主動(dòng)脈夾層患者性激素水平及性激素受體的表達(dá)及意義

李順清

(湖北省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，湖北 武漢 430000)

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主動(dòng)脈夾層患者性激素水平及性激素受體的表達(dá)及意義

李順清

(湖北省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，湖北 武漢 430000)

目的觀察主動(dòng)脈夾層患者體內(nèi)性激素水平及性激素受體的表達(dá)情況，探討其改變與該疾病發(fā)病的關(guān)系。方法選取主動(dòng)脈夾層患者62例為實(shí)驗(yàn)組，選取同期健康體檢者59例作為正常組,采用Elisa法檢測(cè)研究對(duì)象體內(nèi)雌二醇、卵泡生成激素、黃體生成激素、孕酮、睪酮、泌乳激素水平。取實(shí)驗(yàn)組中10例行人工血管置換術(shù)取得胸主動(dòng)脈標(biāo)本者作為主動(dòng)脈夾層病變血管組，同時(shí)選取10例無(wú)心血管疾病遺體捐獻(xiàn)者主動(dòng)脈血管組織為正常動(dòng)脈血管組，采用免疫組化法、qRT-PCR法檢測(cè)血管組織中性激素受體(ERα、ERβ、PR及AR)蛋白表達(dá)水平及mRNA水平。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組血清雌二醇水平及雌雄激素的比值明顯低于正常組(P均<0.05)，催乳激素明顯高于正常組(P<0.05)，2組睪酮、卵泡生成激素、黃體生成激素水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；主動(dòng)脈夾層病變血管組血管組織中ERα、ERβ、PR、AR蛋白及mRNA水平均明顯低于正常動(dòng)脈血管組(P均<0.05)。結(jié)論主動(dòng)脈夾層患者體內(nèi)雌激素水平較正常人群下降，且血管中性激素受體表達(dá)下降，提示性激素參與了主動(dòng)脈夾層的形成。

主動(dòng)脈夾層；性激素；性激素受體

主動(dòng)脈夾層是具有高病死率的致命性血管疾病，其病理性改變是主動(dòng)脈內(nèi)膜局部破裂，管腔內(nèi)的血液進(jìn)入動(dòng)脈壁內(nèi)使得內(nèi)膜逐步剝離進(jìn)而在動(dòng)脈內(nèi)形成真、假兩腔，最終導(dǎo)致管腔破裂死亡。報(bào)道顯示西方主動(dòng)脈夾層年發(fā)病率為3～5/10萬(wàn)，早期病死率>50%[1-2]，且該疾病發(fā)病率仍處于上升趨勢(shì)。目前主動(dòng)脈夾層的發(fā)病原因尚未完全闡明，普遍認(rèn)為是多因素作用的結(jié)果。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)性激素與該疾病的發(fā)生有密切關(guān)系[3]。因此本研究以主動(dòng)脈夾層患者為研究對(duì)象，對(duì)其體內(nèi)性激素水平及血管組織性激素受體表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，探討性激素水平與該疾病發(fā)病的關(guān)系，為明確主動(dòng)脈夾層的發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)。

1　臨床資料

1.1一般資料選取2014年1月—2016年1月本院急救醫(yī)學(xué)科及心臟外科經(jīng)主動(dòng)脈增強(qiáng)CT(CTA)或主動(dòng)脈磁共振成像(MRI)確診為主動(dòng)脈夾層患者62例為實(shí)驗(yàn)組，男50例，年齡41.2～67.8(54.5±13.3)歲；體質(zhì)量指數(shù)(24.48±2.37)kg/m2。女12例(絕經(jīng)后)，年齡45.4～64.6(55.0±11.6)歲；體質(zhì)量指數(shù)(23.97±3.08)kg/m2。選取同期在我院健康體檢者59例作為正常組，男48例，年齡40.8～68.1(54.8±12.7)歲，體質(zhì)量指數(shù)(24.54±2.16)kg/m2；女11例(絕經(jīng)后)，年齡45.8～66.5(54.9±12.4)歲，體質(zhì)量指數(shù)(23.86±2.74)kg/m2。2組患者性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。取實(shí)驗(yàn)組中10例行人工血管置換術(shù)取得胸主動(dòng)脈標(biāo)本者作為主動(dòng)脈夾層病變血管組，男6例，女4例；年齡(59.8±10.8)歲。同時(shí)選取10例無(wú)心血管疾病遺體捐獻(xiàn)者主動(dòng)脈血管組織為正常動(dòng)脈血管組，男5例，女5例；年齡(58.7±11.9)歲。2組患者性別、年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均>0.05)。入選者均排除急性心肌梗死、慢性消耗性疾病、傳染病、腫瘤等疾病，女性患者除外生殖系統(tǒng)疾病。本研究符合倫理學(xué)規(guī)定并通過(guò)醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)論證同意，實(shí)驗(yàn)組和正常組入選個(gè)體在入選時(shí)均告知其研究方法及其意義，并簽署知情同意。

1.2研究方法

1.2.1性激素水平實(shí)驗(yàn)組患者確診為主動(dòng)脈夾層后次日晨、正常組受試者于入組后次日晨抽取靜脈血4 mL，離心取血清，置于-80 ℃低溫冰箱保存，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)卵泡生成激素、黃體生成激素、孕酮、睪酮、催乳激素水平。

1.2.2性激素受體表達(dá)情況將血管置換后的主動(dòng)脈病變血管和正常捐獻(xiàn)者主動(dòng)脈血管組織離體后2 h內(nèi)放置在液氮速凍后放置于-80 ℃保存，并制作成石蠟包埋切片。通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)血管組織中雌激素受體α(ERα)、ERβ、孕激素受體(PR)、雄激素受體(AR)表達(dá)情況；將免疫組化切片在光鏡下進(jìn)行觀察，按各層細(xì)胞核染色密度和范圍積分：陽(yáng)性為棕褐色0分，陰性；1分，極弱陽(yáng)性；2分，弱陽(yáng)性；3分，中度陽(yáng)性；4分，強(qiáng)陽(yáng)性；5分，極強(qiáng)陽(yáng)性。應(yīng)用qRT-PCR法檢測(cè)血管組織中ERαmRNA、ERβmRNA、PRmRNA及ARmRNA水平，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。具體引物設(shè)計(jì)見(jiàn)表1，反應(yīng)體系如下：10×PCRbuffer，TaKaRa TaqTM 5 IU/μL，上游引物25 μmol/L，下游引物25 μmol/L，PCR反應(yīng)底物10 mmol/L，Template DNA 10 ng/μL及Sterile deionized water，體積分別為2.5 μL，0.4 μL，0.4 μL，0.4 μL，0.5 μL，7.0 μL，12.3 μL，總體系為25.0 μL。

表1　性激素受體表達(dá)情況引物設(shè)計(jì)

2　結(jié)　　果

2.1實(shí)驗(yàn)組和正常組性激素水平比較實(shí)驗(yàn)組血清雌二醇含量及雌雄激素比值明顯低于正常組(P均<0.05)，泌乳素含量明顯高于正常組(P<0.05)，2組睪酮、卵泡生成激素、黃體生成激素水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見(jiàn)表2。

表2　2組血清性激素水平比較±s)

2.2正常動(dòng)脈血管組和主動(dòng)脈夾層病變血管組血管組織中性激素受體表達(dá)情況性激素受體陽(yáng)性反應(yīng)存在于血管壁的內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中。主動(dòng)脈夾層病變血管組血管壁中ERα、ERβ、PR及AR免疫組化積分及mRNA水平均明顯低于正常動(dòng)脈血管組(P均<0.05)。見(jiàn)表3及表4。

表3　動(dòng)脈血管壁中性激素受體免疫組化積分±s，分)

表4　動(dòng)脈血管壁中性激素受體qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果

3　討　　論

隨著當(dāng)今社會(huì)人口老齡化的進(jìn)程，主動(dòng)脈夾層已成為急診醫(yī)學(xué)科及心臟大血管外科常見(jiàn)的一種疾病，其一旦破裂將直接威脅患者生命。盡管目前已有多種手段如外科手術(shù)、血管介入等對(duì)該疾病進(jìn)行干預(yù)及治療，但仍保持較高的病死率[4-5]，其根本原因?yàn)樵摷膊“l(fā)病機(jī)制尚未完全清楚。因此開(kāi)展對(duì)其發(fā)病機(jī)制的研究對(duì)該疾病早期防治及改善臨床預(yù)后有重要意義。流行病學(xué)研究表明，主動(dòng)脈夾層的發(fā)病率存在明顯性別差異，男女發(fā)病率比率約為4∶1，同時(shí)在女性絕經(jīng)期后，女性患者發(fā)病率與男性相似，提示性激素改變或許參與了主動(dòng)脈夾層的形成[6]。

性激素是體內(nèi)廣泛存在的具有調(diào)節(jié)作用的激素之一，包括雌激素和雄激素，其中雌激素在一定程度上通過(guò)調(diào)節(jié)血管功能和脂質(zhì)代謝起到血管保護(hù)作用，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)雌激素能直接選擇性誘導(dǎo)血管快速舒張[7]，調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移[8]，并且可以通過(guò)UCs-CRHR2系統(tǒng)起到心臟保護(hù)作用[9]，當(dāng)體內(nèi)雌激素水平下降(如絕經(jīng)后)的情況下，因其血管保護(hù)作用減弱導(dǎo)致主動(dòng)脈夾層發(fā)生率增加；而性激素的另一個(gè)重要組成部分雄激素與血管方面的研究比較少，已有研究表明雄激素一方面可以直接作用于血管系統(tǒng)[10]，另一方面可以通過(guò)單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)參與炎癥形成誘發(fā)動(dòng)脈粥樣斑塊形成[11]。因此本研究以臨床主動(dòng)脈夾層患者為研究對(duì)象，對(duì)其血清性激素水平和動(dòng)脈血管壁性激素受體進(jìn)行檢測(cè)。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組血清雌二醇含量及雌雄激素比值明顯低于正常組 ，泌乳素含量明顯高于正常組，2組睪酮、卵泡生成激素、黃體生成激素水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；主動(dòng)脈夾層病變血管組血管組織中ERα、ERβ、PR、AR蛋白及mRNA水平均明顯低于正常動(dòng)脈血管組。表明性激素可能參與了主動(dòng)脈夾層的形成，有必要深入研究，對(duì)改善其預(yù)后、尋找新的治療手段有重要意義。本研究中也發(fā)現(xiàn)主動(dòng)脈夾層患者雄激素受體表達(dá)下降，但其具體作用和途徑尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。

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1008-8849(2016)24-2679-03

2016-02-22