TLC法鑒別復(fù)方羅漢果止咳顆粒中的枇杷葉*

龍永誠，黎　霜，韋忠孫，羅　強(qiáng)，覃懷寧，馬劍霜桂林中族中藥股份有限公司，廣西桂林54800；桂林電子科技大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院

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TLC法鑒別復(fù)方羅漢果止咳顆粒中的枇杷葉*

龍永誠1，黎霜2△，韋忠孫1，羅強(qiáng)2，覃懷寧2，馬劍霜1
1桂林中族中藥股份有限公司，廣西桂林541800；2桂林電子科技大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院

目的：復(fù)方羅漢果止咳顆粒中枇杷葉的鑒別。方法：采用薄層色譜方法，以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水（19∶45∶26∶10）為展開劑，硅膠G為固定相，噴以10%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視薄層斑點(diǎn)。結(jié)果：薄層色譜圖中，樣品溶液在對照品、對照藥材相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的紫紅色斑點(diǎn)。陰性樣品無相同斑點(diǎn)。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確，可用于復(fù)方羅漢果止咳顆粒中的枇杷葉的鑒別。

薄層色譜法（TLC）；復(fù)方羅漢果止咳顆粒；枇杷葉

復(fù)方羅漢果止咳顆粒制劑，涉及6味藥材，化學(xué)成分復(fù)雜，結(jié)構(gòu)多樣，而其現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，檢測項(xiàng)目僅有性狀和顆粒劑常規(guī)檢查兩項(xiàng)［1］。藥材在種植過程中易受種植區(qū)域、氣候條件、采收時(shí)間等多種因素的影響，如未能有效控制其質(zhì)量，會給服藥患者帶來安全隱患。為保證該品種的有效性、安全性和可控性，本研究采用薄層色譜法對制劑中的枇杷葉進(jìn)行鑒別研究，為進(jìn)一步完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1儀器與試劑S ar torius200型電子天平；奧林巴斯相機(jī)；水浴鍋；分液漏斗、玻璃板等；乙醚、乙醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、甲苯、甲酸等均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水均為純化水；硅膠G（青島海洋化工廠，簿層色譜用）。

1.2樣品與標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品：熊果酸（中國生物制品研究院提供，批號：110742-201220）；枇杷葉（中國生物制品研究院提供）。樣品：市售復(fù)方羅漢果止咳顆粒3批，分別為GG JS-140301，NNWW-130701，GLZZZ Y-130301。陰性樣品：取枇杷葉、百部、桑白皮、白前、桔梗等5味藥材，按照相同的提取制備工藝，制備得缺枇杷葉的陰性樣品（桂林中族中藥股份有限公司制備）。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1供試品溶液的制備取樣品20g，加水40mL，超聲處理5分鐘，用乙醚振搖提取3次，40mL/次，棄去乙醚溶液，取水層加0.5gNaOH，搖勻，用水飽和的正丁醇提取2次，30mL/次，合并正丁醇，水洗至中性，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，即得。

1.3.2對照溶液的制備

1.3.2.1對照藥材溶液的制備取枇杷葉對照藥材1g，加水100mL，煎煮30分鐘，冷卻后過濾，取濾液加0.5gNaOH，搖勻，用水飽和的正丁醇提取2次，30mL/次，合并正丁醇，水洗至中性，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，即得。

1.3.2.2對照品溶液的制備取熊果酸對照品0.2mg，加1mL甲醇，使溶解，即得。

1.3.2.3陰性樣品溶液的制備取陰性樣品20g，按供試品溶液項(xiàng)下的方法制備得陰性樣品溶液。

1.3.2.4實(shí)驗(yàn)條件展開劑：三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=19∶45∶26∶10。薄層板：硅膠G板。點(diǎn)樣量：10μL。顯色：噴10%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。

2　結(jié)果

色譜圖中，樣品溶液在與對照藥材相應(yīng)的位置上，顯1個(gè)相同的紫紅色斑點(diǎn)，對照品相應(yīng)的位置上顯相同的紫紅色斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾，見圖1。

圖1　枇杷葉薄層色譜圖

色譜圖中，從左到右分別是：陰性樣品，枇杷葉對照藥材，供試品，熊果酸對照樣品。

3　討論

由于吸附劑對不同化合物吸附力大小的不同，當(dāng)有溶液流過時(shí)，具有微小差異的物質(zhì)在吸附劑之間發(fā)生連續(xù)不斷的吸附、解吸、再吸附、再解吸，從而達(dá)到分離［2］。復(fù)方羅漢果止咳顆粒中含有六味藥材，成分復(fù)雜，本實(shí)驗(yàn)選擇薄層色譜的方法對其中的枇杷葉進(jìn)行定性鑒別。

枇杷葉為薔薇科植物枇杷Eriobotryaja Pon.ica（T hunb.）I，indl的干燥葉，具有清肺止咳，降逆止嘔之功效，常用于肺熱咳嗽，氣逆喘急，胃熱嘔逆，煩熱口渴等癥狀［3］。相關(guān)研究［4-6］在對枇杷葉的化學(xué)成分分析中發(fā)現(xiàn)其主要活性成分為皂苷類、黃酮類物質(zhì)。因此，本實(shí)驗(yàn)在研究樣品的前處理方法時(shí)，選擇了兩種不同方法［7-8］：1）取樣品20g，研細(xì)，加乙醇40mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，用乙醚振搖提取2次，20mL/次，取水層溶液加正丁醇振搖提取2次，20mL/次，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的氨試液洗滌2次，30mL/次，分取正丁醇液，回收至干。2）取樣品20g，加水40mL，超聲處理5分鐘，使均勻，用乙醚振搖萃取3次，40mL/次，棄去乙醚層備用；合并水層，加0.5gNaOH使溶解，搖勻，水層溶液加水飽和的正丁醇提取2次，30mL/次；合并正丁醇液，水洗至中性，水浴蒸干。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，后一種方法中以熊果酸為代表的主要活性成分得到了較好的富集，在薄層色譜鑒別中展現(xiàn)出少而清晰的斑點(diǎn)。

正丁醇為極性較大的溶劑，根據(jù)“相似相溶”原理，以此為介質(zhì)萃取到的物質(zhì)極性應(yīng)當(dāng)處于大極性范圍。因此，在選擇薄層色譜的固定相、展開劑時(shí)，主要考慮較大極性的吸附劑、溶劑，通過文獻(xiàn)研究［7-9］，分別選擇了三氯甲烷-甲醇-水、氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水、環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸等3種展開劑體系對供試品溶液進(jìn)行薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)比較、驗(yàn)證，以硅膠G為吸附劑，三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=19∶45∶26∶10為展開劑時(shí)，得到良好的分離效果，樣品和枇杷葉對照藥材在相應(yīng)的位置上，顯1個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)，在和熊果酸對照品相同的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，缺枇杷葉的陰性樣品無干擾。

由于購買到的枇杷葉對照藥材量不足，使得對照藥材斑點(diǎn)不夠明顯；所用薄層板為實(shí)驗(yàn)室手工鋪制，對物質(zhì)的分離有一定的影響。

本研究結(jié)果可用于復(fù)方羅漢果止咳顆粒制劑中枇杷葉藥材的定性鑒別，方法準(zhǔn)確、簡便、快速，可收錄于質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中。

［1］董瑩，郭偉.《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑：第三冊［J］.中國中藥雜志，1991，16（12）：118.

［2］許瑞庭.實(shí)用藥物分析化學(xué)［M］.杭州：浙江科學(xué)技術(shù)出版社，1992:513.

［3］國家藥典委員會.中國藥典：一部［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：190.

［4］呂寒，李維林，裴詠萍，等.枇杷葉中黃酮類化學(xué)成分的HPLC-MSn分析［J］.現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2009，23（6）:56-58.

［5］呂寒，陳劍，李維林，等.枇杷葉中三萜類化學(xué)成分的研究［J］.中藥材，2008，31（9）：1351-1354.

［6］陳歡.枇杷葉化學(xué)成分及抗癌活性的研究［D］.北京：北京化工大學(xué)，2012.

［7］劉軍.枇杷止咳顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂及指紋圖譜研究［D］.合肥：安徽醫(yī)科大學(xué)，2011.

［8］謝周濤，胡進(jìn).復(fù)方枇杷桔梗膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中國藥業(yè)，2014，23（8）:26-28.

［9］李茂森.含枇杷葉的中成藥薄層色譜鑒別探討［J］.中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2003，4（2）：64.

Determ ination of Loquat Leaves in Compound LuoHanGuo ZhiKe Granulesby TLC

LONG Yongcheng1，LIShuang2△，WEIZhongsun1，LUO Qiang2，QIN Huaining2，MA Jianshuang1
1 Guilin Otigh Herbs Company，Ltd，Guilin 541800，China；2 School of Life and Environmental Science of Guilin University of Electronic Technology

Objective:To identify loquat leaveas（Eriobotrya japonica Thunb.）in compound LuoHanGuo ZhiKe granules.Methods:TLCmethodwasadopted，chloroform:acetic ether:methanol:water（19:45:26:10）were chosen as developing agents，silica gel as the immobile phase，and spraying 10%vanillin sulfuric acid solution，the spots were clear till heating to 105℃，and they were observed under the light.Results:The sample solutionswere in the corresponding places of the control articles and control herbs in TLC，which presented the purp le red spots in the same colors respectively.Therew asno same spot in the negative samp les.Conclusion:Themethod，simp le and accurate，could beused for the identification of loquat leaves in compound LuoHanGuo ZhiKe granules.

TLC；compound LuoHanGuo ZhiKe granules；loquat leaves

R282.7

A

1004-6852（2016）03-0033-02

2015-02-19

國家科技支撐計(jì)劃（編號2011BA101B03）；廣西大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（編號201410595107）。

龍永誠（1971—），男，工程師。研究方向：中藥成分分析。

△黎霜（1968—），女，博士學(xué)位，副教授。研究方向：新藥的研究與開發(fā)。