真空-超聲提取聯用高效液相色譜分析黃連中的金胺*

劉育堅，許志剛

(昆明理工大學理學院，云南　昆明　650500)

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真空-超聲提取聯用高效液相色譜分析黃連中的金胺*

劉育堅，許志剛

(昆明理工大學理學院，云南昆明650500)

采用真空-超聲技術提取黃連中草藥中的金胺。流動相為乙腈-0.05 mol/L醋酸銨水溶液(加冰醋酸調節pH=4.5)，兩者體積比為40:60，流速為1.0 mL/min，檢測波長432 nm，柱溫為30 ℃。該方法能夠有效檢測樣品中的金胺，線性方程為Y=-0.00084+0.00103X，相關系數R=0.9995，回收率在99.03%～104.02%之間。與常壓超聲提取對比，真空-超聲法的提取效率優于常壓超聲提取的效率。

金胺；真空-超聲提取；黃連；高效液相色譜

黃連為毛茛科植物黃連、三角葉黃連、峨嵋野連或云南黃連的根莖，其味極苦，俗語云“啞巴吃黃連，有苦說不出”。黃連具有瀉火、燥濕、解毒、殺蟲之功效，屬寒性藥材[1]。目前，市場對中藥材需求上漲。某些生產廠家在利益的驅使下，對中藥材摻假造假，較為常見的是染色摻假。而使用工業染劑對藥材進行染色加工，以次充好的現象屢見不鮮[2]。常見的工業染劑金胺，可引起結膜炎、皮炎和上呼吸道刺激癥狀，人接觸有致癌的風險[3]。因此，為了規范食品藥品市場的監督管理，2008年，我國在《食品中可能違法添加的非食用物質和易濫用的食品添加劑品種名單(第一批)》的通知中，明確規定工業染劑金胺等物質禁止作為食品添加劑使用[4]。

因為染色中藥對人體具有較大的危害，對中藥中的染色劑進行相關檢測是非常必要的，近年來所報道的文獻大多以色譜法為主，目前其樣品前處理方法為超聲提取[5-7]。本課題組采用真空-超聲法提取中草藥中的有效成分具有較好的效果，其提取率優于常壓超聲提取法[8]。本文在前期工作的基礎上，采用真空-超聲法提取黃連樣品中的金胺，然后聯用高效液相色譜進行測定，并與常壓超聲提取的結果進行對比。結果表明，采用真空-超聲提取法有利于提高提取效率。

1　實驗部分

1.1實驗主要儀器、試劑與材料

Dionex Ultimate 3000高效液相色譜儀,美國戴安公司;C18色譜柱(J&K Scientific LTD，5 μm，4.6 mm ×250.0 mm)，FA2004電子天平,上海舜宇恒平科學儀器有限公司;SHZ-D(Ⅲ)循環水式真空泵, 鞏義市予華儀器有限公司;PS-20超聲波清洗機,東莞市潔康超聲波設備有限公司。

金胺(90%),購于西亞試劑有限公司;乙腈(色譜級);其它試劑為分析純，水為娃哈哈純凈水。黃連樣品分別購于昆明市三家中藥店。

1.2分析方法

1.2.1樣品處理方法

準確稱取1.00 g 黃連樣品，放置于50 mL 的圓底燒瓶中，加入20 mL 的乙醇溶液，圓底燒瓶上端連接玻璃三通，其中一端連接真空泵，通過真空泵控制提取體系的真空度，并且使用三通旋鈕作為體系的開關控制。在真空超聲提取20 min 后，關閉玻璃三通活塞，取下圓底燒瓶，提取溶液進樣前用0.45 μm 濾膜過濾。

1.2.2標準溶液的配制

準確稱取金胺適量，加入乙醇配制標準溶液，并逐級稀釋成濃度分別為10、50、100、200、500 μg/L的標準溶液，置于冰箱冷藏室保存，1個月內使用。

2　實驗結果與討論

2.1色譜分析方法的建立

參考了文獻[9]的色譜分析方法，以乙腈-0.1%甲酸水溶液為流動相，兩者的體積比為10:90。但在實際操作中，金胺在實際樣品中的色譜分離效果并不明顯，1.0 mg/L標樣的色譜分析圖如圖1(a)所示，金胺的色譜峰雖然尖銳，但色譜峰受到溶劑峰的干擾，帶來定量分析的不準確。參考文獻[10]的色譜分析方法，以乙腈-0.05 mol/L醋酸銨水溶液(加冰醋酸調節pH=4.5)為流動相，兩者的體積比為40:60，1.0 mg/L標樣的色譜分析圖如圖1(b)所示，金胺的色譜峰分離效果較好，基本無干擾。因此，確定色譜分析方法為：乙腈-0.05 mol/L醋酸銨水溶液(pH=4.5)為流動相，兩者的體積比為40:60，流速為1.0 mL/min，檢測波長為432 nm，柱溫為30 ℃，進樣體積為20 μL。金胺的線性方程為Y=-0.00084+0.00103X，相關系數為R=0.9995。

圖1　不同色譜條件下金胺的色譜分析圖

2.2樣品分析

對從市面上隨機購買的三種黃連樣品進行分析，按照上述1.2.1中的方法進行樣品處理，再按照2.1的色譜方法進行檢測，結果未從三種市售藥材中檢出金胺。為進一步驗證所建立方法的可靠性，分別對三種市售黃連加入不同濃度的金胺對照品進行不同水平的加標回收試驗。

2.3加標回收試驗

分別用電子天平準確稱量三種黃連樣品1.00 g，置于50 mL 圓底燒瓶中，分別加入100 μL 5 mg/L、20 mg/L、200 mg/L金胺溶液，其加標水平分別為0.5、2.0和20.0 mg/kg。放置一段時間后，加入20 mL 乙醇溶液浸泡過夜。采用真空-超聲提取20 min，進樣前提取液用0.45 μm 濾頭過濾，直接進行色譜分析。加標20.0 mg/kg的色譜分析圖如圖2所示。分析結果如表1所示：真空-超聲提取法的回收率在99.03%～104.02%之間，相對標準偏差在0.42%～0.98%(n=5)之間，而常壓超聲提取法的回收率僅在67.03%～84.85%(n=5)之間，因此真空-超聲提取法的回收率的效果明顯優于常壓超聲提取的結果。分析結果表明：真空-超聲提取法有利于黃連藥材中金胺的快速溶出，可以提高提取效率，真空環境還可以避免分析物的分解、氧化等。因此，真空-超聲提取法能很好的應用于中草藥的提取分析。

圖2　黃連中金胺的色譜分析圖

黃連加入量/(mg/kg)真空-超聲提取法回收率/%RSD(n=5)/%常壓超聲提取法回收率/%RSD(n=5)/%1號0.599.030.8471.530.742.0102.560.4984.500.6220.099.030.5082.110.932號0.5100.660.9574.170.832.0102.720.4272.120.9920.0103.780.7581.950.873號0.599.500.7867.030.792.0102.560.8084.850.8920.0104.020.9883.490.85

3　結　論

建立了真空-超聲提取黃連樣品中金胺的前處理方法，并聯用高效液相色譜進行測定，同時將結果與常壓超聲法提取法進行對比。結果表明，真空-超聲法提取比常壓超聲法提取效率高，真空-超聲提取法有利于黃連中的金胺的溶出。所建立的真空-超聲提取法可用于中藥材的提取和分析，不僅可以獲得更好的提取效率，還能避免分析物的氧化、分解。

[1]孫振,彭淑紅,嵇琴,等.黃連藥性研究[J].中國實驗方劑學雜志,2015(11):221-223.

[2]蔣玲,饒偉文.中藥染色摻假的研究進展[J].首都醫藥,2011(16):16-18.

[3]樓飛群,張謙.高效液相色譜法檢測黃芩飲片及其制劑百咳靜糖漿中金胺O的含量[J].中國中醫藥咨訊,2010,2(16):119-120.

[4]肖凌,侯俊杰,聶晶,等.元胡止痛系列制劑中金胺O的檢測[J].藥物分析雜志,2012(11):2008-2011.

[5]翟海云,劉振平,余曉,等.高效液相色譜法測定中藥中的五種禁用黃色工業染料[J].化學研究與應用,2014(1):135-139.

[6]莫連峰,饒偉文,趙純玉.高效液相色譜法測定染色黃芩中金胺的含量[J].中國藥業,2007,16(15):29-30.

[7]余新啟,何軼,魯靜,等.金胺O染色物在中成藥中的檢測方法研究[J].藥物分析雜志,2014,34(1):130-135.

[8]許志剛,陳云麗,張仙麗,等.超聲波提取-高效液相色譜法測定茶葉中的槲皮素[J].昆明學院學報,2013,35(3):66-68.

[9]Wang Zhibing,Zhang Liyuan,Li Na. Ionic liquid-based matrix solid-phase dispersion coupled with homogeneous liquid-liquid microextraction of synthetic dyes in condiments[J]. Journal of Chromatography A, 2014(1348):52-62.

[10]吳萌,饒偉文.黃連上清丸中金胺O的檢測方法研究[J].中國藥業,2014,23(2):33-35.

Analysis of Auramines in Rhizoma Coptidis by Vacuum Ultrasonic Extraction Coupled with High Performance Liquid Chromatography*

LIUYu-jian,XUZhi-gang

(Faculty of Science, Kunming University of Science and Technology, Yunnan Kunming 650500, China)

Auramines in rhizome coptidis was extracted by vacuum ultrasonic extraction method. The mixture of Acetonitrile and 0.05 mol/L ammonium acetate (adjusted to pH 4.5 with glacial acetic acid) was used as the mobile phase and their volume ratio was 40:60. The flow rate was 1.0 mL/min. The UV detection wavelength was set at 432 nm. The column temperature was 30 ℃. This method can effectively detect auramines in rhizome coptidis. The linear equation was Y=-0.00084+0.00103X and the correlation coefficient was 0.9995. The recovery was between 99.03% and 104.02%. Compared with conventional ultrasonic extraction method, the extraction efficiency by vacuum ultrasonic extraction method was better than that by conventional ultrasonic extraction method.

auramines; vacuum ultrasonic extraction; rhizome coptidis; high performance liquid chromatography

國家自然科學基金項目(21565018)；昆明理工大學學科方向團隊項目(14078356)；昆明理工大學校級大學生創新項目(201510674061)。

劉育堅(1995-)，男，本科，主要研究方向為色譜分析。

許志剛(1979-)，博士，副教授，研究方向為現分離分析。

O657.7

A

1001-9677(2016)02-0096-03