單基因遺傳病分析

王谷仙 王琦

（曲靖醫(yī)學高等專科學校，云南 曲靖 655011）

單基因遺傳病分析

王谷仙 王琦

（曲靖醫(yī)學高等專科學校，云南 曲靖 655011）

單基因遺傳病的治療措施主要有：宮內(nèi)治療、替代療法、藥物防治、手術療法和器官移植、代謝療法、飲食療法等；MLPA的應用不依賴患者信息，可有效對DMD/BMD、SMA致病基因拷貝數(shù)進行相對定量，檢出遺傳缺陷攜帶者和提高患者診斷率；HRM分析方法可對臨床β-地中海貧血突變進行快速的分型和突變掃描檢測；同時開展臨床試驗可為最終安全、有效應用于臨床患者奠定基礎。

單基因遺傳病；防控；治療措施

一、單基因遺傳病的防控與治療分析

單基因遺傳病是遺傳病中的主要類型，由一對等位基因或一對同源染色體上單個基因突變引起，主要分為常染色體顯性遺傳病、常染色體隱性遺傳病、X連鎖顯性遺傳病、X連鎖隱性遺傳病、Y連鎖遺傳病。單基因遺傳病的防控措施主要有:加強遺傳病知識的宣傳，遠離外界環(huán)境誘變因素，開展遺傳咨詢，婚姻指導，婚前檢查，產(chǎn)前診斷，遺傳病癥狀出現(xiàn)前的預防等。單基因遺傳病的治療措施主要有:宮內(nèi)治療、替代療法、藥物防治、手術療法和器官移植、代謝療法、飲食療法等。

二、MLPA技術在單基因遺傳病DMD/BMD、SMA基因診斷中的應用

更多還原 ①MLPA檢測到5位患者已知位點及其相鄰位點存在缺失突變。說明MLPA檢測范圍廣，結果準確可靠。②18位DMD患者進行了缺失熱區(qū)21個外顯子的檢測，診斷率為66.7%（12/18），應用MLPA技術后，在3個未篩查到缺失突變的DMD家系中發(fā)現(xiàn)了重復突變，DMD患者診斷率提高到83.3%（15/18）。聯(lián)合應用MLPA檢測、缺失熱區(qū)突變篩查和遺傳連鎖分析可為18個有患者參與診斷的DMD家系提供信息，診斷率達100%（18/18）。③連鎖分析需在有患者參與的前提下才能進行攜帶者的篩查，而MLPA不依賴患者參與，即可對疑似攜帶者的致病基因行直接診斷。本研究應用MLPA篩查到11位DMD女性攜帶者（其中5位來自無患者信息的家系），結果經(jīng)實時熒光定量PCR驗證無誤。攜帶者診斷率為50%（11/22）。④一例產(chǎn)前診斷胎兒SRY檢測為陰性，其未遺傳到母親的缺陷基因，排除攜帶者身份。⑤5個家系（家系6-10）經(jīng)遺傳連鎖分析提示，患者X致病染色體均遺傳自其母親。應用MLPA發(fā)現(xiàn)這5個家系DMD患者母親基因型正常，推知患者的缺失突變系新發(fā)生突變，突變新發(fā)生率為35.7%（5/14）。僅依靠連鎖分析篩查攜帶者有可能發(fā)生誤診，故生育指導時，仍需對疑似攜帶者行直接基因診斷。SMA：①4位SMA患者MLPA檢測結果：1號患者SMN1純合缺失；2號患者一拷貝SMN1缺失，另一拷貝轉(zhuǎn)變?yōu)镾MN2；3、4號患者基因型均表現(xiàn)為一拷貝SMN1裝變?yōu)镾MN2，另一拷貝僅7號外顯子轉(zhuǎn)變?yōu)镾MN2外顯子7。MLPA可判斷SMN1是發(fā)生了缺失還是轉(zhuǎn)換，檢測結果比PCR-酶切法更詳細。②PCR-酶切法不能篩查攜帶者，MLPA對12位SMA疑似攜帶者的SMN1/2基因拷貝數(shù)進行了相對定量，確定了攜帶者身份，為其再生育提供了有利信息，攜帶者診斷率為100%（12/12）。③本課題發(fā)現(xiàn)了8種SMN基因型。結論MLPA是一種高效、靈敏、準確、性價比較高的DMD/BMD、SMA分子診斷新方法。MLPA的應用不依賴患者信息，可有效對DMD/BMD、SMA致病基因拷貝數(shù)進行相對定量，檢出遺傳缺陷攜帶者和提高患者診斷率。

三、HRM分析檢測單基因遺傳病點突變及β-地中海貧血的臨床檢測

妊娠雖然可使HbA2的水平稍微升高，但是并未影響到HbA2對β-地中海貧血攜帶者的篩查作用，不論在孕婦還是非孕婦中，HbA2均有很好的篩查β-地中海貧血攜帶者的價值。第二章應用HRM分析檢測β-地中海貧血基因點突變目的應用上述建立的HRM分析方法對未知基因型的標本進行β-珠蛋白基因檢測，探討其臨床應用的可行性。方法1.應用上述第一部分優(yōu)化的條件方法對未知基因型的標本進行檢測。2.選取60個標本，其中包含5個血液學和HbA2確認的β-地中海貧血攜帶但是RDB方法沒發(fā)現(xiàn)異常的標本，先進行HRM分析檢測再進行RDB或β-珠蛋白序列測序檢測進行結果比較。3.進行HRM分析檢測時加入中國最常見的β？地中海貧血雜合突變基因型標本作陽性對照及正常野生型標本作為陰性對照。結果P1+P2引物的反應產(chǎn)物中，有一個標本通過與RDB和測序檢測結果相比較發(fā)現(xiàn)為假陽性。其它檢測出存在突變的標本的曲線均與陽性對照分型一致。5個外送的血液學提示β-地中海貧血攜帶的標本中均在掃描時發(fā)現(xiàn)有異常曲線，經(jīng)測序檢測確認為一個Hb G-Coushatta即HBB:c.68A〉C、一個Cd37 （TGG〉TAG）即HBB:c.113G〉A、一個Hb L’Aquila即HBB:c.319C〉G和兩個Hb New York即HBB:c.341T〉A雜合突變，其余結果與RDB方法或測序方法確定的基因型一致。結論HRM分析方法可對臨床β-地中海貧血突變進行快速的分型和突變掃描檢測。

四、遺傳病的生物治療

隨著生命與醫(yī)學科學的發(fā)展，近年來以靶向致病分子或其相關信號通路、靶分子的外源物質(zhì)補充、轉(zhuǎn)基因、RNA干擾、基因組編輯等生物學技術為代表的生物學治療措施開始應用于遺傳病的治療，并取得了一定的療效。但目前大多數(shù)遺傳病的生物學治療仍局限于動物實驗研究，今后在繼續(xù)研發(fā)基于致病機制的新治療策略的同時，將關注如何開展臨床試驗，為最終安全、有效應用于臨床患者奠定基礎。

［1］劉振興1，2，崔亞洲1，劉超1，2，欒靜1，周小艷1，韓金祥1.成纖維細胞生長因子受體基因野生型和 E731K突變型真核表達質(zhì)粒的構建及鑒定［J］.中國生物制品學雜志.2014（05）

［2］李，袁，許燁燁，方慧琴，叢 *.Ⅳ型成骨發(fā)育不全家系的遺傳分析［J］.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展.2015（03）

［3］鄒新博，梅栩彬，趙立民，劉文君.阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征合并馬凡氏綜合征1例［J］.山東大學耳鼻喉眼學報.2015（05）

R596.2

A

1671-864X（2016）07-0171-01