磁性附著體中軟磁合金引起小鼠成纖維細(xì)胞L929凋亡的研究

于學(xué)垠

（沈陽(yáng)市第七人民醫(yī)院口腔科，遼寧 沈陽(yáng) 110003）

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磁性附著體中軟磁合金引起小鼠成纖維細(xì)胞L929凋亡的研究

于學(xué)垠

（沈陽(yáng)市第七人民醫(yī)院口腔科，遼寧 沈陽(yáng) 110003）

【摘要】目的 研究磁性附著體中軟磁合金對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞L929凋亡的影響，進(jìn)而評(píng)價(jià)其生物相容性。方法 提取含鈦合金、軟磁合金、鈷鉻合金的浸提液，分別以25%、50%、100%濃度處理L929細(xì)胞24 h，并測(cè)量細(xì)胞凋亡率（AP）。結(jié)果 隨著金屬浸提液濃度的增加，L929細(xì)胞凋亡率亦增加，軟磁合金與含鈦合金及鈷鉻合金之間AP值的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)為磁性附著體的臨床應(yīng)用提供一定的生物學(xué)依據(jù)。磁性附著體中軟磁合金的生物相容性要求合臨床應(yīng)用材料的要求，可以在臨床推廣。

【關(guān)鍵詞】生物相容性；磁性附著體；凋亡

磁性附著體是一種可以增加義齒的固位和穩(wěn)定的裝置，主要的作用原理是磁性材料之間的磁力作用，使義齒吸附到基牙或種植體上［1-3］。由于其磁性附著體的銜鐵選用高級(jí)的軟磁合金，具有優(yōu)良的機(jī)械性能和耐腐蝕性。對(duì)于軟磁合金的細(xì)胞毒性，已進(jìn)行過(guò)相應(yīng)的研究［4］。對(duì)于其引起的細(xì)胞凋亡，國(guó)內(nèi)外研究較少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)軟磁合金材料浸提液處理小鼠成纖維細(xì)胞L929，以確定軟磁合金引起的細(xì)胞凋亡率（apoptotic rate，AP），從而為磁性附著體的臨床應(yīng)用安全性等問(wèn)題提供生物學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料：含鈦合金（森田公司，日本）、軟磁合金（中國(guó)科學(xué)院金屬研究所）、鈷鉻合金（登士柏公司，美國(guó)），小鼠成纖維細(xì)胞L929（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤研究所）。

1.2方法

1.2.1浸提液的制備：將三種金屬材料制成圓片形，浸在RPMI-1640培養(yǎng)液中，取得材料浸提液。試劑與金屬材料之間的比例按照0.1 mL/cm2，在冰箱里保存，溫度為-70 ℃，每48 h收集一次。

1.2.2材料浸提液與細(xì)胞接種培養(yǎng)：選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的小鼠成纖維細(xì)胞L929，分別加入1 mL 25%、50%、100%浸提液，培養(yǎng)24 h。同時(shí)設(shè)立對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)分組為：Ⅰ陰性對(duì)照組（RPMI-1640培養(yǎng)的L929細(xì)胞）；Ⅱ含鈦合金組；Ⅲ軟磁合金組；Ⅳ鈷鉻合金組；V陽(yáng)性對(duì)照組（100 μg/mL絲裂霉素處理）。

1.2.3細(xì)胞凋亡的檢測(cè)：培養(yǎng)板在浸泡24 h后取出，使用0.25%的胰蛋白酶消化l min后將液體制成細(xì)胞懸液，收集于流式管中，使用1000 r/mim的離心機(jī)離心5 min，在使用PBS沖洗2次，去上清，加入l mL碘化丙錠（propidium iodide，PI）混合染色液，混勻，避光30 min。與中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬一院中心實(shí)驗(yàn)室合作，對(duì)樣本進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。使用通過(guò)cellguest軟件分析凋亡率。

2 結(jié) 果

各實(shí)驗(yàn)組的凋亡率，見(jiàn)表1。

表1　L929細(xì)胞凋亡率（%）

3 討 論

根據(jù)ISO相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)［5］，對(duì)于目前應(yīng)用于人體的材料，必須進(jìn)行離體生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)其生物相容性。評(píng)價(jià)生物相容性的一個(gè)關(guān)鍵性指標(biāo)為維持進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)［6］。研究發(fā)現(xiàn)磁性附著體中軟磁合金具有極微弱的細(xì)胞毒性，對(duì)于其引起的細(xì)胞凋亡，國(guó)內(nèi)外研究較少。

本實(shí)驗(yàn)的試驗(yàn)方法主要采取PI染色法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)。主要是檢測(cè)小鼠成纖維細(xì)胞L929在磁性附著體中軟磁合金的浸泡液中的凋亡情況。同時(shí)選取目前已知的生物相容性較高的含鈦合金及鈷鉻合金作為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：小鼠L929細(xì)胞在三種不同濃度的軟磁合金浸提液中均可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。三種浸提液中的細(xì)胞凋亡率有差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。并且凋亡率與濃度之間存在正相關(guān)。相同濃度的含鈦合金、鈷鉻合金、軟磁合金浸提液引起的L929細(xì)胞凋亡率之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。由于含鈦合金、鈷鉻合在臨床上引用較為廣泛，因此，細(xì)胞凋亡率與其沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的軟磁合金也可安全的應(yīng)用于臨床。

綜上所述，本試驗(yàn)為可以證實(shí)磁性附著體中軟磁合金符合臨床應(yīng)用的生物相容性，可以廣范應(yīng)用于臨床。

參考文獻(xiàn)

［1］ Hideo Matsumura，Koji Kawasaki.Magnetically connected removable sectional denture for a maxillary defect with severe undercut:A clinical report［J］.J Prosthet Dent，2000，84（1）:22-26.

［2］ Ikuya Watanaba，Yasuhiro Tanaka，Chikahiro Ohkubo，et al.Application of cast magnetic attachments to sectional complete

中圖分類號(hào)：R783

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1671-8194（2016）04-0030-02

Induction of Apoptosis by Magnetic Attachment in the Mouse Fibroblast L929 Cells

YU Xue-yin
（Department of Stomatology， the Seventh People′s Hospital of Shenyang， Shenyang 110003， China）

［Abstract］Objective To evaluate the biocompatibility of stainless steel which will be used in the new magnetic attachment by apoptosis assay for the mouse fbroblast L929 cells. Methods The cells are cultured in extracting liquids of different experimental materials which concentration is 25%， 50%， 100% for 24 hours， then determine the apoptotic rate of the cells. Results The apoptotic rate of the same material raise along with the improvement of the density. There is no difference among the materials （P＞0.05）. Conclusion The soft magnetic stainless steel meets the requirement for clinical application.

［Key words］Magnetic attachment； Biocompatibility； Apoptosis