisher chemical公司;其他試劑均為分析純.

1.2主要儀器高效液相色譜儀(2695分離系統(tǒng),2996二極管陣列檢測器)美國Waters公司; XBridge Shield RP C-18柱(250X4.6 mm,5 μm),美國Waters公司;N-EVAPTM111型氮吹儀,美國Organomation Associates公司;WH-I型微型漩渦混合儀,北方同正生物技術(shù)發(fā)展有限公司;MI?KR022R型臺式高速冷凍離心機,德國Hettich公司;SHK-99-II臺式空氣恒溫搖床,北方同正生物技術(shù)發(fā)展有限公司.

1.3試驗動物及給藥方案試驗選用健康斷奶仔豬6頭,體重30±5 kg,于中國農(nóng)業(yè)大學動物房飼養(yǎng),給藥前飼喂不含藥物的全價飼料2周以適應環(huán)境.試驗采用三周期交叉設(shè)計,FF給藥劑量為20 mg/kg體重,FM給藥劑量為2 mg/kg體重(以氟尼辛計),同一頭豬不同給藥方式的時間間隔為2周.動物隨機分成A、B、C 3組,頸部肌肉注射,具體給藥方式見表1.

表1　三周期交叉設(shè)計

1.4樣品采集復方注射液組于給藥前和給藥后0.083、0.167、0.25、0.33、0.5、0.67、0.75、0.83、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、24、36、48、72、96 h從豬的頸靜脈采血8 mL;氟苯尼考注射液組于給藥前和給藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、24、36、48、72、96 h頸靜脈采血4 mL;氟尼辛葡甲胺注射液組于給藥前和給藥后0.083、0.167、0.25、0.33、0.5、0.67、0.83、1、2、4、6、8、12、24、36、48 h頸靜脈采血4 mL,采好的血樣放入預先用肝素鈉處理好的離心管中,3 000 r/min離心10 min后吸取上清,分裝為3管,置于-20℃保存.

1.5血漿樣品處理

1.5.1氟苯尼考精密量取0.5 mL血漿,加入4 mL乙酸乙酯,渦動混勻2 min,在搖床上以250 r/min水平搖蕩15 min,充分提取藥物.然后以0℃,4 500 r/min離心10 min,轉(zhuǎn)移上清液至另一離心管,重復提取和離心一次,合并上清液.將合并后的上清液用45℃氮氣吹干,然后用0.5 mL流動相復溶,漩渦2 min混勻溶解,0.22 μm微孔濾膜過濾,取50 μL進HPLC檢測.

1.5.2氟尼辛葡甲胺精密量取血漿樣品400 μL,依次加入乙腈4 mL、1 mol/L鹽酸40 μL,渦動提取2 min后,10 000 r/min(0℃)離心10 min,轉(zhuǎn)移上清液至另一離心管,重復提取和離心一次,合并上清液.將合并后的上清液用40℃氮氣吹干,400 μL初始流動相復溶殘留物后,漩渦2 min,0.22 μm微孔濾膜過濾,取50 μL進HPLC檢測.

1.6色譜條件

1.6.1氟苯尼考流動相:乙腈:水=30∶70(V∶V);流速:1 mL/min;檢測波長:224 nm;進樣量: 50 μL;色譜柱:XBridge Shield RP C-18柱(250 X 4.6 mm,5 μm);HPLC系統(tǒng):Waters 600-717-2487系統(tǒng);柱溫:30℃±5℃.

1.6.2氟尼辛葡甲胺流動相:0.2%甲酸水:乙腈=30∶70(V∶V);流速:1 mL/min;檢測波長:276 nm;進樣量:50 μL;色譜柱:XBridge Shield RP C-18柱(250X4.6 mm,5 μm);HPLC系統(tǒng):Waters 2695分離系統(tǒng);柱溫:30℃±5℃.

1.7標準曲線

1.7.1氟苯尼考標準曲線配制FF濃度分別為18,10,5,2.5,1,0.5,0.1 μg/mL的血漿添加樣品,按照1.5.1處理方法處理后上樣,記錄色譜圖和峰面積.

1.7.2氟尼辛葡甲胺標準曲線配制FM濃度分別為10,5,2.5,1,0.5,0.1 μg/mL的血漿添加樣品,按照1.5.2處理方法處理后上樣,記錄色譜圖和峰面積.

1.8數(shù)據(jù)處理對獲得的FF和FM血漿藥物濃度-時間數(shù)據(jù)用Phoenix WinNonlin 6.1藥代動力學軟件進行分析,并計算主要的藥動學參數(shù),然后用SPSS軟件的單因素方差分析程序?qū)λ幋鷧?shù)進行差異顯著性分析.

2　結(jié)果

2.1檢測方法

2.1.1氟苯尼考檢測方法FF在濃度為0.1～18 μg/mL范圍內(nèi)標準曲線線性關(guān)系良好(r=0.9996);回收率為92.62%～101.63%;日內(nèi)變異系數(shù)為1.97%～5.49%,日間變異系數(shù)為1.86%～4.29%;檢測限為0.05 μg/mL,定量限為0.1 μg/mL.

2.1.2氟尼辛葡甲胺檢測方法FM在濃度為0.1～ 10 μg/mL范圍內(nèi)標準曲線線性關(guān)系良好(r=0.9999);回收率為99.56%～100.31%;日內(nèi)變異系數(shù)為2.17%～5.35%,日間變異系數(shù)3.25%～4.87%;檢測限為0.05 μg/mL,定量限為0.1 μg/mL.

2.2藥代動力學試驗

2.2.1血漿測定結(jié)果豬頸部肌肉注射FF/FM復方注射液和FF單方注射液后的FF血藥濃度及藥時曲線圖見圖1;豬頸部肌肉注射FF/FM復方注射液和FM單方注射液后的FM血藥濃度及藥時曲線圖見圖2.從圖1和圖2可以看出,本實驗室研制的FF/FM復方注射液的FF和FM均與其單方進口制劑的相應藥物在豬體內(nèi)的藥物動力學行為表現(xiàn)極為相似.

圖1　豬頸部肌肉注射FF/FM復方注射液和FF單方注射液后的FF血藥濃度(n=6)

圖2　豬頸部肌肉注射FF/FM復方注射液和FM單方注射液后的FM血藥濃度(n=6)

2.2.2藥代動力學參數(shù)將試驗所得的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)用Phoenix WinNonlin 6.1藥代動力學軟件處理,兩藥的主要藥動學參數(shù)及其差異顯著性檢驗結(jié)果見表2和表3.從表2和表3可以看出,本實驗室研制的FF/FM復方注射液的FF和FM與其單方進口制劑相應藥物的主要藥代動力參數(shù)均無顯著性差異,其中FF和FM的相對生物利用度分別為99.89%和108.78%.

表2　豬頸部肌肉注射FF/FM復方注射液和單方注射液后的FF的藥物動力學參數(shù)(n=6,±S)

表3　豬頸部肌肉注射FF/FM復方注射液和單方注射液后的FM的藥物動力學參數(shù)(n=6,±,S)

3　討論

3.1檢測方法的建立本試驗以《中華人民共和國獸藥典》(2010年版)為基礎(chǔ),查閱國內(nèi)外相關(guān)文獻[8-15]后,建立了檢測血漿中FF和FM含量的檢測方法,所建方法較好地實現(xiàn)了藥峰與雜質(zhì)峰的良好分離,空白血漿對藥物出峰無干擾,同時,所建方法能良好滿足分離度、線性關(guān)系、回收率、變異系數(shù)等要求,且具有快速、方便、穩(wěn)定的特點.

關(guān)于血漿中FM的提取方法,大多文獻[11-14]用鹽酸和乙腈或磷酸鹽緩沖液和乙腈等作為蛋白沉淀劑.考慮到FM的弱酸性,本研究選用鹽酸和乙腈作為提取液,并比較了鹽酸和乙腈的加入順序?qū)μ崛⌒实挠绊?結(jié)果表明,鹽酸和乙腈加入血漿的先后順序雖對FM的提取效率顯著影響,但先加入鹽酸可致血漿產(chǎn)生大量炭,導致上機檢測樣品達不到色譜級要求,因此提取時應先加乙腈,再加鹽酸.此外,提取時如只提取1次則回收率仍達不到要求,本研究嘗試了用同樣提取液提取兩次并合并提取液的方法,最終回收率達到要求.

3.2藥動學先靈葆雅(美國)動物保健公司生產(chǎn)的Nuflor是治療畜禽呼吸道疾病療效較好的單方氟苯尼考注射液[3,16],該公司生產(chǎn)的氟尼辛葡甲胺單方注射液(Finadyne)亦因其抗炎鎮(zhèn)痛和抗內(nèi)毒素作用良好在國內(nèi)外獸醫(yī)臨床獲得廣泛運用[17],因此,本文選用上述兩藥作為本實驗室自制FF/FM復方注射液的對照藥物.本文的藥代動力學試驗結(jié)果顯示,肌肉注射本實驗室自制FF/FM復方注射液以及注射Nuflor和Finadyne單方注射液后,本實驗室自制FF/FM復方注射液的FF和FM與其單方進口制劑相應藥物的半衰期、達峰時間、達峰濃度、藥時曲線下面積等主要藥代動力參數(shù)均無顯著性差異,其中FF和FM的相對生物利用度分別為99.89%和108.78%,即自制復方制劑中氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺均與市售進口相應單方制劑在動物體內(nèi)的藥代過程基本一致,表明本復方注射液在方便臨床給藥、減少動物應激的同時,良好地保持了氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺的藥效,一次給藥即可獲得兩種進口單方制劑同時給藥的良好療效.

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Pharmacokinetic study on a florfenicol/flunixin meglum ine com pound injection in sw ine

ZHANG Zhi-juan,ZHOU Dan,QIAN Min-yi,ZHU Pei,LI Dao-wen, LIU Xiao-dong,CHEN Ting-ting,TANG Shu-sheng
(College of Veterinary Medicine,China Agricultural University,Beijing 100193,China)

The pharmacokinetics of the florfenicol/flunixin meglumine(FF/FM)compound injection prepared in our lab was studied in pigs in this paper.Six healthy pigs(30±5 kg)were used in this experiment with three cycles of cross.The dose of FF was 20 mg/kg while FM was 2 mg/kg(by flunixin).The animals were administered by IM in neck with a two-week-cycle.The result showed that,for both FF and FM,the pharmacokinetic parameters of the FF/FM compound injection were similar with their single prescription preparation(Nuflor and Finadyne).The relative bioavailability was 99.89%for FF and 108.78%for FM.Therefore, the FF/FM compound injection prepared in our lab exhibit the excellent effect of both drugs while it is more convenient to be used in practice and induces less animal stress.

swine;pharmacokinetics;florfenicol;flunixin meglumine

TANG Shu-sheng

S858.28

A

0529-6005(2016)02-0102-04

2014-09-09

公益性行業(yè)科研專項"新型動物專用藥物的研制與應用"(201303038)

張志娟(1989-),女,碩士,主要從事獸藥新制劑研究,E-mail:zhangzhijuan369@163.com

湯樹生,E-mail:tssfj@163.com