臨床來源副溶血弧菌毒力基因及耐藥性分析

周方滿，謝紅意，葉鴻雁，顧大磊，葛婷婷

臨床來源副溶血弧菌毒力基因及耐藥性分析

周方滿，謝紅意，葉鴻雁，顧大磊，葛婷婷

目的了解急性腹瀉患者中副溶血弧菌的分布、毒力基因及耐藥性。方法對急性腹瀉病例的糞便標本進行致病菌分離培養，采用聚合酶鏈反應（PCR）方法開展tlh、tdh和trh毒力基因檢測，采用VITEK2 Compact細菌分析系統對副溶血弧菌分離株進行藥敏試驗。結果從2 307例腹瀉病患者糞便標本中檢出副溶血弧菌180株，分離率為7.8%。副溶血弧菌感染主要發生在7—10月份，其中8月份最多。毒力基因檢測發現171株tdh陽性，占95.0%；4株trh陽性。副溶血弧菌對氨芐西林、頭孢唑啉、頭孢西叮的耐藥率分別為96.7%、88.9%、23.3%，對其他實驗藥物敏感，未發現多重耐藥菌株。結論副溶血弧菌感染在本地區夏秋季急性腹瀉中占有重要地位，對青霉素類、第一代和第二代頭孢藥物的耐藥率較高，tdh是副溶血弧菌最主要的毒力基因。

副溶血弧菌；毒力；耐藥性

1　資料與方法

1.1標本來源與鑒定收集寧波市北侖區人民醫院2014年4月至2015年10月急性腹瀉患者2307例，符合年齡1～80歲，每天排便≥3次，且大便性狀有改變（呈稀便、水樣便、黏膿便或膿血便等），病程≤14 d的腹瀉患者。標本采集后直接接種于堿性蛋白胨水進行增菌，18～24 h后接種至TCBS平板，VP的分離培養與鑒定按《全國臨床檢驗操作規程》（第三版）［2］進行。所需生化培養基和生化試劑購自杭州天和微生物試劑有限公司，采用法國生物梅里埃VITEK2 Compact細菌分析系統進行細菌鑒定。1.2毒力基因檢測將分離鑒定的VP菌株，接種血平板，經37℃過夜培養，挑取3～5個火柴頭大小菌量懸浮于滅菌蒸餾水，煮沸10 min，然后13 000 r/min離心10 min，留取上清（含VPDNA模板）。毒力基因tdh、tlh和trh的引物序列參考文獻［3］（由上海生工生物工程有限公司完成）。引物序列、擴增產物及反應條件見表1。

1.3藥敏試驗采用VITEK2Compact細菌分析系統對分離的VP進行體外藥物敏感性試驗。質控菌株包括大腸埃希菌ATCC25922、銅 綠 假 單 胞菌ATCC27853 和金黃色葡萄球菌ATCC25923。

2　結果

2.1分布情況共分離出 VP 180株，分離率為7.8%。180例VP陽性的腹瀉患者男102例，女78例；年齡10個月至80歲；7—9月份檢出率最高，共分離出125株VP，占69.4%。

2.2毒力基因檢測所有VP tlh基因均陽性；171株tdh基因陽性，占95.0%；4株為trh陽性。

2.3藥物敏感性試驗VP對氨芐西林、頭孢唑啉的耐藥率較高，分別為96.7%、88.9%；對頭孢西叮耐藥率23.3%，中度敏感率23.3%；對其他實驗藥物敏感，未發現多重耐藥菌株，見表2。

表1　毒力基因引物及反應條件

表2　180株副溶血弧菌藥物敏感性試驗結果　%

3　討論

在我國由VP引起感染事件呈上升趨勢。本文從寧波市北侖區2 307例急性腹瀉患者中分離VP 180株，分離率高達7.8%，高于陳海麗等［4］報告結果，可能與本地居民生食海鮮習慣有關。金培婕等［5］報告浙江沿海地區海產品及環境中VP檢出率達70%，因此改變生食海鮮習慣，加強飲食衛生十分重要。

目前認為VP的致病性與其攜帶tdh 和trh基因產生的毒素有關［6］，本文應用聚合酶鏈反應（PCR）方法檢測發現，180 株VP tdh、trh基因攜帶率分別是95.0% 和2.2%與文獻［7-8］研究結果基本一致。

本文藥物敏感性試驗顯示，急性腹瀉患者VP對青霉素類藥物（如氨芐西林）、第一代和第二代頭孢藥物（如頭孢唑啉、頭孢西叮）的耐藥率較高，分別為96.7%、88.9%、23.3%。對喹諾酮類、復合青霉素類、碳氫酶烯類、復方新諾明、第三代和第四代頭孢等藥物敏感性較好，未發現多重耐藥菌株，與國內報道基本一致［9-10］。喹諾酮類藥物如環丙沙星、左氧氟沙星的藥物敏感性較好且價格低廉擬推薦作為治療VP感染首選藥物。

本文VP系臨床分離菌株，對復方新諾明敏感，未發現多重耐藥菌株，與吳蓓蓓等［11］報告本地區海產品及環境分離株差異很大，究其原因可能與其采樣的海產品養殖場的使用抗生素有關，能否椐此說明自然生態環境中VP的耐藥性差異有待于進一步研究分析，但是筆者認為禁止或限制農業生產中濫用抗生素刻不容緩。

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.07.056

R446.6

A

1671-0800（2016）07-0949-02副溶血弧菌（VP）是一種嗜鹽性革蘭陰性病原菌，通過食源性途徑引起的中毒事件已經超過沙門菌和志賀菌，可引起食物中毒和腹瀉，成為我國首要的食源性致病菌［1］。北侖的海產品食用比較盛行，是VP感染的高發區。本文收集北侖區腹瀉患者的糞便標本，通過對VP的毒力基因和耐藥性型分析，了解本地區VP的毒力和耐藥性，以指導臨床治療，報道如下。

寧波市醫學科技計劃項目（2014A41）

315800寧波，寧波市北侖區人民醫院

謝紅意，Email：xiehongyi 2000@126.com

2016-02-05（本文編輯：孫海兒）