柏子仁水提物抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究*

王愛梅

?

【實(shí)驗(yàn)研究】

柏子仁水提物抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究*

王愛梅

南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校(南陽 473061)

摘要：目的探討柏子仁水提物的抗抑郁作用及其對HPA軸的影響。方法健康成年SD大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組、氟西汀組和柏子仁組，每組10只。采用孤養(yǎng)加慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激結(jié)合的方法構(gòu)建抑郁模型，同時(shí)每天給予生理鹽水、鹽酸氟西汀或柏子仁水提物灌胃治療21d。用藥結(jié)束后，觀察各組大鼠的水平穿越格數(shù)、豎立次數(shù)、糖水偏好及大鼠血清ACTH、CORT含量。結(jié)果與模型組相比，用藥組能改善抑郁大鼠水平穿越格數(shù)、豎立次數(shù)及糖水偏愛(P<0.01)；大鼠血清ACTH和CORT含量降低(P<0.01)。結(jié)論柏子仁水提物具有顯著的抗抑郁作用，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)HPA 軸的功能有關(guān)。

關(guān)鍵詞：柏子仁水提物；抑郁癥；HPA軸

抑郁癥具有高自殺率、高致殘率及高患病率的特點(diǎn)，且隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的日益發(fā)展，抑郁癥的發(fā)病率將逐年增高[1, 2]。目前，臨床上治療抑郁癥的西藥存在療效不全(有效率僅70%左右)，毒副反應(yīng)大，起效慢，復(fù)發(fā)率高等許多問題[3, 4]。因此，運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)研究方法從傳統(tǒng)的藥物中開發(fā)研制高效低毒的抗抑郁中藥成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)[5]。柏子仁具有養(yǎng)心安神，鎮(zhèn)靜催眠作用[6]，而柏子仁的抗抑郁作用及其作用機(jī)制未有報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)以孤養(yǎng)加慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激構(gòu)建抑郁大鼠模型，探討柏子仁水提物抗抑郁的作用機(jī)制，為臨床治療抑郁癥提供一定的理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠40只，雌雄各半，SPF級(jí)，體質(zhì)量(220±20)g，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 (許可證號(hào)：SCXK(豫)2010-0002)。

1.1.2主要儀器與試劑酶聯(lián)免疫檢測儀，美國伯樂公司；柏子仁，河南省南陽市醫(yī)藥公司；鹽酸氟西汀，上海醫(yī)藥(集團(tuán))有限公司，批號(hào)20131015；促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)測試盒，皮質(zhì)酮(CORT)測試盒，南京建成生物工程研究所，批號(hào)分別為H097和H205。

1.1.3柏子仁水提物的制備取柏子仁500 g，加自來水2500 ml煎煮2次，合并水煎液，濃縮至1 g/ml，高壓滅菌，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2方法

1.2.1動(dòng)物分組及給藥選用40只表現(xiàn)活躍、對電擊比較敏感、逃避反應(yīng)迅速的大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組、氟西汀組和柏子仁組，每組10只。除對照組外，其它三組大鼠以單只單籠飼養(yǎng)并每天隨機(jī)給予以下刺激的1種：斷食(24 h)、斷水(24 h)、晝夜顛倒(24 h)、夾尾(3 min)、束縛(3 h)、10 ℃冷水游泳(5 min)、電擊足底(電壓為30 V，電擊5 s，間歇5 s，共進(jìn)行300 s)，共21 d的要求建立抑郁模型。每日進(jìn)行應(yīng)激刺激前1 h，藥物組即開始分別給予1.8 mg/kg鹽酸氟西汀、1 g/kg柏子仁水提物灌胃，對照組和模型組每天給予等劑量的生理鹽水灌胃，連續(xù)21d。各組動(dòng)物每周記錄一次體質(zhì)量，調(diào)整用藥劑量。

1.2.2敞箱實(shí)驗(yàn)在造模前1 d及造模第22 d，用敞箱實(shí)驗(yàn)法觀察各組大鼠行為學(xué)改變。觀察時(shí)將單只大鼠置于長寬各125 cm、高40 cm的光潔敞箱中央，敝箱底面用白線劃分為25個(gè)25×25 cm的等邊方格，內(nèi)面涂黑漆，敞箱中央有一昏暗燈光。記錄大鼠5 min內(nèi)水平穿越格數(shù)、豎立次數(shù)。動(dòng)物開始置于中央格，穿越底面方格數(shù)為其水平得分，穿越1格為1分；兩前腿離地或爬墻壁記為垂直運(yùn)動(dòng)，1次為1分。

1.2.3糖水偏好實(shí)驗(yàn)在造模前1 d及造模第22 d進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前禁食禁水14 h，隨后給予每籠一瓶稱量過的正常飲用水200 ml和一瓶1%蔗糖水200 ml，半小時(shí)后，對換兩瓶水的位置，1 h后取兩瓶水定量。計(jì)算動(dòng)物的糖水消耗量、飲用水消耗量、糖水偏好(糖水偏好=糖水消耗/總液體消耗)。

1.2.4血清ACTH及CORT含量測定行為學(xué)結(jié)束后，斷頭處死大鼠，取血采用ELISA法測定大鼠血清ACTH及CORT含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明操作。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠敞箱試驗(yàn)、糖水偏好實(shí)驗(yàn)比較實(shí)驗(yàn)應(yīng)激處理前1 d，各組大鼠敞箱試驗(yàn)水平穿越格數(shù)、豎立次數(shù)和糖水偏好均沒有差異(P>0.05)；應(yīng)激處理21 d后模型組大鼠的敞箱試驗(yàn)水平穿越格數(shù)、豎立次數(shù)和糖水偏好均低于對照組(P<0.01)，表明抑郁模型成功；同時(shí)氟西汀組和柏子仁組以上指標(biāo)較模型組大鼠增高(P<0.01)，表明氟西汀和柏子仁水提物可以明顯改善抑郁樣行為；而氟西汀組和柏子仁組大鼠以上指標(biāo)無顯著差異(P>0.05)，見表1。

表1　柏子仁水提物對抑郁模型大鼠敞箱實(shí)驗(yàn)、糖水偏愛的影響　±s)

注：1)P<0.01 vs對照組，2)P<0.01 vs 模型組

2.2各組大鼠血清ACTH及CORT含量結(jié)果顯示，與對照組相比，模型組大鼠血清ACTH、CORT表達(dá)顯著增加(P<0.01)；與模型組相比，氟西汀組和柏子仁組大鼠ACTH、CORT表達(dá)顯著降低(P<0.01)，氟西汀組和柏子仁組比較上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表2。

組別血清ACTH(mmol/L)血清CORT(mmol/L)對照組9.12±0.899.64±1.21模型組15.74±1.981)16.98±1.531)氟西汀組12.73±1.462)14.71±1.212)柏子仁組13.15±1.522)14.86±1.152)

注：與對照組比較，1)P<0.01；與模型組比較，2)P<0.01

3　討論

抑郁癥是一種以心境低落、興趣喪失、思維遲緩、自我評(píng)價(jià)過低等精神癥狀為主的精神疾病綜合征[7]，嚴(yán)重威脅人類健康、增加社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，因此加強(qiáng)抑郁癥的防治，尋找積極、有效的治療方法，具有非常重要的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)意義。本實(shí)驗(yàn)以孤養(yǎng)加慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激構(gòu)建的抑郁癥模型，因具有應(yīng)激因子多變及不可預(yù)見的特點(diǎn)更接近于人類抑郁癥，是目前較為理想的動(dòng)物模型[8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)過 21d 刺激后，模型組大鼠敞箱試驗(yàn)水平穿越格數(shù)、豎立次數(shù)、糖水偏好均低于正常水平，可體現(xiàn)出抑郁癥大鼠的消化系統(tǒng)障礙、對周圍環(huán)境的好奇度降低及快感缺失，提示模型成功。經(jīng)柏子仁水提物治療后，抑郁模型大鼠上述指標(biāo)均有顯著改善，表明柏子仁水提物可以明顯改善大鼠的抑郁樣行為。

慢性應(yīng)激刺激可以促使下丘腦分泌CRH，CRH 刺激腺垂體分泌ACTH，ACTH 刺激腎上腺皮質(zhì)釋放糖皮質(zhì)激素(動(dòng)物表現(xiàn)為CORT)，從而引起持續(xù)HPA軸功能亢進(jìn)和高皮質(zhì)醇血癥，進(jìn)而出現(xiàn)一系列的抑郁情緒和癥狀[9, 10]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，柏子仁水提物可以顯著降低大鼠血清ACTH、CORT含量，進(jìn)而改善抑郁癥狀。

綜上所述，柏子仁水提物可顯著改善抑郁大鼠抑郁癥狀, 其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)HPA 軸的功能有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1]Wiseman T A, Curtis K, Lam M, et al. Incidence of depression, anxiety and stress following traumatic injury: a longitudinal study[J]. Scand J Trauma Resusc Emerg Med,2014,23(1):1-9.

[2]Cabello M, Caballero F F, Chatterji S, et al. Risk factors for incidence and persistence of disability in chronic major depression and alcohol use disorders: longitudinal analyses of a population-based study[J]. Health Qual Life Outcomes,2014,12(1):186.

[3]Nivoli A M, Colom F, Murru A, et al. New treatment guidelines for acute bipolar depression: a systematic review[J]. J Affect Disord,2011,129(1-3):14-26.

[4]Taylor D, Meader N, Bird V, et al. Pharmacological interventions for people with depression and chronic physical health problems: systematic review and meta-analyses of safety and efficacy[J]. Br J Psychiatry,2011,198(3):179-188.

[5]韓亞娟，周國兒，黃云娟，等. 逍遙舒心膠囊對慢性應(yīng)激抑郁模型小鼠的抗抑郁作用及其機(jī)制[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(23):204-208.

[6]孫付軍，陳慧慧，王春芳，等. 柏子仁皂苷和柏子仁油改善睡眠作用的研究[J]. 世界中西醫(yī)結(jié)合雜志,2010,5(5):394-395.

[7]Nugent N R, Tyrka A R, Carpenter L L, et al. Gene-environment interactions: early life stress and risk for depressive and anxiety disorders[J]. Psychopharmacology (Berl),2011,214(1):175-196.

[8]曹美群，陳德珩，張春虎，等. 抑郁模型大鼠海馬內(nèi)特異性microRNAs的篩選以及柴胡疏肝散的干預(yù)作用[J]. 中國中藥雜志,2013,38(10):1585-1589.

[9]蔡莉，李榮，吳清清，等. 橙皮苷對慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠行為學(xué)及HPA軸的影響[J]. 中國中藥雜志,2013,8(2):229-233.

[10]梁佳，盧峻，王俊仁，等. 不同針刺方法對慢性應(yīng)激抑郁大鼠下丘腦CRH基因表達(dá)及血清ACTH、CORT的影響[J]. 北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,35(4):265-268.

*基金項(xiàng)目：河南省南陽市科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(No.2012 GG070)

doi:10.3969/j.issn.1003-8914.2016.11.019

文章編號(hào)：1003-8914(2016)-11-1559-02

收稿日期：(本文校對：李弋2015-11-19)