姜科植物益智兒茶素含量測定分析研究*

田建平，胡遠艷，王俊芳

(1 海南醫學院藥學院，海南　海口　571199；2 海南大學熱帶生物資源教育部重點實驗室，

海南　海口　570228；3 海南醫學院藥學院本科生，海南　海口　571199)

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姜科植物益智兒茶素含量測定分析研究*

田建平1，胡遠艷2，王俊芳3

(1 海南醫學院藥學院，海南海口571199；2 海南大學熱帶生物資源教育部重點實驗室，

海南海口570228；3 海南醫學院藥學院本科生，海南海口571199)

對益智不同部位和儲藏年份中兒茶素含量進行了研究。利用超聲提取和紫外分光光度法，在檢測波長280 nm處測定樣品吸光度，計算兒茶素含量。結果表明：提取兒茶素最適宜的條件為80%乙醇、1:10料液比，超聲提取時間40 min；平均加樣回收率為92.5%，RSD=0.074%(n=5); 益智不同部位的兒茶素含量依次為種子(0.50%)>葉(0.49%)>莖(0.21%)>果皮(0.06%)；不同儲藏年份的益智果實兒茶素含量依次為2014年產(0.48%)>2013年產(0.46%)>2012年產(0.36%)。益智葉為一類值得開發的藥用資源；同時應大力改善儲藏條件，以減少益智有效成分含量的損失。

益智；兒茶素；含量測定

四大南藥之一的益智仁源于姜科 (Zingiberaceae) 山姜屬植物益智(AlpiniaoxyphyllaMiq．) 的干燥成熟果實，具有暖腎固精、溫脾止瀉等重要作用。 益智植物主要分布于海南和廣東，常生長于林下陰濕環境，其中海南是益智的主產地[1]。 益智的化學成分種類復雜，至今研究較多的種類主要有揮發油、二芳基庚烷類、倍半萜類、黃酮、甾體和有機酸、酚類等多種成分[2-4]。但益智所含兒茶素的化學成分含量至今未見文獻報道。兒茶素作為一種酚類物質，具有防治心血管疾病、抗衰老、預防癌癥、抗菌等多種功能，因此是一種重要的生物活性物質,在食品，藥品和化學工業等方面應用非常廣泛。鑒于兒茶素在醫藥方面的重要性，因此有必要研究分析兒茶素在益智中的含量，同時通過比較益智植物不同部位兒茶素的含量及不同儲藏時期益智仁中兒茶素含量的差異，為重要南藥益智的適宜開發、倉儲保管和可持續性利用提供科學依據。

1　儀器、試劑與材料

1.1儀器

粉碎器；電子分析天平；超聲儀；R-200旋轉蒸發儀，德國Büchi；干燥箱；750S紫外分光光度儀，Perkin Elmer Spectrometer Lambda。

1.2試劑

兒茶素對照品(中國食品藥品檢定研究院提供，110877-201203)。其他試劑均為國產市售分析純。

1.3材料

益智仁，分三年(2012年7月至2014年7月)購買，常規儲存，產區均為海南屯昌， 同時將2014年產益智仁分別解剖為種子、果皮，將海南屯昌產的益智植物的莖和葉分別采集，自然風干后在50 ℃干燥箱中干燥至恒重，粉碎，備用。

2　方　法

2.1供試品溶液的制備

采用超聲法提取益智中兒茶素，取益智植物各部位和不同貯藏年份的益智仁樣品適量，粉碎40目過篩，每樣品精密稱取5.00 g，放入具塞瓶中，加入80%乙醇150 mL，在70 ℃超聲儀中超聲提取30 min，提取三次。趁熱離心，收集上清液，旋轉蒸發儀回收上清液中的乙醇，溫度50 ℃，至無醇味后冷卻至室溫，收集濃縮液置250 mL 量瓶中，用蒸餾水定容后，搖勻，作為供試品溶液，備用。

2.2對照品溶液的制備

準確稱取干燥至恒重的4.00 mg兒茶素標準品作為對照品，用80%乙醇溶解并定容于25 mL容量瓶中，得0.16 mg/mL 的對照品貯備液。

2.3空白對照品溶液

以80%乙醇做空白對照品溶液。

2.4方法學考察

2.4.1測定波長的選擇

精密量取兒茶索對照品溶液2.0 mL于10 mL容量瓶中，用80%乙醇定容。用80%乙醇作對照，于紫外分光光度計上在200～600 nm波長范用內進行掃描，確定最大吸收波長。

2.4.2線性關系考察

分別精密吸取0.16 mg/mL的兒茶素對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL置于10 mL容量瓶中，用80%乙醇定容，搖勻，以80%乙醇作對照，分別測定各對照品溶液的吸光度。以兒茶素對照品濃度(X)為橫坐標，吸光度(Y)為縱坐標繪制標準曲線，考察線性關系。

2.4.3穩定性試驗

取同一供試品溶液，分別在常溫下于第0、2、4、6、8、12、24 h后測定吸光度，計算吸光度相對標準偏差(RSD)值。

2.4.4精密度試驗

精密吸取兒茶索對照品溶液3.0 mL于10 mL容量瓶中，用80%乙醇定容，測定其吸光度值，重復5次，計算吸光度RSD值。

2.4.5加樣回收率試驗

采用加樣回收法。精密量取5份已知濃度的兒茶素提取液5.0 mL，分3次注入已知濃度的兒茶素對照品溶液，搖勻，測定吸光度，計算回收率及RSD值。

2.4.6正交試驗

表1　正交試驗因素水平設計

在單因素試驗的基礎上，以兒茶素含量為指標，設計三因素三水平的正交試驗優化提取工藝(表 1)，試驗條件為：超聲波提取，每組試驗超聲功率為240 W，提取溫度為30 ℃。

2.5兒茶素含量測定

準確稱取不同部位和年份的益智樣品粗粉，按“2.1”項下方法分別配制成供試品溶液，測定其吸光度，重復三次，計算兒茶素的含量。

3　結　果

3.1方法學考察結果

3.1.1檢測波長

結果表明，樣品在280 nm波長處有最大吸收，因此確定檢測波長為280 nm。

3.1.2線性關系

根據線性關系考察結果，得到線性回歸方程：y=25.696x-0.0242，相關系數r=0.9995。結果表明兒茶素對照品溶液在0.016～0.096 mg/mL濃度范圍內，吸光度與濃度呈良好的線性關系(圖1)。

圖1　兒茶素標準曲線

3.1.3穩定性

吸光度RSD值為1.2%，表明樣品在24 h內穩定。

3.1.4精密度

6次測定的吸光度分別為1.1872、1.1864、1.1855、1.1867、1.1846、1.1865，RSD值為0.079%(n=6)，表明方法精密度良好。

3.1.5回收率

結果表明，平均加樣回收率為92.5%，RSD值為0.074%(n=5)。

3.1.6正交試驗結果

表2　正交試驗結果

三因素及三水平正交試驗及正交試驗結果見表2所示， 由R可看出乙醇濃度的影響最大，料液比與提取時間的影響較小，最佳提取工藝為80%的乙醇，1:10料液比, 提取時間40 min。

3.2兒茶素含量測定

不同部位和不同儲藏年份的益智中兒茶素平均含量見表3所示。

表3　不同部位和不同儲藏年份的益智中兒茶素平均含量

4　分析與討論

4.1益智植物不同部位中兒茶素含量比較

本研究表明，在益智植物中葉所含有的兒茶素含量較高，與藥用部位果實的含量差別不大，但益智植物葉與果實的生物量相比較，葉顯著要大。因此益智葉是一種不容忽視的可開發的有用資源。就益智果皮和種子中所含兒茶素而言，兒茶素主要存在于種子中，種皮中兒茶素的含量非常低,因此傳統上益智仁去殼使用有其科學性。

4.2不同儲藏年份的益智仁兒茶素含量比較

由于不同儲藏年份的中藥隨著貯藏年份的增加，其有效成分含量將持續下降。有關益智主要成分揮發油的研究證實了這一結論[5]。本研究考察了3年中益智仁所含兒茶素含量的變化。本研究也證明了上述觀點，在常規儲藏條件下，益智仁所含兒茶素的含量變化將隨儲藏年份的增加將顯著減少，因此如何做好倉儲工作，降低藥材質量的損耗是一個值得大力研究的課題。

[1]廣東省植物研究所編. 海南植物志(第四卷)[M].北京:科學出版社,1977:98.

[2]羅秀珍,于競光,徐麗珍,等.中藥益智化學成分的研究[J].中國中藥雜志, 2001,26(4): 262-263.

[3]李洪福,譚銀豐,王勇,等.益智莖葉中黃酮類化學成分的研究[J].天然產物研究與開發，2014,26(7):1038-1042.

[4]李洪福,譚銀豐,王勇,等.海南益智莖葉中有機酸類化學成分[J].中國實驗方劑學雜志, 2014, 20(6):96-99.

[5]易美華,肖紅,梁振益.益智仁、葉、莖揮發油化學成分的對比研究[J].中國熱帶醫學,2004(4):339-342.

Study on Determination of The Content of Catechin inAlpiniaoxyphylla*

TIANJian-ping1,HUYuan-yan2,WANGJun-fang3

(1 School of Pharmaceutical Sciences, Hainan Medical University, Hainan Haikou 571199;2 Key Laboratory for Tropical Biological Resources,MOE, Hainan University,Hainan Haikou 570228;3 Undergraduate of School of Pharmaceutical Sciences,Hainan Medical University,Hainan Haikou 571199,China)

The content of Catechin in different parts ofAlpiniaoxyphyllaand the content of the Catechin in different storage years of fruit ofA.oxyphyllawere studied. Ultrasonic extraction and ultraviolet spectrophotometric methods were used, and detection wavelength was in 280 nm.Results showed that the most suitable conditions were 80% ethanol, 1:10 ratio, 40 min of ultrasonic extraction time, the average recovery rate was 92.5%, RSD=0.074% (n=5). The content of catechin in different parts ofA.oxyphyllawas seed (0.50%)>leaf(0.49%)>stem (0.21%)> pericarp(0.06%), and the content of fruit in different storage years was 2014 (0.48%)>2013(0.46%)>2012(0.36%). Leaf ofA.oxyphyllawas a kind of medicinal resources worth developing, and the storage conditions should be improved, so as to reduce the loss of the content of the effective components of fruit ofA.oxyphylla.

Alpiniaoxyphylla; Catechin; content determination

海南醫學院科研培育基金(HY2012-024)。

田建平(1972-)，男，副教授，主要從事生藥學研究。

R931.6

A

1001-9677(2016)05-0149-03