山茱萸果肉化學成分研究*

任亞碩，許鳳清，馬鳳愛

(1 安徽中醫藥大學藥學院，安徽　合肥　230012；2 安徽省現代中藥重點實驗室，安徽　合肥　230012)

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山茱萸果肉化學成分研究*

任亞碩1,2，許鳳清1,2，馬鳳愛1,2

(1 安徽中醫藥大學藥學院，安徽合肥230012；2 安徽省現代中藥重點實驗室，安徽合肥230012)

研究了山茱萸(Cornusofficinalis)果肉的化學成分，分離得到單體化合物。對山茱萸成熟果實滲漉提取，利用硅膠、Sephadex LH-20柱色譜和重結晶等方法分離純化化合物，通過理化性質和現代波譜分析技術鑒定化合物結構。結果表明：從山茱萸果肉中分離并鑒定得到6個單體化合物?；衔锓謩e鑒定為槲皮素(Quercetin, 1)、咖啡酸(Caffeic acid, 2)、沒食子酸(Gallic acid, 3)、沒食子酸乙酯(Ethyl gallate, 4)、齊墩果酸(Oleanoic acid, 5)、β-谷甾醇(β-Sitosterol, 6)。

山茱萸；化學成分；提取分離；結構鑒定

圖1　化合物1～6的結構式Fig.1　The structure of compounds 1～6

山茱萸(CornusofficinalisSieb.et Zucc)為山茱萸科(Cornaceae)植物[1]。藥用部位是除去果核的干燥成熟果肉，始載于《神農木草經》，又名蜀棗、 藥棗、山萸肉、棗皮、肉棗等，具有補益肝腎、澀精固脫的功效[2]。作為臨床常用中草藥，山茱萸含有多種活性成分，為了進一步闡明其藥理活性的化學基礎，本文對新鮮的山茱萸果肉進行了化學成分研究，分離得到6個單體化合物。

1　實　驗

1.1儀器與材料

AV-500核磁共振儀,Bruker BioSpin GmbH, Rheinstetten, Germany；EYELA SB-1100旋轉蒸發儀,東京理化器械株式會社；SHB-III循環水式多用真空泵,鄭州長城科工貿有限公司;ZF-2型三用紫外儀,上海市安亭電子儀器廠；HH-S2恒溫水浴鍋,江蘇金壇市環宇科學儀器廠；DZF-6050真空干燥箱,上海博訊實業有限公司醫療設備廠；AB135-S十萬分之一分析天平,瑞士METTLER TOLEDO；大孔樹脂AB-8型,天津光復精細化工有限公司；柱色譜用硅膠(100～200目，200～300目)、薄層色譜用硅膠G、GF254,青島海洋化工廠生產；凝膠為Sephadex LH-20(50 μm)，GE 公司；乙醇為食用酒精；水為蒸餾水；其它試劑均為市售分析純。

山茱萸藥材采自安徽省岳西縣石關鄉，由安徽中醫藥大學中藥資源系楊青山鑒定為山茱萸科植物山茱萸(CornusofficinalisSieb.et Zucc)。

1.2提取與分離

山茱萸成熟果實6.0 kg，人工去核，得到山茱萸果肉，95%乙醇50 L浸漬2次，續用70% 乙醇50 L 浸漬1次，每次2天，合并3次浸漬液，回收溶劑，得到無醇味稠浸膏，加水混懸，依次以乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，合并萃取液，減壓回收溶劑，分別得到乙酸乙酯部位浸膏127.9 g，正丁醇部位浸膏521.3 g。水相經AB-8大孔樹脂柱，水洗2個柱體積，后續用70%乙醇洗脫，回收洗脫液，得到水相部位。

取山茱萸乙酸乙酯部位浸膏，加乙醇溶解，吸附于350 g硅膠(200～300目)，經硅膠柱色譜(1.65 kg, 13×80 cm)，二氯甲烷-甲醇(95:5, 9:1, 85:15, 4:1, each 20 L, V/V)系統梯度洗脫，經TLC檢識，合并相近的流份，得到12個洗脫部位(Fr 1～Fr 12)。取Fr 1、Fr 2、Fr 3、Fr 7經硅膠柱色譜和Sephadex LH-20葡聚糖凝膠色譜反復純化，從Fr 1中分離得到化合物6(38 mg)，Fr 2中分離得到化合物5(16 mg)，Fr 3中分離得到化合物4(2 mg)，Fr 7中分離得到化合物1(626 mg)，2(12 mg)，3(6 mg)。

2　結果與討論

2.1結構鑒定結果

化合物1：黃色針狀結晶(甲醇)。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δH: 12.48 (1H, s, OH-5), 7.65 (1H, d,J=2.2 Hz H-2′), 7.51 (1H, dd,J=8.4, 2.2 Hz, H-6′), 6.85 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5′), 6.38 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.16 (1H,d,J=2.0Hz,H-6), 10.80 (1H,s,3′-OH), 9.6 (1H,s,4′-OH), 9.36(1H,s,7-OH), 9.31(1H,s,3-OH);13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ: 175.8 (s, C-4), 163.9 (s, C-7), 160.7 (s, C-5), 156.1 (s, C-9), 147.3 (s, C-4′), 146.8 (s, C-2), 145.0 (s, C-3′), 135.7 (s, C-3), 121.9 (s, C-1′), 120.0 (d, C-6′), 115.6 (d, C-5′), 115.0 (d, C-2′), 103.0 (s, C-10), 98.2 (d, C-6), 93.4 (d, C-8)。以上波譜數據與文獻[3]一致，故鑒定化合物1為槲皮素(Quercetin)。

化合物2：黃色針狀結晶(甲醇)。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δH: 7.37 (1H, d,J=15.8 Hz, H-7), 7.00 (1H, d,J=2.0 Hz, H-2), 6.91 (1H, dd,J=8.2, 2.0 Hz, H-6), 6.73 (1H, d,J=8.2 Hz, H-5), 6.13 (1H, d,J=15.8 Hz, H-8).13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) δC: 167.9 (s, C-9), 148.1 (s, C-4), 145.5 (s, C-3), 144.6 (s, C-7), 125.0 (s, C-1), 121.2 (d, C-6), 115.7 (d, C-5), 115.1 (d, C-2), 114.6 (s, C-8)。以上波譜數據與文獻[4]一致，故鑒定化合物2為咖啡酸(Caffeic acid)。

化合物3：無色針狀結晶(甲醇)。1H-NMR (500 MHz, acetone-d6) δH: 7.13 (2H, s, H-2, 6)。13C-NMR (125 MHz, acetone-d6) δC: 167.7 (s, C-7), 145.9 (s × 2, C-3,5), 138.6 (s, C-4), 121.9 (s, C-1), 110.0 (d × 2,C-2, 6)。以上波譜數據與文獻[5]一致，故鑒定化合物3為沒食子酸(Gallic acid)。

化合物4：無色針狀結晶(氯仿)。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δH: 7.13 (2H, s, H-2, 6)。13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) δC: 167.7 (s, C-7), 145.9 (s×2, C-3,5), 138.6 (s, C-4), 121.9 (s, C-1), 110.0 (d×2, C-2, 6)。以上波譜核磁數據與文獻[6]報道一致，故鑒定化合物4為沒食子酸乙酯(Ethyl gallate)。

化合物5：無色針狀結晶(甲醇)。1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δH：0.7～1.2之間出現7個甲基氫質子峰，1.0～2.1(m)為多個CH、CH2上的H信號，5.28(1H，br.s,H-12)為烯氫信號。13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δC：38.4(C-1)，27.7(C-2)，79.1(C-3)，38.7(C-4)，55.2(C-5)，18.2(C-6)，32.4(C-7)，39.6(C-8)，47.6(C-9)，37.0(C-10)，23.3(C-11)，122.6(C-12)，143.6(C-13)，41.5(C-14)，28.1(C-15)，23.9(C-16)，46.8(C-17)，41.9(C-18)，46.5(C-19)，29.6(C-20)，33.8(C-21)，32.6(C-22)，30.6(C-23)，15.9(C-24)，15.5(C-25)，17.2(C-26)，26.9(C-27)，182.8(C-28)，34.0(C-29)，23.9(C-30)。以上波譜數據與文獻[7]所報道的一致,故鑒定化合物5為齊墩果酸(Oleanoic acid)。

化合物6：白色無定形粉末(氯仿)。經TLC 檢識與β-谷甾醇對照，薄層行為一致；后經HPLC驗證，保留時間與β-谷甾醇對照品相同，故確定化合物6為β-谷甾醇。

2.2討論

本實驗以安徽大別山區的山茱萸新鮮果肉為研究對象，為防止植物中的某些化學成分遇熱會被破壞，采用滲漉的方式提取，并在實驗過程中嚴格控制實驗溫度在60 ℃以下，通過系統溶劑萃取法將提取浸膏進行極性分段，并利用多種色譜技術對乙酸乙酯萃取部位的化學成分進行初步分離，分得6個化合物，經薄層檢識、1H-NMR，13C-NMR等方法對分離得到的6個單體化合物進行結構鑒定。

后期進一步對比山茱萸果肉與果核中化學成分的異同，深入探討山茱萸炮制前后化學成分的改變，將會對山茱萸的綜合開發與應用起到促進作用。

3　結　論

山茱萸是目前中醫臨床常用的傳統中藥，本研究對其乙酸乙酯萃取部位化學成分進行系統分離，后期實驗還將對其石油醚、正丁醇萃取進行研究。山茱萸因含有豐富的活性成分，確切的保健功效，成為研究熱點，隨著山茱萸在醫藥和保健品等方面的廣泛應用，其藥效機制的研究也在不斷深入。本課題組也將繼續進行系統實驗，以期為山茱萸的進一步研究提供有益參考。

[1]中科院中國植物志中國植物志編委會. 《中國植物志》. 北京：科學出版社，1990: 56, 84.

[2]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(第一部)[S]. 北京：中國醫藥科技出版社，2015: 27.

[3]宋麗，臧志和，廖洪利，等. 槲皮素三種化學結構修飾方法的研究[J]. 成都醫學院學報, 2007, 2(2): 115-117.

[4]段營輝，戴毅，高昊，等. 草珊瑚的化學成分研究[J]. 中草藥, 2010, 41(1): 29-32.

[5]楊小鳳，付宏征. 欒樹的化學成分[J]. 藥學學報, 1999, 34(6): 457-462.

[6]程琛舒. 山茱萸化學成分的研究[D]. 合肥：安徽大學, 2011.

[7]李娟，畢志明，肖雅潔，等. 懷牛膝的三萜皂苷成分研究[J]. 中國藥學雜志，2007, 42(3): 178-180.

Study on the Chemical Constituents from the Fruit ofCornusofficinalis*

RENYa-shuo1,2,XUFeng-qing1,2,MAFeng-ai1,2

(1 School of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine, Anhui, Hefei 230012;2 Anhui Key Laboratory of Modernized Chinese Materia Medica, Anhui Hefei 230012, China)

To study the chemical constituents from the fruit ofCornusofficinalis, the chemical constituents were separated and purified by a variety of chromatographic methods such as silica gel, Sephadex LH-20 and recrystallization. Their structures were elucidated on the basis of extensive spectroscopic methods and physico-chemical characters. Results showed that six compounds were isolated from the fruit ofCornusofficinalis. Compounds 1～6 were identified as Quercetin, Caffeic acid, Gallic acid, Ethyl gallate, Oleanoic acid and β-Sitosterol.

CornusofficinalisSieb.et Zucc; chemical constituents; extraction and isolation; structure establishment

安徽中醫藥大學自然科學研究基金項目(No: 2015zr008)。

任亞碩(1987-)，男，助教。

許鳳清，女，副教授。

R931.6

A

1001-9677(2016)08-0076-02