郁金散對大腸濕熱證大鼠血流變和血常規(guī)的影響

王福男（甘肅農業(yè)大學動物醫(yī)學院，甘肅 蘭州 730070）

郁金散對大腸濕熱證大鼠血流變和血常規(guī)的影響

王福男
（甘肅農業(yè)大學動物醫(yī)學院，甘肅 蘭州 730070）

目的：探討不同劑量的郁金散對大腸濕熱證大鼠血流變和血常規(guī)的影響，為臨床應用提供依據(jù)。方法：將60只Wistar大鼠隨機分為6組：正常對照組（A組）、模型組（B組）、自愈組（C組）、高劑量治療組（D組）、中劑量治療組（E組）、低劑量治療組（F組），每組10只，實驗采用“高糖高脂飲食+高溫高濕環(huán)境+生物因子”綜合因素造模，造模后給予不同劑量的郁金散進行治療，觀察治療前后大鼠的一般行為學并測定血液流變學和血常規(guī)的相關指標。結果：（1）造模后大鼠表現(xiàn)大便溏或有粘液，被毛泛黃，體溫升高，食欲減退等，符合大腸濕熱證所表現(xiàn)的癥狀；（2）與A組比較，B組的全血高、低切黏度極顯著高于A組（P＜0.01）；與B組相比，C、E、F組的的全血高、低切黏度顯著低于B組（P＜0.05），D組的全血高、低切黏度極顯著低于B組（P＜0.01）；（3）與A組比較，B組的紅細胞數(shù)目、白細胞數(shù)目、中性粒細胞數(shù)目、紅細胞壓積以及血紅蛋白濃度和A組的差異極顯著（P＜0.01）；與B組比較，C、E、F組的這些指標均顯著低于B組（P＜0.05），但D組的這些指標極顯著低于B組（P＜0.01）。結論：各劑量的郁金散對大鼠大腸濕熱證均有治療效果，其中高劑量效果最好。

郁金散；大腸濕熱證；血流變；血常規(guī)

郁金散出自《元亨療馬集》，是治療馬的濕熱泄瀉的著名方劑，其主要功能為清熱解毒，澀腸止瀉。方中郁金清熱涼血，行氣散瘀，為主藥；黃連、黃芩、黃柏、梔子清三焦郁火兼化濕熱，為輔藥；白芍、訶子斂陰澀腸而止瀉，更以大黃清血熱、下積滯，共為佐藥［1］?，F(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)，郁金散方劑中的郁金能降低紅細胞的聚集性，提高紅細胞的變形能力以及減少自由基對紅細胞膜的損傷，延長其壽命，維持正常的血液黏度［2］。本文就郁金散對大腸濕熱證大鼠的作用進行研究，為臨床應用提供科學依據(jù)。

中醫(yī)濕熱證以脾胃濕熱證為主，因為脾胃位于中焦，脾為濕臟，胃為燥腑，容易滋生濕熱之邪。薛生白云：“中氣實則病在陽明，中氣虛則病在太陰，太陰內傷，濕飲停聚，客邪再至，內外相引，故病濕熱，此皆先有內傷，再感客邪［3］”。脾胃濕熱下注大腸則成為大腸濕熱證?！秲冉?jīng)》云：“暴注下迫，皆屬于熱”。濕熱蘊結，困擾脾土，脾失健運，運化失常，則清濁不分，水谷混雜而下，并走大腸則成大腸濕熱證泄瀉。大腸濕熱證的病機有外感暑濕邪氣，或因飲食不節(jié)［4］。大腸濕熱證以發(fā)熱、大便溏而不爽或有粘液等為必備主要臨床癥狀。

王新華［5］在模擬長夏氣候因素，飲食不節(jié)、過食肥甘基礎上再施以大腸桿菌內毒素，復制成溫病濕熱模型。本次試驗以“高糖高脂飲食加高溫高濕環(huán)境加大腸桿菌刺激”建立大腸濕熱證大鼠模型，用高糖高脂飲食使得大鼠飲食不節(jié)，過食肥甘，損傷脾胃，脾傷則運化水濕功能失常和脾失健運；再人工創(chuàng)造濕熱環(huán)境，模擬外感濕熱病邪而形成濕熱證［6］。造模完成后給予郁金散水煎劑進行干預，通過檢測大鼠血常規(guī)以及血液流變學各項指標來為探討郁金散對大腸濕熱證的作用機理作鋪墊。

1　材料與方法

1.1 實驗動物

Wistar大鼠60只，雌雄各半，體重180～220 g，由蘭州大學實驗動物中心提供，許可證號SCXK（甘）2013-0002。適應環(huán)境3 d后進行實驗。實驗室溫度為22～25 ℃，相對濕度45 %～65 %，晝夜12/12 h明暗交替。

1.2 實驗藥物

郁金散水煎劑：郁金36 g，訶子18 g，黃芩36 g，大黃72 g，黃連36 g，梔子36 g，白芍18 g（比例按照文獻［1］）。中藥經(jīng)三次水煎煮后合并三次濾液，低溫濃縮至1.04 g/mL，即濃縮成277 mL，郁金散高、中、低灌胃分別以200 %、100 %、50 %郁金散藥液。高劑量組給藥1.04 g/100 g，中劑量組給藥0.52 g/100 g，低劑量組給藥0.26 g/100 g。

1.3 大腸桿菌

大腸桿菌菌號為O101。

1.4 試劑

水合氯醛（上海展云化工有限公司，批號1402207）、氯化鈉（國藥集團化學試劑有限公司，批號20150410）、牛肉膏（北京奧博星生物技術有限責任公司，批號20131018）、營養(yǎng)瓊脂（青島高科園海博生物技術有限公司，批號20140807）、蛋白胨（北京奧博星生物技術有限責任公司，批號20140318）

1.5 儀器

TDZ4-WS低速離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）；旋轉蒸發(fā)器RE-6000（上海亞榮生化儀器廠）；LBY-N6A型RHEOMETER全自動血液流變儀（北京普利生公司）；

全自動血液細胞分析儀BC-5300Vet（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）。

1.6 實驗動物分組及處理

將60只Wistar大鼠隨機分為正常對照組（A組）、大腸濕熱證模型組（B組）、自愈組（C組）、郁金散高劑量治療組（D組）、郁金散中劑量治療組（E組）和低劑量治療組（F組）6組，每組10只。造模需18 d，實驗共用23 d。造模過程如下：（1）A組自然環(huán)境下飼養(yǎng)。（2）B組：高糖高脂飼養(yǎng)10 d（隔天禁食，隔天給予充足飼料并灌胃豬油4 mL/200 g，30 %蜂蜜水自由飲水）。然后將大鼠置于高溫高濕環(huán)境中（溫度32～35 ℃，相對濕度85～95 %），持續(xù)9 h，灌酒1 mL/100 g（56度紅星二鍋頭），連續(xù)5 d。最后腹腔注射大腸桿菌（0.2 mL/100 g），24 h后再注射一次，自然環(huán)境下飼養(yǎng)1 d后處死，腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠，腹主動脈采血，分別用EDTA-K2采血管和肝素鈉抗凝管采集血液。（3）高中低劑量的郁金散治療組造模結束后灌胃相應劑量的郁金散，自愈組灌胃相應體積的生理鹽水，5 d后處死，處死及采血方法同模型組。

1.7 觀測指標及方法

1.7.1 一般行為學觀察

觀察大鼠的一般行為學，包括肛溫，精神活動，飲水量，采食量，尿量以及糞便等。

1.7.2 血黏度檢測

取腹主動脈血2 mL，肝素抗凝，用全自動血液流變儀進行血液流變學測定，主要包括全血低切黏度和高切黏度。

1.7.3 血常規(guī)檢查

用全自動血液細胞分析儀進行血常規(guī)檢測，主要包括紅細胞數(shù)目、白細胞數(shù)目、中性粒細胞數(shù)目、紅細胞壓積、血紅蛋白濃度。

1.8 統(tǒng)計分析

2　結果與分析

2.1 大鼠行為學觀察

A組：大鼠活躍，毛發(fā)有光澤，食欲良好，飲水量，尿量以及肛溫正常。

B組：高糖高脂時期大鼠活躍，體重增長較快，飲食飲水量正常，糞便成形，較A組稍軟，高溫高濕時期大鼠精神不振，食欲減退，被毛泛黃，攻毒期間大鼠眼睛半閉并有分泌物，身體蜷縮，肛周紅腫肛門松弛，肛門周圍及尾部粘有黃色粘液稀便，大便味臭，肛溫較A組升高。

C組：造模前癥狀同B組，造模后肛溫繼續(xù)上升，高于A組，體重開始下降后逐漸上升。尿量，飲水量減少，采食量開始減少后逐漸增加，仍有大鼠拉稀。

D、E、F組：用藥前癥狀同B組，用藥后大鼠體重有所增加，但未達到高糖高脂時期體重，采食量，飲水量和尿量增加。D組大鼠肛溫開始下降接近A組，糞便較A組稍軟，大鼠精神有所好轉。E組大鼠肛溫先繼續(xù)上升，用藥兩天后開始下降接近A組，F(xiàn)組大鼠肛溫開始上升，但用藥兩天后開始下降，但高于A組。仍有大鼠拉稀軟糞便。

2.2 血液流變學指標檢測結果

由表1可見，與A組相比，B組的全血低切和高切黏度都極顯著高于A組（P＜0.01），表明大腸濕熱證模型組的血液粘稠度高于正常對照組，說明模型復制成功。與B組相比，D組的全血低切和高切黏度極顯著低于B組（P＜0.01），C、E、F組的全血高、低切黏度顯著低于B組（P＜0.05），表明該模型有一定的自愈能力，且高劑量的郁金散治療效果最好。

表1 造模后各組大鼠血黏度的比較（±s，n=10）

表1 造模后各組大鼠血黏度的比較（±s，n=10）

注：與A組相比，bP ＜0.01；與B組相比，cP＜0.05，aP＜0.01

項目（m P a · s）　A組　B組　C組　D組　E組　F組全血低切黏度　1 0 . 7 2 ± 0 . 7 2a　1 5 . 3 4 ± 0 . 3 5b　1 3 . 4 7 ± 0 . 3 5c　1 0 . 9 2 ± 0 . 2 5a　1 2 . 2 1 ± 0 . 3 5c　1 3 . 4 7 ± 0 . 2 6c全血高切黏度 　3 . 5 9 ± 0 . 2 0a　4 . 6 5 ± 0 . 1 8b　4 . 1 6 ± 0 . 2 6c　3 . 3 5 ± 0 . 0 3a　4 . 0 7 ± 0 . 2 6c　4 . 1 0 ± 0 . 3 1c

2.3 血常規(guī)測定結果

由表2可知，與A組相比，B組的紅細胞數(shù)、白細胞數(shù)、紅細胞壓積、中性粒細胞數(shù)和血紅蛋白濃度極顯著高于A組（P＜0.01），與B組相比，C、E、F組的紅細胞數(shù)、白細胞數(shù)、紅細胞壓積、中性粒細胞數(shù)和血紅蛋白濃度顯著低于B組（P＜0.05），D組的紅細胞數(shù)、白細胞數(shù)、紅細胞壓積、中性粒細胞數(shù)和血紅蛋白濃度極顯著低于B組。結果表明了該模型具有一定的自愈能力，三種不同劑量的郁金散對該模型均有治療效果，其中經(jīng)高劑量治療后大鼠的恢復程度較好。

表2 造模后各組大鼠血常規(guī)的比較（±s，n=10）

表2 造模后各組大鼠血常規(guī)的比較（±s，n=10）

注：與A組相比，bP＜0.01；與B組相比，cP＜0.05，aP＜0.01

項目　A組　B組　C組　D組　E組　F組紅細胞數(shù)/ × 1 012· L-1　6 . 6 2 ± 0 . 2 8a　1 3 . 9 2 ± 0 . 3 9b　1 1 . 4 8 ± 0 . 3 5c　6 . 6 7 ± 0 . 6 3a　8 . 4 4 ± 0 . 3 4d　9 . 4 9 ± 0 . 3 5e白細胞數(shù)/ × 1 09· L-1　1 3 . 9 9 ± 0 . 5 5a　3 7 . 2 1 ± 3 . 7 7b　2 4 . 1 6 ± 2 . 1 5c　1 4 . 7 4 ± 0 . 8 8a　1 7 . 8 5 ± 1 . 1 4d　2 2 . 1 4 ± 2 . 2 6c紅細胞壓積/% 　3 8 . 5 5 ± 4 . 4 2a　7 1 . 3 1 ± 5 . 0 1b　5 5 . 1 4 ± 2 . 6 1c　4 0 . 5 1 ± 2 . 1 3a　4 4 . 0 0 ± 3 . 2 9d　5 1 . 0 6 ± 2 . 9 6e中性粒細胞數(shù)/ × 1 09· L-1　5 . 0 8 ± 0 . 4 4a　1 7 . 3 0 ± 1 . 9 1b　1 1 . 0 1 ± 0 . 5 6c　6 . 1 2 ± 0 . 4 6a　8 . 2 8 ± 0 . 4 9d　1 0 . 2 6 ± 1 . 4 7c血紅蛋白濃度/ g · L-1　1 3 8 . 6 3 ± 1 2 . 6 5a　2 5 9 . 8 8 ± 1 6 . 4 7b　1 7 8 . 7 5 ± 3 1 . 5 4c　1 4 9 . 1 3 ± 4 . 0 5a　1 6 4 . 5 0 ± 1 1 . 1 0cd　1 7 2 . 0 0 ± 1 4 . 9 7c

3　討論

3.1 大鼠大腸濕熱證模型的建立

本實驗采用“高糖高脂飲食+高溫高濕環(huán)境+生物因子”綜合因素造模，造模后大鼠都有不同程度的拉稀，精神沉郁，食欲減退，嗜臥，被毛泛黃粗亂，肛周紅腫，肛門周圍粘有稀便，味臭。大腸濕熱證以發(fā)熱，大便溏而不爽或有粘液，糞便色黃而臭等為必備主要臨床癥狀。因此一般癥狀符合大腸濕熱證的癥狀，造模基本成功。對實驗大鼠給予高糖高脂飲食，一方面可以使大鼠在短期內增加體質量，另一方面長期給予高糖高脂飲食，可造成大鼠脾胃功能損傷，為脾胃濕熱提供了前提條件［7］。外部濕熱可以造成脾胃功能失調，張六通等［8］模擬自然發(fā)病環(huán)境，通過控制氣候箱的溫濕度來研究外濕致病機理，結果濕熱組出現(xiàn)納呆少飲，消瘦，大便不成形或稀便等癥狀。所以模擬濕熱環(huán)境是大腸濕熱證動物模型的一個關鍵因素。

3.2 郁金散對大腸濕熱證大鼠血流變的影響

郁金散方劑中郁金具有調節(jié)免疫功能，抑制中樞神經(jīng)，改善血液流變性，抗自由基損傷等作用［9］。黃連、黃柏和黃芩這三味藥都可以廣泛用于多種濕熱病，其中黃連主要作用在腸胃，尤其是大腸濕熱的濕性痢疾，所以黃連為中獸醫(yī)治療濕性痢疾的首選藥。梔子用于火毒熾盛，三焦俱熱配伍三黃。段文卓等［10］通過紅細胞的聚集性實驗，發(fā)現(xiàn)郁金可以提高紅細胞的變形能力及抗氧化、免疫粘附能力減少了自由基對紅細胞模的損傷，延長其壽命，維持正常的血液黏度。

本次實驗發(fā)現(xiàn)模型組的全血高低切粘度均高于正常對照組，血液黏滯性增加明顯，提示其紅細胞變形能力下降，紅細胞聚集性增加及血液粘稠度增大，這符合中醫(yī)“血淤”征候所體現(xiàn)的血液“濃、黏、聚”的特點。中醫(yī)理論認為濕為陰邪，易阻礙氣機，氣機不利血運不暢極易致瘀；熱為陽邪，其性炎上，煎熬津液，阻塞經(jīng)脈也易致血瘀。大量研究表明濕熱證與血流變有密切的聯(lián)系［11］。經(jīng)治療后，各劑量的郁金散均有一定的治療效果，其中高劑量組的全血高低切粘度和正常對照組無顯著性差異。說明高劑量的郁金散對大腸濕熱證血液流變學指標有明顯的調節(jié)作用。

3.3 郁金散對大腸濕熱證大鼠血常規(guī)的影響

實驗結果表明模型組大鼠的白細胞數(shù)和中性粒細胞數(shù)相比正常對照組數(shù)量極劇增多，劉光華等發(fā)現(xiàn)濕證動物模型可表現(xiàn)為免疫功能的下降，炎癥與濕熱證本質有關［12］。此外，模型組大鼠的紅細胞壓積和血紅蛋白濃度也明顯高于正常對照組，提示了造模后大鼠的紅細胞聚集性增加，郁金散方劑中郁金的作用機制是將紅細胞壓積明顯降低，發(fā)揮出解聚紅細胞聚集的作用［13］。與模型組相比，經(jīng)郁金散治療后，不同劑量組大鼠的血常規(guī)指標均有所恢復，其中高劑量治療組的血常規(guī)這些指標與正常對照組組差異不顯著，因此說明高劑量的郁金散對大腸濕熱證血常規(guī)指標有明顯的調節(jié)作用。

4　結語

本實驗通過“高糖高脂飲食+高溫高濕環(huán)境+生物因子”綜合因素復制大腸濕熱證模型，造模后并給予不同劑量郁金散進行治療。通過郁金散對血流變學和血常規(guī)指標的改善說明了郁金散對大腸濕熱證可能具有一定的治療作用，其中高劑量的郁金散的治療效果較好。另外，該模型具有一定的恢復能力，但是恢復能力不如郁金散治療組。

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（編輯：晏兵兵）

S858

A

1006-799X（2016）13-0090-04