川芎嗪治療重癥急性胰腺炎的實驗研究

王　琳，邢淑芳

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川芎嗪治療重癥急性胰腺炎的實驗研究

王琳1*，邢淑芳2

1.唐山市豐南區醫院，河北 唐山 063300；2.武安市第一人民醫院，河北 武安 056300

[摘要]目的探討川芎嗪對大鼠重癥急性胰腺炎的治療作用及其機制。方法30只SD大鼠隨機分為假手術組、重癥急性胰腺炎組(胰腺炎組)和川芎嗪治療組(治療組),每組10只。以L-精氨酸注射法制作大鼠重癥急性胰腺炎模型，治療組大鼠在制模成功后給予川芎嗪治療，在實驗后24 h采集標本，比較不同組大鼠胰腺組織HE染色結果，血清淀粉酶、白介素-6(IL-6)、TNF-α水平及胰腺濕/干比率。結果胰腺炎組和治療組大鼠血清淀粉酶、IL-6和TNF-α水平均顯著高于假手術組，差異有統計學意義(P<0.05)，治療組大鼠血清淀粉酶[(883.75±143.25)U/L vs.(1 031.94±146.59)U/L]、IL-6[(148.65±18.94)pg/L vs.(185.79±17.49)pg/L]和TNF-α[(109.31±123.65)pg/mL vs.(155.79±17.49)pg/mL]均低于胰腺炎組，差異有統計學意義(P<0.05)。治療組大鼠胰腺濕/干比率(9.8±0.7)低于胰腺炎組(12.5±0.8)，差異有統計學意義。結論川芎嗪可通過降低重癥急性胰腺炎大鼠的血清淀粉酶、IL-6和TNF-α水平發揮治療作用。

[關鍵詞]川芎嗪；重癥急性胰腺炎；淀粉酶；白介素-6；TNF-α

0　引言

急性胰腺炎是以胰腺水腫、出血壞死、炎性細胞浸潤為特征的胰腺炎性疾病，常伴有全身各系統的炎癥反應綜合征以及多器官功能衰竭[1]，病死率高達20%～30%[2]。因此，如何有效治療重癥急性胰腺炎，防止并發癥的發生是目前研究的重點。川芎嗪是一種含有多種成分的中藥，具有抗氧化、清除氧自由基、改善微循環的作用[3]，廣泛用于治療心腦血管疾病。近年研究顯示，川芎嗪可降低血清中TNF-α等多種炎癥因子[4]，其可能在重癥急性胰腺炎過程中發揮一定的保護作用，但相關研究尚較少。本研究通過在重癥急性胰腺炎大鼠中應用川芎嗪進行治療，探討川芎嗪對重癥急性胰腺炎的治療效果及其可能機制，為合理治療重癥急性胰腺炎提供科學依據。

1　材料

1.1實驗動物健康純種雄性Sprague-Dawley大鼠[購自北京市實驗動物養殖中心，許可證號：SCXK(京)2010-0010]30只，年齡3～6個月，體重300～350 g，專門實驗室飼養員統一飼養，隔日換墊料，室溫溫度保持20～25 ℃。

1.2試劑L-精氨酸粉末由加拿大BBI公司生產，分析純級。川芎嗪注射液由無錫市第七制藥廠生產，批號：2014012606。TNF-α測定試劑盒購自上海微蒙生命科技有限公司。

2　方法與結果

2.1三組大鼠胰腺組織HE染色結果比較采用單純隨機分組方法，將實驗動物隨機分為假手術組、重癥急性胰腺炎組(胰腺炎組)、川芎嗪治療組(治療組)，每組10只。假手術組大鼠打開腹腔、翻動胰腺組織后關腹，同期給予生理鹽水腹腔注射。其他兩組大鼠均采用L-精氨酸腹腔注射法進行重癥急性胰腺炎模型制備，將L-精氨酸粉末20 g溶解于100 mL 0.9%的氯化鈉溶液中，攪拌，直至溫度達到30 ℃左右，以NaOH調整溶液pH值至7.0，配成20%的L-精氨酸溶液。大鼠于制模前12 h禁食水。將配制好的20% L-精氨酸溶液分2次腹腔內注射(2 000 mg/kg)，每次間隔1 h。治療組大鼠在制備模型后5 min，將川芎嗪注射液(20 mg/kg)通過股靜脈給藥1次。

所有大鼠均于實驗24 h處死，處死大鼠經上腹正中切口入腹，觀察胰腺大體變化，取一半體、尾部胰腺組織，石蠟包埋后連續切片，厚度約5 μm，以經粘片劑處理過的載玻片撈片，晾干后置于60 ℃烤箱烘烤4 h后行HE染色，光鏡下觀察組織學改變。

結果顯示，假手術組大鼠胰腺組織染色切片顯示，胰腺組織細胞結構完整，紋理清晰，腺泡細胞排列整齊，未見炎癥細胞浸潤及細胞破壞。胰腺炎組大鼠大體可見胰腺腺體增大、肥厚，呈暗紫色，壞死灶散在分布，壞死較重；鏡下見脂肪壞死，腺泡破壞較多，血管影較少，部分被消化，大片狀出血，腺泡及小葉結構模糊不清。川芎嗪治療組大鼠鏡下見組織結構紊亂，紋理交錯，腺泡細胞點狀壞死，少量炎癥細胞浸潤(圖1)。

圖1　不同組大鼠胰腺組織HE染色結果(×200)

2.2三組大鼠血清淀粉酶、白介素-6(IL-6)和TNF-α水平測定所有大鼠于實驗24 h處死后，采集靜脈血，采用人工碘比色法測定血清淀粉酶，采用平衡法測定IL-6水平。TNF-α水平測定采用ELISA法。結果顯示，胰腺炎組和川芎嗪組大鼠血清淀粉酶、IL-6、TNF-α水平顯著高于假手術組，差異有統計學意義(P<0.05)。治療組大鼠血清淀粉酶、IL-6、TNF-α水平低于胰腺炎組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1　各組大鼠血清淀粉酶、IL-6和TNF-α水平測定

注：*與假手術組比較，P<0.05；#與胰腺炎組比較，P<0.05

2.3三組大鼠胰腺組織濕/干比率三組大鼠于24 h處死后,分別切取一半胰腺組織于電子天平上稱重,為濕質量；再將切取的胰腺組織于80 ℃烘干24 h至質量不變為止,為干質量,計算胰腺的濕/干比率。結果顯示，胰腺炎組(12.5±0.8)及治療組(9.8±0.7)大鼠胰腺濕/干比率，均高于假手術組(3.5±0.4),差異有統計學意義(P<0.05)；治療組大鼠胰腺濕/干比率低于胰腺炎組大鼠，差異有統計學意義(P<0.05)。

3　討論

重癥急性胰腺炎可引起局部和全身性的炎癥反應，最后導致嚴重的并發癥，因此，如何預防和控制重癥急性胰腺炎的發生發展是目前研究的熱點和重點問題。由于重癥急性胰腺炎病因多樣，病情易發生變化，單純的西醫治療和手術治療已不能有效地控制及治療本病，中藥對本病的治療作用逐漸引起人們關注[5]。目前，臨床上用于治療該病的單味中藥主要有大黃、芒硝、丹參等[6-7]，關于川芎嗪對重癥急性胰腺炎的治療作用研究尚較少。

川芎嗪的主要成分是川芎嗪多糖和皂苷,具有抗炎、抗氧化、清除自由基、抑制白細胞急驟增加、抑制血小板及血栓形成等作用[8]。烏日娜等[9]對川芎嗪治療大鼠腦損傷的效果進行了研究，結果顯示，川芎嗪可通過降低炎癥因子水平發揮腦保護作用，提示川芎嗪對炎癥性疾病可能有一定的治療作用，而重癥急性胰腺炎患者往往有明顯的全身炎癥反應。因此，本研究采用川芎嗪對重癥急性胰腺炎進行治療。

結果顯示，治療組大鼠血清淀粉酶、IL-6、TNF-α水平均低于同期未治療組，差異有統計學意義。HE染色結果也顯示，治療組大鼠胰腺組織充血程度和炎癥細胞浸潤程度好于未治療組。此外，治療組大鼠胰腺濕干比率顯著低于胰腺炎組，進一步證實川芎嗪治療可有效減輕細胞炎癥反應，對胰腺發揮一定的保護作用。有研究發現，川芎嗪可明顯降低黏附分子的表達、降低微血管通透性、改善微循環障礙，進而減輕細胞損傷[10]。川芎嗪還可通過降低NF-κB mRNA表達水平，阻斷胰腺炎過程中炎癥介質的瀑布樣級聯反應，進而減少炎癥因子的產生[11]，這可在一定程度上解釋川芎嗪治療減少血清淀粉酶、IL-6和TNF-α水平的原因。血清淀粉酶、IL-6、TNF-α水平是重癥急性胰腺炎的重要診斷指標和預后指標，其升高水平與胰腺損傷程度及并發癥發生率有一定的相關性[12-13]。本研究證實這些指標與重癥急性胰腺炎的嚴重程度密切相關，降低這些指標可能有助于減少重癥急性胰腺炎并發癥的發生。

綜上所述，川芎嗪可通過抑制大鼠重癥急性胰腺炎后血清淀粉酶、IL-6和TNF-α水平發揮治療作用，提示在疾病早期應及時治療，以降低炎癥反應，減少并發癥，進而降低死亡率。

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收稿日期：2015-11-03

*通信作者

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201607013

Experimental study of ligustrazine in the treatment of severe acute pancreatitis

WANG Lin1*，XING Shu-fang2

(1.Fengnan District Hospital,Tangshan 063300,China;2.First People′s Hospital of Wu′an City,Wu′an 056300,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the effect and the mechanism of ligustrazine in the treatment of severe acute pancreatitis (SAP) in rats.MethodsThirty SD rats were randomly divided into sham operation group (n=10),SAP group (n=10),and ligustrazine treatment group (n=10).L-aginine injection method was used to manufacture SAP model in rats.Ligustrazine was used to treat SAP for 24 h in rats.The pathological change of pancreatic tissue,serum amylase level,serum interleukin-6 level,TNF-α level and wet/dry ratio among different groups in rats were compared.ResultsSerum amylase level,serum interleukin-6 level and TNF-α level in rats of SAP group and ligustrazine treatment group were significantly higher than those of sham operation group (P<0.05).Serum amylase level [(883.75±143.25)U/L vs.(1 031.94±146.59)U/L],serum interleukin-6 level [(148.65±18.94)pg/L vs.(185.79±17.49)pg/L] and TNF-α level [(109.31±123.65)pg/mL vs.(155.79±17.49)pg/mL] of ligustrazine treatment group were lower than those of SAP group,there being significant differences(P<0.05).The wet/dry ratio of ligustrazine treatment group (9.8±0.7) was less than that in SAP group (12.5±0.8),there being significant difference.ConclusionLigustrazine is effective in treating severe acute pancreatitis in rats by decreasing the level of serum amylase,interleukin-6 and TNF-α.

Key words：Ligustrazine;Severe acute pancreatitis;Amylase;Interleukin-6;TNF-α