薰衣草葉子化學成分分析與抗氧化活性*

李紫薇, 張　藝，歐陽艷，李雙雙，劉　沖

(伊犁師范學院新疆自治區教育廳普通高等學校重點實驗室，新疆　伊寧　835000)

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薰衣草葉子化學成分分析與抗氧化活性*

李紫薇, 張藝，歐陽艷，李雙雙，劉沖

(伊犁師范學院新疆自治區教育廳普通高等學校重點實驗室，新疆伊寧835000)

薰衣草葉；化學成分；抗氧化活性

1　實　驗

1.1材料與儀器

石油醚(AR)，天津市北聯精細化學品開發有限公司；乙酸乙酯(AR)，成都市科龍化工試劑廠；正丁醇(AR)，天津市福晨化學試劑廠；無水乙醇、甲醇(AR)，天津市科盟化工工貿有限公司；氯仿(AR)，天津市北聯精細化學品開發有限公司；1，1-二苯基-2-2-苦基肼自由基(AR)，梯希愛上海化成工業發展有限公司；ABTS(AR)，上海金穗生物科技有限公司；抗壞血酸(AR)，天津光友精細化工研究所；維生素E(AR),北京鼎國生物技術有限公司。

UV-2500紫外可見分光光度計，日本島津公司；VOS-60A冷凍干燥箱，施都凱儀器設備有限公；KQ-300GVDV三頻恒溫數控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；RE-52系列旋轉蒸發儀，上海亞榮生化儀器廠。

實驗用去離子水。薰衣草葉產自新疆伊犁，薰衣草葉經陰干粉碎，過60目篩，冷藏備用。

1.2實驗方法

1.2.1薰衣草葉提取物化學成分定性實驗

按照天然藥物化學成分的系統預實驗方法[5]設計流程，以去離子水、無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯為溶劑，得薰衣草葉不同溶劑提取物，對伊犁產薰衣草葉子中的化學成分進行初步定性研究[6-9]，每個檢測做4個重復。

表1　提取液定性實驗

1.2.2抗氧化活性實驗的提取物制備

準確稱取薰衣草葉粉末80.0000 g，在超聲波輔助下用體積分數95%乙醇及體積分數60%乙醇依次各提取2次，合并提取液，真空過濾，減壓濃縮(40 ℃)得到浸膏，用去離子水定容至100 mL，然后依次分別用100 mL的石油醚萃取(6次)、乙酸乙酯萃取(3次)、正丁醇萃取(3次)，剩余部分為水層，分別減壓濃縮得到浸膏，冷凍干燥后得石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物。配制適宜濃度供試液，冷藏保存備用。

1.2.3清除DPPH·實驗

依次移取10.00 mg/mL石油醚提取物試液0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、0.90、1.00 mL分別置10 mL比色管中，用無水乙醇定容至刻度線，依次得到0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、0.90、1.00 mg/mL溶液。按上述方法操作，配制相同系列濃度的乙酸乙酯提取物溶液和正定醇提取物溶液。參考文獻方法[3]，分別測定不同濃度提取物、VC對DPPH·清除能力。每個檢測做4個重復，取其平均值。

1.2.4清除ABTS+·實驗

分別配制0.03、0.05、0.08、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70 mg/mL不同溶劑提取物溶液及相應質量濃度的VC、VE溶液。

參照Ozcan·Erel提出的用H2O2/ABTS+·/醋酸鹽緩沖溶液體系[10]。用pH 3.6醋酸鈉鹽緩沖液將278 μL過氧化氫稀釋到1000 mL(2 mmol/L)；以該過氧化氫溶液為溶劑配制10 mmol/L ABTS+·溶液，室溫放置1 h，溶液呈藍綠色，冷藏備用[11]。取一定體積10 mmol/L的ABTS+·溶液，用醋酸鈉鹽緩沖液稀釋到吸光度為0.70±0.02(734 nm)。取1.00 mL樣品溶液，加入4.00 mL ABTS+·溶液，準確震蕩30 s，在30 ℃下測定6 min內反應溶液吸光度。計算清除率[7]。每個檢測做4個重復，取其平均值。

1.2.5清除·OH實驗

分別配制0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、0.90、1.00 mg/mL不同溶劑提取物溶液及相應質量濃度的VC溶液。取4.50 mmol/L FeSO4溶液1.00 mL，加入1.00 mL 4.50 mmol/L水楊酸-乙醇溶液1.00 mL、提取物溶液1.00 mL、1.00 mL 4.40 mmol/L H2O2。37 ℃水浴中反應0.5 h，在 510 nm 處測定吸光值，計算清除率[3]。每個檢測做4個重復，取其平均值。

取3.00 mL Tris-HCl緩沖液(pH 8.2)，加入0.50 mL不同濃度供試液，30 ℃水浴保溫20 min，加入7 mmol/L鄰苯三酚溶液3.00 mL，反應4 min后加入1.00 mL濃HCl終止反應，420 nm 處測吸光度值，計算清除率[3]。每個檢測做4個重復，取其平均值。

1.2.7FRAP還原法實驗

分別配制0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、0.90、1.00 mg/mL不同溶劑提取物溶液及相應質量濃度的VC溶液。移取提取物溶液及VC溶液各2.50 mL，分別加入0.20 mol/L磷酸鈉緩沖溶液(pH6.6)2.50 mL和10.00 mg/mL鐵氰化鉀溶液2.50 mL。50 ℃保溫20 min，再加入0.10 g/mL 2.50 mL三氯乙酸溶液，離心10 min(650 r/min)。移取上層溶液5.00 mL，分別加入5.00 mL去離子水和1 mg/mL氯化鐵溶液1.00 mL，混合均勻，在700 nm處測定吸光度。每個檢測做4個重復，取其平均值。

2　結果與討論

2.1薰衣草葉化學成分定性實驗

由實驗結果可知，伊犁產薰衣草葉子中含有多糖、有機酸、鞣質、酚類、甾體、萜類、香豆素、內酯類、黃酮類化合物及揮發油等成分。

2.2提取物對DPPH·的清除作用

在實驗質量濃度范圍內，不同溶劑提取物都表現出較強的抗氧化活性，其對DPPH·的清除作用隨提取物的濃度增大而增大。由圖2可知，當濃度為1.00 mg/mL時，薰衣草葉不同溶劑提取物DPPH·的清除作用的大小順序為：VC≈乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物>石油醚提取物≈水提取物。即乙酸乙酯提取物所表現的DPPH·清除效果最好，相當于VC清除能力的99.56%，水提取物的清除率相當于VC的84.45%。

圖2　提取物對DPPH·的清除作用

2.3提取物對ABTS+·的清除作用

在抗氧化物質的作用下，ABTS自由基陽離子被部分清除，綠色逐漸減弱，溶液吸光度降低。由圖3可知，當提取物濃度為0.70 mg/mL時，薰衣草葉子的不同溶劑提取物對ABTS+·清除能力大小順序為：VE>乙酸乙酯提取物>VC≈水提取物>正丁醇提取物>石油醚提取物。即乙酸乙酯提取物所表現的ABTS+·清清除率相當于VE的97.85%，石油醚提取物的清除率相當于VE的55.71%。

圖3　提取物對ABTS+·的清除作用

2.4提取物對·OH的清除作用

羥基自由基是生物細胞內反應活性最強的氧族自由基。實驗采用水楊酸競爭捕捉自由基的方式進行測定。由圖4可知，當提取物濃度為1.00 mg/mL時，薰衣草葉不同溶劑提取物對·OH的清除作用的大小順序為：VC>乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物>石油醚提取物>水提取物。乙酸乙酯提取物對羥自由基清除能力最強，相當于等濃度VC清除作用的76.76%。水提取物的清除率相當于VC的55.68%。

圖4　提取物對·OH的清除作用

圖5　提取物對·的清除作用

2.6提取物的還原能力

還原能力是表征物質在氧化還原反應中給出電子自身發生氧化的能力。實驗中，采用三價鐵離子還原法觀察物質的還原能力，吸光值越大，說明樣品溶液的還原能力越強。由圖6可知，在實驗質量濃度范圍內，不同溶劑提取物都均表現出一定的還原能力，但各部分均弱于等濃度VC溶液。當濃度為1.00 mg/mL時，薰衣草葉子不同溶劑提取物還原能力的大小順序為： VC>乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物>水提取物>石油醚提取物。此時乙酸乙酯提取物的還原能力相當于VC還原能力的28.13%，正丁醇提取物與之接近，石油醚提取物所表現的還原能力最弱，相當于VC還原能力的10.80%。

圖6　提取物的還原能力

3　結　論

[1]中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準維吾爾藥分冊[M].烏魯木齊:新疆科技衛生出版社,1998:112.

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Chemical Composition and Antioxidant Activity of Lavender Leaves*

LIZi-wei,ZHANGYi,OUYANGYan,LIShuang-shuang,LIUChong

(Key Laboratory at Universities of Education Department of Xinjiang Uygur Autonomous Region, Yili Normal University, Xinjiang Yining 835000, China)

lavender leaves; chemical composition; antioxidant activity

新疆維吾爾自治區教育廳普通高等學校“天然產物化學與應用重點實驗室”重點開放課題(No.2013YSHXZD02)。

李紫薇(1970-)，女，副教授，主要從事天然產物的應用研究和環境分析。

O652

A

1001-9677(2016)010-0064-04