細胞周期激酶亞單位1對肝細胞癌細胞增殖能力的影響

金宇霆　張江　武昊宇　夏強

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細胞周期激酶亞單位1對肝細胞癌細胞增殖能力的影響

金宇霆張江武昊宇夏強

目的觀察細胞周期激酶亞單位1(CKS1)在肝細胞癌及正常肝組織中的表達以及其對人肝細胞癌細胞BEL-7405的增殖能力的影響。方法應用免疫組織化學檢測65對手術肝細胞癌組織及癌旁正常組織CKS1的表達水平。應用Western印跡檢測肝癌細胞系與正常肝臟細胞中CKS1表達量的差異。應用小干擾RNA(siRNA)技術轉染肝細胞癌BEL-7405細胞，Western印跡檢測CKS1 siRNA對CKS1蛋白的干擾效果，同時應用細胞計數試劑盒(CCK-8)和平板克隆增殖實驗檢測CKS1對BEL-7405細胞增殖能力的影響。結果免疫組織化學染色結果顯示，CKS1在正常肝組織中表達量較肝細胞癌組織中表達量低，且差異有統計學意義(P<0.05)。Western印跡檢測表明CKS1在7種肝細胞癌細胞系表達量顯著高于正常肝細胞株，且CKS1的表達量在肝細胞癌BEL-7405細胞株顯著高于其他肝癌細胞株。CCK-8法檢測CKS1的siRNA轉染BEL-7405細胞與陰性對照組和空白對照組相比明顯抑制細胞增殖，在48、72和96 hA值分別降低了0.376、0.566、0.972(P<0.05)；平板克隆增殖形成實驗表明，CKS1的siRNA轉染BEL-7405細胞后腫瘤細胞形成的克隆增殖集落明顯少于陰性對照組和空白組,干擾組與空白、陰性對照組比較差異有統計學意義(P<0.05)。結論CKS1在肝細胞癌組織中表達量顯著高于正常肝組織，在肝癌細胞中表達量顯著高于正常肝細胞， CKS1在肝細胞癌細胞BEL-7405的增殖中扮演了重要的角色，CKS1可能成為針對肝細胞癌基因治療的新興靶點。

肝細胞癌； 細胞周期激酶亞單位1； siRNA干擾；細胞增殖

研究表明，腫瘤的發生、發展與細胞周期紊亂密切相關，細胞周期激酶亞單位(Cyclin kinase subunit，CKS)家族蛋白是真核生物在進化中相對保守的小分子蛋白，高等真核生物表達CKS1和CKS2兩種蛋白，該蛋白與細胞周期功能相關[1]。CKS家族蛋白通過影響S期激酶相關蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)的活性，導致腫瘤抑制蛋白p27泛素化，結合CKS1蛋白促進增殖分化、抗凋亡[2-5]，可能也參與了惡性腫瘤的發生、進展過程。本研究采用免疫組織化學技術和Western印跡法檢測HCC組織和細胞與正常肝臟組織和肝細胞的表達分布，同時應用體外化學合成的CKS1 siRNA轉染人HCC細胞BEL-7405，探討其對HCC增殖能力的影響及其作用機制。

資料和方法

一、主要材料和試劑

HCC組織取自上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院肝臟外科2013年3月至2014年2月手術切除HCC標本共65對，包括HCC組織，以及癌旁肝臟組織(距癌組織邊緣2 cm)。……