不同產地蒙古扁桃葉中槲皮素含量的比較研究*

白萬富，石松利，鄭倩男，吳培賽內蒙古科技大學包頭醫學院藥學院，內蒙古包頭014040

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不同產地蒙古扁桃葉中槲皮素含量的比較研究*

白萬富，石松利△，鄭倩男，吳培賽
內蒙古科技大學包頭醫學院藥學院，內蒙古包頭014040

目的：建立蒙古扁桃葉中槲皮素含量測定的方法，對不同產地蒙古扁桃葉中槲皮素的含量進行比較。方法：采用HPLC法，Shim-Pack VP-ODS C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相甲醇-0.2%磷酸（50∶50）；柱溫30℃；流速1.0mL/min；檢測波長360 nm；進樣量20μL。結果：線性關系良好，r=0.999 9，回歸方程為Y=86130X-6471.9，線性范圍為2.5～50μg/mL，平均加樣回收率為100.5%，RSD為1.9%（n=6）。不同產地蒙古扁桃葉中槲皮素的含量存在差異，內蒙古固陽地區的含量最高，賀蘭山哈拉烏溝地區的含量最低。結論：本實驗首次測定了蒙古扁桃葉中槲皮素的含量并對不同出產地進行比較，方法準確、可靠，可作為蒙古扁桃藥材質量評價的指標及資源開發的依據。

蒙古扁桃；槲皮素；高效液相色譜法；含量測定

蒙古扁桃葉是薔薇科扁桃屬蒙古扁桃（Amygdalusmongolica Maxim.）的干燥葉，蒙古扁桃又稱山櫻桃、土豆子，蒙古名為烏蘭-布依勒斯，多年生木本植物。主要分布于內蒙古、寧夏部分地區荒漠草原區的山地、丘陵、石質坡地等。現為國家三級保護植物。蒙古扁桃為重要的木本油料樹種之一，種仁含油率約為40%，其油可供食用。種仁可代“郁李仁”入藥，蒙古扁桃能潤腸、利尿、主治大便燥結、水腫、腳氣等［1］。

槲皮素作為重要的黃酮類化合物，具有保肝利膽、抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗腫瘤等多種藥理學作用［2-3］。槲皮素是蒙古扁桃的重要活性成分之一，本實驗采用高效液相色譜法對蒙古扁桃葉中的槲皮素的含量進行測定，并對內蒙古、寧夏等地蒙古扁桃藥材中該成分的含量進行比較。本研究可為藥材質量的客觀評價提供方法，并為蒙古扁桃資源的合理開發奠定科學可靠的實驗基礎。

1　材料

1.1儀器與試藥J Y1201型電子天平（上海民橋精密科學儀器有限公司）；高效液相色譜儀（紫外檢測器，二極管陣檢測器PDA-2000，島津國際貿易上海有限公司）；色譜柱［Hypersil OD S2-C18（4.6mm×250mm，5μm）柱號：E2414777］；色譜工作站：LC-solution，DS-2510D T型超聲清洗機（天津奧特賽恩斯儀器有限公司），數顯鼓風干燥箱（上海博訊實業有限公司醫療設備廠），TDZ4-WS低速自動平衡離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）。

1.2試藥槲皮素對照品（北京恒源啟天化工技術研究院北京世紀奧科生物技術有限公司，批號：MUST-12072505）；甲醇、乙腈為色譜純；磷酸為分析純；水為超純水。蒙古扁桃葉采自阿右雅布賴戈壁、賀蘭山、九峰山等地，經內蒙古大學生命科學學院王迎春教授鑒定為薔薇科扁桃屬植物蒙古扁桃。

2　方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：Hypersil ODS2-C18（4.6mm×250mm，5μm）；柱溫：30℃；檢測波長：360nm；流動相：甲醇∶0.2%磷酸=50∶50；流速：1.0mL/min，進樣量：20μL。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取槲皮素標準品5mg，置10m L量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得儲備液。

2.2.2供試品溶液的制備取蒙古扁桃葉粉末（過20目篩）約1.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇10m L，密塞，超聲50分鐘（溫度25℃），放冷，轉移至離心管中，離心（2000 r/min）10分鐘，濾過，取上清液，即得。

2.3系統適用性實驗取對照品溶液、供試品溶液各20μL進樣，按照“2.1”項下色譜條件測定，記錄色譜圖。理論板數按槲皮素峰計算不低于4 000，槲皮素峰與其他雜質峰分離度均大于1.5。對照品溶液、供試品蒙古扁桃藥材溶液在此色譜條件下的色譜圖見圖1。

圖1　槲皮素對照品及蒙古扁桃藥材HPLC圖

2.4線性關系的考察精密稱取槲皮素標準品5mg，置10m L容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得儲備液。精密量取該溶液2m L置于10m L量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，精密量取0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、5.00 m L，置于10 m L量瓶中，用甲醇定容至刻度。制得含槲皮素濃度為2.5、5、10、15、20、25、50μg/m L的對照品溶液，分別精密吸取上述對照品溶液各20μL，按“2.1”項下色譜條件測定，以濃度（X）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，繪制標準曲線，進行回歸分析，得回歸方程：Y=86130X-6471.9，R=0.9999，結果表明：槲皮素在2.5～50μg/m L范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.5精密度實驗取同一對照品溶液，連續進樣6次，按“2.1”項下色譜條件測定，測得槲皮素峰面積的R S D為0.9%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.6穩定性實驗取同一供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，分別在0、2、4、6、8、10小時進行測定，測得槲皮素峰面積的R S D為1.5%（n=6），表明供試品溶液在10小時內穩定性良好。

2.7重復性實驗精密稱取同一批樣品共六份，每份約1.5 g，按照含量測定的方法，進行測定，計算含量。平均含量為9.788 3mg/g，R S D為2.0%，表明該方法重復性良好。

2.8含量測定取內蒙古、賀蘭山等7個產地的供試品，每份約1.5 g，精密稱定，按上述含量測定方法進行測定，外標法計算樣品中槲皮素的含量［4］，見表1。

表1　不同產地扁桃葉中槲皮素的含量

2.9加樣回收率實驗精密稱取已知含量（0.0153mg/g）的蒙古扁桃葉0.7 g，共6份，精密稱定，分別精密加入槲皮素對照品適量，按供試品溶液制備方法制備，分別按“2.1”項下色譜條件測定，結果平均加樣回收率為100.5%；R S D為1.9%，見表2。

表2　加樣回收實驗結果

3　討論

3.1提取方法的研究

3.1.1提取溶劑的考察［5-6］實驗考察了提取溶劑甲醇的濃度（100%，90%，80%，70%，60%）。結果表明：甲醇的濃度對蒙古扁桃葉中槲皮素提取的量有一定的影響，80%甲醇溶液提取槲皮素的量為0.098 6mg/g最高，其次是90%甲醇溶液提取槲皮素的量為0.053 0mg/g，60%甲醇溶液提取槲皮素的量為0.0091mg/g最低。故選擇80%甲醇溶液為提取溶劑。

3.1.2樣品水解程度的考察［7-9］由于色譜柱的p H范圍在1～10之間，當酸度過大就會使色譜柱受損，采用2mol/L鹽酸對樣品進行水解，提取槲皮素，發現用甲醇提取的槲皮素的量與加入鹽酸水解提取的槲皮素的量相差不大，因此，本研究直接采用甲醇提取的方法。

3.1.3脫脂對樣品中槲皮素含量測定［10-12］分別精密稱取同一批號的樣品約1.5g 2份，一份加入石油醚進行脫脂處理，另一份作為空白對照，比較兩者槲皮素的含量，結果顯示含量相差不明顯，因此無需對樣品進行脫脂處理。

3.2不同產地含量的比較本實驗結果顯示，不同產地蒙古扁桃葉中槲皮素的含量有較大差異，固陽蒙古扁桃中槲皮素0.4007mg/g最高，其次為烏海千里溝蒙古扁桃中槲皮素0.0979mg/g，而賀蘭山哈拉烏溝蒙古扁桃中槲皮素0.0117mg/g為最低，可為蒙古扁桃藥材質量控制提供參考依據［13-15］。

研究證明，本實驗方法簡便、靈敏、穩定、準確，可用于蒙古扁桃藥材的質量監控與評價；并為蒙古扁桃資源的合理開發提供科學可靠的實驗依據。

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［3］劉明學，魏光輝.槲皮素的藥理學作用及臨床應用前景［J］.中國藥房，2010，21（27）：2581-2583.

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［5］嚴蕾，石驍昵，孫蓮.液相色譜法測定植物樣品中槲皮素和山奈酚［J］.中國衛生檢驗雜志，2008，18（6）:1056-1057.

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［7］黃興富，黎其萬，劉宏程，等.高效液相色譜法同時測定苦蕎中蘆丁、槲皮素和山奈酚的含量［J］.中成藥，2011，33（2）: 345-347.

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Com parisonsof the ContentsofQuercetin in Mongolian Almond Leaf from Different Producing Areas

BAIWanfu，SHISongli△，ZHENGQiannan，WU Peisai
Pharmacy School of Baotou Medical College of Inner Mongolia University of Science&Technology，Baotou 014040，China

Objective:To compare the contents of quercetin contained in Mongolian almond leaf［Amygdalus mongolica（Maxim.）Ricker］form different producing areas by establishing content determ ination method of quercetin.Methods:HPLCmethodwasadopted，Shim-Pack VP-ODSC18chromatographic column（4.6mm×250mm，5μm）；mobile phase:methanol-0.2%phosphoric acid（50:50）；column tem perature 30℃；flow ratewas1.0m L/m in；detection wavelengthwas360 nm；the sample sizewas20μL.Results:Linear relationship wasbetter，r=0.999 9，regression equation w as Y=86130X-6471.9，linear range was from 2.5 to 50μg/m L，average recovery rate w as 100.5%，RSD was1.9%（n=6）.The differencewasexisted in the comparison of the contents of quercetin ofMongolian almond leaf from different producing areas，the contents of quercetin contained in Mongolian almond fromguyang districtwere the highest，while these contained in the Mongolian almond from Halawugou districtof Helan mountainswere the lowest.Conclusion:The contents of quercetin in Mongolian almond leaf are initially detected，and different producing areasare compared in the experiment，themethod，accurate and reliable，could be taken as the index of quality evaluation of Mongolian almond and the reference of resource development.

Mongolian almond；quercetin；HPLC；contentdetermination

R917

A

1004-6852（2016）03-0030-03

2015-03-30

國家自然科學基金項目（編號81102760）；內蒙古自治區自然科學基金項目（編號2015MS0808）。

白萬富（1982—），男，碩士學位，講師。研究方向：中、蒙藥及其制劑的化學成分及質量標準研究。

△石松利（1981—），女，博士學位，教授。研究方向：中、蒙藥成分及資源開發利用研究。