不同生長月份女貞子中特女貞苷含量的動態差異

田志祥，王　偉，劉　藝，韓春超山東中醫藥大學藥學院，山東濟南250300

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不同生長月份女貞子中特女貞苷含量的動態差異

田志祥，王偉△，劉藝，韓春超
山東中醫藥大學藥學院，山東濟南250300

目的：探討不同月份女貞子中特女貞苷的含量差異。方法：采收10～12月份的女貞子，陰干后，分別稱取20 g女貞子，先經石油醚脫脂2次，0.5 h/次，然后以80%乙醇提取2次，3 h/次，合并提取液并濃縮，將濃縮后的提取液經D-101大孔樹脂柱純化，分離得到目標成分，進行含量測定。結果：11月份女貞子中特女貞苷含量達到最高。

女貞子；特女貞苷；含量差異

女貞子（Fructus Ligustri Lucidi）是木犀科常綠喬木女貞Liustrum lucidum Ait.的干燥成熟果實。初始記載于《神農本草經》，上品，為扶正固本藥。其味甘苦，性涼，歸肝腎經，有滋補肝腎和明目烏發之功效，用于治療肝腎陰虛、眩暈耳鳴、腰膝酸軟、須發早白、目暗不明、內熱消渴、骨蒸潮熱等癥［1］。因其有保護肝臟，降血壓，降血糖，抗病毒，消炎等功效而越來越受到人們的重視。

女貞子化學成分有醚萜類、揮發油、苯乙醇類、三萜類、黃酮類、多糖、氨基酸、脂肪酸及微量元素等，而在女貞子中分離得到的主要化合物是三萜類和環烯醚萜苷類［2-3］。女貞子中的一種活性有效成分——特女貞苷具有較強的免疫調節和抗氧化作用［4-5］，可以與亞適量刀豆球蛋白A（Con A）協同提高正常鼠脾T淋巴細胞的轉化，并能顯著提高由環磷酞胺抑制的自然殺傷細胞協膠的殺傷功能，減輕由地塞米松引起的N K活性低下的作用［6］。特女貞苷結構式見圖1。

圖1　特女貞苷的結構式

2010版的藥典中［1］記載女貞子為成熟果實，冬季時采收。經過查閱文獻，發現女貞子的果實采收期為10～12月份［7］。在現有文獻中并沒有關于采收月份與特女貞苷含量之間關系的報道。本研究比較女貞子中特女貞苷在10～12不同月份的含量差異。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1植物材料及其樣品的制備供試植物為野生大葉女貞，分別于10～12月底，采其果實部分，于室溫暗處干燥至恒重。

1.1.2使用儀器和試劑UV9000紫外分光光度計（上海元析儀器有限公司）；萬分之一天平（上海菁海儀器有限公司FA2004N型）；旋轉蒸發儀（上海亞榮RE-52）；二兩裝高速中藥粉碎機（瑞安市永歷制藥機械有限公司）；層析柱（上海禾汽玻璃儀器有限公司）；D-101大孔樹脂（安徽三星樹脂科技有限公司）；無水乙醇（天津市富宇精細化工有限公司）；石油醚（天津市富宇精細化工有限公司）；GF-254薄層硅膠（天津市富宇精細化工有限公司）；特女貞苷標準品純度為98%（南京森貝伽生物科技有限公司）；蒸餾水。

1.2特女貞苷的提取及分離

1.2.1特女貞苷的提取精確稱量10、11、12月份的女貞子各20.00g共3份，粉碎后用石油醚在70℃下脫脂2次，0.5h/次，濾去石油醚，將女貞子粉末取出，揮干石油醚。然后用10倍量80%乙醇提取，提取條件為：水浴熱提，提取溫度定為70℃，提取2次，3h/次［8］。合并2次提取液，在50℃下減壓濃縮，干燥，得到特女貞苷粗提取物。1.2.2特女貞苷的分離將10、11、12月份的特女貞苷粗提取物各用100mL蒸餾水溶解，將粗提物水溶液分別經預先處理好的D-101大孔樹脂柱分離純化。先用蒸餾水沖至洗脫液無色且mol ish反應為陰性；接著用400m L40%乙醇洗脫，除雜；最后用70%乙醇洗脫，收集洗脫液。

1.3特女貞苷的含量鑒別方法采用薄層色譜法比較女貞子提取液上柱后特女貞苷含量的差異。

1.3.1硅膠G薄層板的制備使用表面光滑平整的5cm×10cm的玻璃板，洗凈晾干。把硅膠G F254與0.3%的羧甲基纖維素鈉水溶液按1∶3的比例在研缽中調勻后，將研好的漿液傾倒于玻璃板上，形成硅膠薄層板，室溫下晾干，在105℃下活化半小時以上后，即可使用。

1.3.2展開劑與顯色劑使用乙酸乙酯-甲醇（3∶1）為展開劑；使用10%硫酸乙醇溶液作為顯色劑。

1.3.3比較方法將收集到的大孔樹脂洗脫液濃縮5m L進行點板，并用展開劑分離，待展開劑揮干后用顯色劑顯色。

1.4紫外法測定比較特女貞苷的含量

1.4.1對照品溶液的制備精密稱取0.01g對照品，用蒸餾水溶解并定容至200mL。

1.4.2測定對照品吸光度查文獻得知特女貞苷的最大吸收波長為224nm［9］，可通過紫外分光光度計測定出對照品的吸光度。

1.4.3測定大孔樹脂柱后浸膏的重量將收集到的大孔樹脂洗脫液蒸干，測浸膏重量。

1.4.4測定樣品的吸光度將浸膏用蒸餾水溶解并定容至5000mL，通過紫外分光光度計測定樣品的吸光度。

1.5高效液相法比較特女貞苷含量差異采用agilent C18（4.6mm×150mm，5m）色譜柱，流動相為乙腈∶水=32∶68，檢測波長為224nm，流速1m L/min，對特女貞苷進行檢測。

2　結果

2.1薄層色譜法測定結果由薄層色譜圖可知，11月份的特女貞苷的量達到最大，10月份次之，12月份最少，見圖2。

圖2　特女貞苷薄層圖

2.2紫外法對照品的吸光度為0.475，10月份樣品的吸光度為0.484，11月份樣品的吸光度為0.541，12月份樣品的吸光度為0.441。樣品濃度=標準品的濃度×樣品吸光度/標準品吸光度，依據該公式分別求得其濃度。接著用（濃度×溶解的體積）/浸膏重量，得上柱后樣品的含量，見表1、圖3。

表1　不同月份女貞子中特女貞苷含量（紫外法）

圖3　不同月份女貞子中特女貞苷含量柱狀圖（紫外法）

2.3高效液相色譜圖由外標法算得10月份女貞子中特女貞苷的含量為36.6%，11月份女貞子中特女貞苷的含量為53.2%，12月份女貞子中特女貞苷的含量為23.9%，見圖4—8。

圖4　 10月份女貞子測得特女貞苷的色譜圖

圖5　 11月份女貞子測得特女貞苷的色譜圖

圖6　 12月份女貞子測得特女貞苷的色譜圖

圖7　特女貞苷對照品的高效液相圖

圖8　不同月份女貞子中特女貞苷含量比較（高效液相結果）

3　討論

藥典收錄的中藥材女貞子在生長和成熟的過程中，其有效成分之一——特女貞苷的含量，除了受到外界環境的影響和自身遺傳因子的調控外，還可能受到加工以及采收的影響，采收期為影響其含量的重要因素。本研究通過薄層色譜法、紫外分光光度法、高效液相色譜法對不同月份的女貞子中特女貞苷的含量進行測定，結果準確，靈敏度高。實驗結果表明，女貞子中的特女貞苷含量在11月份達到最高，隨著果實的成熟反而呈現緩慢下降的趨勢，通過測定10～12月份女貞子中特女貞苷含量，得出10～12月份的女貞子中特女貞苷含量從高到低為11月＞10月＞12月。原因可能是10月份的女貞子未達到最佳時期，而由于特女貞苷的光不穩定性，在12月后，特女貞苷的含量有所降低。由于僅靠女貞子中特女貞苷一個成分的變化來確定女貞子的采收季節，具有一定的局限性。但是，鑒于藥典中以特女貞苷這一有效成分為檢測指標，因此本研究能為女貞子的最佳采收期提供一定的依據?？梢猿醪酱_定，由于11月份女貞子中特女貞苷含量達到最高，女貞子的最佳采收期應為11月份。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［M］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:43.

［2］黃新蘋，王武朝.中藥女貞子的化學成分研究進展［J］.國際藥學研究雜志，2011，38（l）:47-51.

［3］張興輝，石力夫.中藥女貞子化學成分研究（1）［J］.第二軍醫大學學報，2004，25（3）：333-334.

［4］Guo N1，Yu Y，Ablajan K，et al.Seasonal var iations in metabol i te prof i l ing of the f ruits of l igust rum lucidum Ai t［J］.Rapid Commun Mass Spec t rom，2011，25（12）:1701-1714.

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［6］蔡漆，石力夫，胡晉紅，等.特女貞甙體外對小鼠脾淋巴細胞轉化和自然殺傷細胞活性的影響［J］.第二軍醫大學學報，1995，19（1）:76-78.

［7］戴啟金，楊林，朱正普.女貞子綜合利用及栽培技術［J］.林業實用技術，2005（6）:38-40.

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［9］張學蘭，侯杰，李慧芬，等.炮制對女貞子中特女貞苷含量的影響［J］.中藥材，2009，32（4）：498-500.

Dynamic Differencesof the Contentsof Specnuezhenide in NvZhenZi in DifferentGrowth Months

TIAN Zhixiang，WANGWei△，LIU Yi，HAN Chunchao
Pharmacy School of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250300，China

Objective:To study the contentsofspecnuezhenide in NvZhenZi（Fructus Ligustri Lucidi）in differ-entgrow thmonths.Methods:NvZhenZi grew from Octomber to December were collected and dried in the shade，20g NvZhenZi wasweighed，degreased with petroleum ether twice，30min every time，extracted with 80%ethanol twice，threehourseach time.The extractswere concentrated，the concentrated extractwaspurified by D-101macroporous resin column to obtain the target ingredients，contents of the the ingredientswere determined.Results:The contentsof specnuezhenide contained in NvZhenZi grew in November reach thehighest.

NvZhenZi；specnuezhenide；contentdifference

R284.1

A

1004-6852（2016）03-0037-04

2015-01-27

田志祥（1991—），男，在讀碩士研究生。研究方向：中藥活性物質與新劑型。

△王偉（1978—），男，博士學位，講師。研究方向：中藥制劑。