鹽酸倍他司汀片加熱降解雜質的定性檢測

陳　紅，朱　蓉，李　欣，謝　莉，張姮婕

(成都市食品藥品檢驗研究院， 四川　成都　610045)

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鹽酸倍他司汀片加熱降解雜質的定性檢測

陳紅，朱蓉，李欣，謝莉，張姮婕

(成都市食品藥品檢驗研究院， 四川成都610045)

建立了鹽酸倍他司汀片加熱降解雜質的定性檢測方法。樣品粉末105 ℃下加熱4 h后，用流動相溶解，濾過后采用二維液質聯用(2D-LCMS-IT-TOF)雜質鑒定系統，對鹽酸倍他司汀熱降解雜質進行定性檢查。結果表明：熱降解雜質1和雜質2在質譜上沒有響應。通過樣品信息和多級高分辨質譜結果推斷出雜質 3 可能的分子式，并推導其可能的質譜裂解規律，給出其可能的結構式。結論 本法準確、簡便、快速，可用于鹽酸倍他司汀熱降解雜質定性檢查。

鹽酸倍他司汀；熱降解雜質；定性檢測

鹽酸倍他司汀片(N-甲基-2-吡啶乙胺二鹽酸鹽，Betahistine Hydrochloride Tablets)主要用于美尼爾氏綜合癥，血管性頭痛及腦動脈硬化，并可用于治療急性缺血性腦血管疾病，如腦血栓、腦栓塞、一過性腦供血不足等；高血壓所致直立性眩暈、耳鳴等亦有效[1-3]，已列入國家基本藥物目錄。鹽酸倍他司汀片質量標準收載于英國藥典2013版[4]、中國藥典2010年版二部[5]及國家藥品標準等，根據藥品評價抽驗質量分析指導原則，2013年度對鹽酸倍他司汀片按現行標準檢驗，合格率為100%。在研究中發現多批樣品未知雜質含量高，現行標準收載的有關物質檢查項，不能全面反應藥品質量，查閱文獻[6-8]，建立了二維液質聯用方法對熱降解樣品中雜質檢查，對部分未知雜質定性測定。

1　實　驗

1.1儀器與試劑

包括島津公司提供的LC-20A液相色譜儀，二極管陣列檢測器(SPD-M20A)，高壓流路選擇閥(FCV-12AH×3)，色譜柱切換閥(FCV-14AH×2)，LCMS-IT-TOF(離子阱-飛行時間質譜)和 LCMSsolution Ver.3.60(工作站)。

鹽酸倍他司汀對照由中國藥品生物制品檢定所提供，編號：100265-200602，雜質Ⅰ(乙烯吡啶)、雜質Ⅱ(2-羥乙基吡啶)、雜質Ⅲ(N-甲基-2吡啶乙胺)由德國LGC GmbH公司提供，選擇四個4個生產企業(廠家A、B、C、D)的產品做熱降解實驗。乙腈為色譜純；實驗用水為超純水；其余試劑為分析純。

1.2實驗方法

1.2.1色譜條件

(1)色譜柱(Inertsil ODS-4, 4.6 mm I.D.×250 mm, 5 μm)；流動相：0.69 g 醋酸銨溶解于 1000 mL水中，用冰醋酸調 pH到 4.7，加入4.43 g十二烷基硫酸鈉，混合均勻，過濾后取 600 mL與 400 mL乙腈混勻即得。流速：1 mL/min，柱溫：40 ℃，進樣體積：20 μL。

(2)色譜柱(Shim-pack XR-ODS 2.0 mm I.D.×50 mm, 2.2 μm)；流動相：A-0.1% FA；B-ACN；梯度洗脫，流速：0.3 mL/min，柱溫：40 ℃，進樣體積：5 μL。

1.2.2質譜條件

離子源：ESI正負離子同時掃描，離子源電壓：ESI+，4.5 kV； ESI-，-3.5 kV，檢測器電壓：1.6 kV。掃描范圍：m/z 50～150；m/z 150～500。霧化氣：氮氣1.5 L/min，干燥氣：氮氣10 L/min，碰撞氣：氬氣。脫溶劑管溫度：200 ℃，加熱模塊溫度：200 ℃。校準方法：自動調諧優化電壓，外標法校準質量數。

1.2.3 2D-LC-IT-TOF系統分析

2D-LC-IT-TOF系統過程如系統流路圖1所示。

(1)LC 1stD 初始狀態，藥物樣品進樣，采用色譜條件(1)測試。保證了主成分和雜質的保留時間與建立方法一致，因此，準確確定目標雜質。

(2)收集 1stD 確定的雜質到 loop 1, 2, 3, 4, 5，然后通過色譜條件(2)輸液泵將 loop環中的組分沖入到 2D色譜柱上分離，并洗脫到MS中進行分析。

(3)平衡 1stD 流路，準備進行溶劑的分析，得到空白數據。

(4)將得到的空白數據與藥物的數據進行比較，找出雜質峰，并進行 MS 定性分析。

圖1　系統流路圖Fig.1　Diagram for system flow path

1.2.4溶液的制備

稱取105 ℃加熱4 h后樣品(廠家B，批號20130401)細粉0.15 g，加流動相溶解并稀釋制成每1 mL中約含0.4 mg的溶液，作為供試品溶液，測定，見圖2。

圖2　105 ℃加熱破壞后樣品色譜圖Fig.2　Chromatogramofthe sampleafter 105 ℃ heated

2　結果與討論

2.1樣品熱降解實驗

樣品在40 ℃加速試驗中發現，總雜質量增加，部分樣品雜質1(相對保留時間0.28)和雜質3(相對保留時間0.70)增加量超過0.1%。樣品粉末在60 ℃加熱16 h后測定，按面積歸一化法計算各雜質量，廠家A生產的樣品單個雜質或總雜質量均未明顯增加，雜質1增加量小于0.2%，其他雜質增加量小于0.1%。而其他三個生產廠家在相對保留時間0.36新增一個雜質(雜質2)，雜質量約為0.07%～0.10%；雜質1明顯增加，

增加量大于1.0%；在相對保留時間0.70的雜質3增加量大于0.1%。廠家B生產的樣品在相對保留時間0.70的雜質增加量大于1.0%。

在未加熱樣品中雜質1、雜質3對總雜質量貢獻較大，雜質2量小于0.1%，為了對樣品中雜質1和雜質3定性研究，將四個生產廠家的樣品粉末及原料分別進行高溫破壞(105 ℃，3 h)，使雜質量增加足以進行定性研究。結果原料未見明顯雜質增加，4個樣品粉末105 ℃加熱3 h后顏色變黃，雜質1、雜質2、雜質3等處雜質含量都明顯增加，見色譜圖2。

2.2質譜圖分析

圖3　雜質3二維 MS 色譜圖Fig.3　Dimensional MS chromatograms of the impurity 3

圖4　雜質3一級質譜圖Fig.4　MS1 spectrum of the impurity 3

圖5　雜質3二級質譜圖Fig.5　MS2 spectrum of the impurity 3

圖6　雜質3三級質譜圖1Fig.6　MS3 spectrum 1 of the impurity 3

圖7　雜質3三級質譜圖2Fig.7　MS3 spectrum 2 of the impurity 3

鹽酸倍他司汀及其已知3 個雜質(雜質Ⅰ(乙烯吡啶)、雜質Ⅱ(2-羥乙基吡啶)、雜質Ⅲ(N-甲基-2吡啶乙胺))，在質譜上均有很好的響應，但是未知雜質1和未知雜質2在質譜上卻沒有響應。未知雜質3二維 MS 色譜圖(m/z 150～500)，見圖3，未知雜質3 的多級質譜圖 ESI(+)見圖4～圖7。

3　結　論

圖8　雜質3的ESI(+)多級質譜碎裂方式分析Fig.8　ESI(+)MSn fragmentation pattern analysis of impurity 3

結合鹽酸倍他司汀已知的三種雜質結構分析，用分子式預測軟件分析，得到雜質3 可能的分子式為 C14H22N2O5。其碎片離子 m/z137.1065的分子式可能是 C8H12N2， 可能為倍他司汀。由雜質3的分子式裂解規律(見圖8)推測出雜質3 可能的結構式見圖9。考察鹽酸倍他司汀片的輔料，由乳糖、蔗糖、淀粉、糊精、硬脂酸鎂、羥丙基纖維素等組成，由此推測該雜質是在高溫條件下由倍他司汀與樣品輔料中的糖發生了縮合反應后產生的降解產物。

圖9　雜質3可能的結構式Fig.9　Possible structural formula of impurity 3 參考文獻

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Qualitative Analysis of Impurity in Betahistine Hydrochoride Tablets by Heat Treatment

CHENHong，ZHURong，LIXin，XIELi，ZHANGHeng-jie

(Chengdu Institute for Food and Drug Control, Sichuan Chengdu 610045, China)

A method for qualitative analysis of impurity in betahistine hydrochoride tablets by heat treatment was established. Betahistine hydrochoride tablets powder was heated in 4 h, and the degradation impurities were extracted by mobile phase. Qualitative analysis of the impurities was detected by 2D-LC-IT-TOF. Result showed that one of the three degradation impurities could be detected qualitatively. The molecular formula, fragmentation pattern and structure type possibly were inferred from by sample information and multistage high resolution mass spectrometry. The method is accurate and sensitive, and can be used for qualitative analysis of impurity in betahistine hydrochloride.

betahistine hydrochloride; impurities by heat treatment; qualitative analysis

陳紅(1977-)，女，副主任藥師，碩士，主要研究方向為食品/藥品監督檢測和質量標準研究。

R917

A

1001-9677(2016)08-0123-03